СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ВИРУСОВ ПОЛИОМИЕЛИТА В ВОДЕ ВОДОЕМОВ КАРАГАНДИНСКОЙ ОБЛАСТИ

Баяндинова Мария Анатольевна

студентка 5 курса, биолого-географического факультета, КарГУ им. академика Букетова Е.А., г. Караганда

E-mail:m.bayandinova@mail.ru

Коваленко Ольга Леонидовна

научный руководитель, канд. биол. наук, доцент, КарГУ им. академика Букетова Е.А.,г. Караганда

Актуальность.

Полиомиелит — болезнь, которую вызывают вирусы. Их несколько видов — так называемые энтеровирусы, то есть кишечные вирусы. Они очень распространены в окружающей природе. Кроме полиомиелита эта группа вызывает и массу других заболеваний, таких как гепатит А, вирусные инфекции КОКСАКИ и ЕСНО [2, с. 25].

Однако, полиомиелит из них всех оставляет наиболее тяжелые последствия для будущего, характеризуется воспалительными заболеваниями слизистой оболочки полости рта и кишечника. Но самое главное — полиомиелит очень часто поражает нервную систему малыша, вызывая у него вялые или атрофические параличи, делающие его инвалидом на всю оставшуюся жизнь. Во время допрививочной эпохи таких примеров были сотни тысяч, полиомиелит имел характер эпидемий и оставлял после себя тысячи искалеченных детишек. Полиомиелит —грозное заболевание, часто заканчивающееся глубокой инвалидизацией. Вспомните хотя бы президента Рузвельта. Вирус проникает через слизистые, попадает в мозг и разрушает двигательные центры. Это приводит к различной степени выраженности паралича, а если будут поражены моторные зоны, управляющие дыхательными мышцами, то и к смерти [3, с. 85].

В советское время благодаря широчайшей вакцинации эта болезнь была практически побеждена. Последний случай полиомиелита в Казахстане был зарегистрирован в 1995 году, а с 2002 года наша страна была сертифицирована ВОЗ как страна, свободная от полиомиелита [7].

От больного человека энтеровирус может попасть в окружающую среду в том числе и в сточную воду, что является средством переноса инфекции поэтому сточные воды, поступающие на очистные сооружения, исследуют с целью изучения спектра энтеровирусов и, прежде всего, вирусов полиомиелита, циркулирующих среди населения и по эпидемиологическим показаниям [4, с. 125].

Согласно действующим в нашей стране нормативным документам водно-санитарного законодательства, эпидемическая безопасность водных объектов в отношении кишечных вирусных инфекций обеспечивается отсутствием патогенных вирусов в воде [7].

Для выделения вирусов используют культуры клеток, лабораторных животных, эмбрионы кур. Процесс длительный, иногда требующий проведения нескольких пассажей [5, с. 70].

На основании выше сказанного, целью нашего исследования является изучение сравнительных методов оценки выделения энтеровирусов в воде водоемов Карагандинской области.

Материалы и методы исследований.

Для проведения исследования мы изучали воду из следующих водных объектов: общегородской канализационной коллектор (сточная вода); поверхностные водоемы, используемые в рекреационных целях; плавательные бассейны; подземные водоисточники; централизованные водопроводы хозяйственно-питьевое водоснабжение; объекты нецентрализованного водоснабжения. Точки забора и количество проб указаны в таблице 1.

Вода поверхности водоёмов исследуются на наличие вирусного загрязнения при выборе водоёма в качестве источника хозяйственно-питьевого водоснабжения и при использовании его в рекреационных целях, а также по эпидемиологическим показаниям в соответствии с приказом и.о. Министра здравоохранения РК от 28 июня 2004 года № 506 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил и норм по хозяйственно-питьевому водоснабжению и местам культурно-бытового водопользования «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию и эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов», зарегистрированного в Реестре государственной регистрации № 3074 [7].

Таблица1.

Точки забора проб на энтеровирусы Карагандинской области

Сущность метода обнаружения кишечных вирусов в исследуемом объеме воды заключается в предварительном концентрировании их путем осаждения сернокислым алюминием обработка воды открытых водоемов, концентрация вирусных агентов из проб сточных вод на полимере-полиэтиленгликоле с молекулярным весом — 6000 и последующем вирусологическом исследовании концентрата.

Изучение энтеровирусов в культуре клеток и методом ПЦР проводили по общепринятым методикам.

Выделение и идентификация вирусов на культуре клеток.

Энтеровирусы идентифицируют в реакции нейтрализации инфекционности. с помощью диагностических типоспецифических иммунных сывороток. В опыте по нейтрализации вирусную суспензию, содержащую 100 ТЦД_50, смешивают в равном объёме с диагностическими сыворотками. После инкубации в течение 1—2 часов при 37⁰С, смесь вводят в культуры клеток. Иммунная сыворотка, которая предотвращает развитие ЦПЭ, указывает на тип вируса [5, с. 78].

Выделение энтеровирусов методом ПЦР.

ОТ-ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:

• Экстракция (выделение) РНК из исследуемых образцов.
• Проведение реакции обратной транскрипции.
• Проведение амплификации.
• Флуоресцентная детекция продуктов амплификации по «конечной точке».

Интерпретация результатов [6, с. 43].

Исследования были выполнены на базе Вирусологической лаборатории Карагандинского областного центра санитарно-эпидемиологической экспертизы в 2010 году.

Результаты исследований.

Энтеровирусы человека (сем. Picornaviridae, род Enterovirus), характеризуются иммунологическим и генетическим многообразием. Подавляющее большинство энтеровирусов человека являются патогенными, вызывая заболевания, полиморфные по клиническим проявлениям (полиомиелит, нейропатии, серозный менингит, миокардиты, гастроэнтерит, респираторные заболевания, конъюнктивиты и т. д.) и различные по тяжести течения. Многие заболевания энтеровирусной природы представляют важную проблему здравоохранения, некоторые из них имеют тенденцию к эпидемическому распространению [1, с. 3].

В результате проведения исследования проб воды из выбранных источников методом посева на культуру клеток нами были получены следующие результаты (таблица 2).

Таблица 2.

 Результаты исследования на энтеровирусы Карагандинской области за 2010 год методом культуры клеток.

Из таблицы 2 видно, что: в воде бассейнов, фонтанов, открытых водоемов вирусы не обнаружены, а в воде сточных вод выделено 5 штаммов вируса полиомиелита — 1 штамм Рm1, 3 штамма Рm2 и 1 штамм Рm3;

Таким образом, методом культуры клеток в сточных водах выделено 5 штаммов полиомиелита, что составляет 4,9 % от общего числа проб.

В результате проведения исследования проб воды из выбранных источников методом ПЦР нами были получены следующие результаты (таблица 3).

Из таблицы 3 видно, что в воде бассейнов, фонтанов, открытых водоемов вирусы не обнаружены, а в воде сточных вод выделено 9 штаммов вируса полиомиелита — 2 штамма Рm1. 5 штамма Рm2, 2 штамма Рm3 (Pm1,2,3 — полиомиелит типа 1, 2, 3);

Таблица 3.

Результаты исследования на энтеровирусы Карагандинской области за 2010 год методом ПЦР.

Таким образом, метод ПЦР в сточных водах выделено 9 штаммов полиомиелита, что составляет 8,8 % от общего числа проб.

Рисунок 1. Число штаммов энтеровирусов, выделенных методом посева на культуру клеток и методом ПЦР

В своих исследованиях мы сравнили два существующих метода лабораторного подтверждения инфекции — выделение вируса в культуре клеток и обнаружение с помощью ПЦР. Выделение вируса, хотя и требует большего времени, дает наиболее однозначный ответ на вопрос об этиологии заболевания и позволяет использовать выделенный вирус для последующих эпидемиологических исследований. ПЦР обладает большей чувствительностью, большей быстротой и позволяет выявлять вирусы, не размножающиеся в культуре клеток. В результате проведенных нами исследований было показано, что метод ПЦР дает более точный результат (рисунок 1). Сравнивая полученные результаты видно, что выявляемость энтеровирусов увеличилась на 80 %.

Таким образом, целесообразно использовать именно метод ПЦР для точной и быстрой идентификации вирусов полиомиелита в воде открытых водоемом.

Список литературы:

1. Амвросьева Т.В., Вотяков В.И., Дьяконова О.В., Поклонская Н.В., Богуш З.Ф., Казинец О.Н., Титов Л.П. Современные подходы к изучению и оценке вирусного загрязнения питьевых вод // Гигиена и санитария, 2002, № 1, с. 125.
2. Букринская А.Г. Вирусология. — М.: Медицина, 1986. — 336 с.
3. Ворошилова М.К. Энтеровирусные инфекции человека. М.: Медицина, 1979, 360 с.
4. Голубев Д.Б., Соминина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. – Л.: Медицина, 1976, 224 с.
5. Григорьева Л.В. Санитарная бактериология и вирусология водоемов. М., Медицина, 1975, 182 с.
6. Рекомендации по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде. Женева, 2003 г, 112 с.
7. Методы лабораторной диагностики полиомиелита и других энтеровирусных инфекций. Методические рекомендации. Астана, 2010.