ВЛИЯНИЕ  ЭКСТРАКТА  КОРНЯ  СОЛОДКИ  НА  КАНЦЕРОГЕНЕЗ  ПЕЧЕНИ,  ИНДУЦИРОВАННЫЙ  У  КРЫС  N-НИТРОЗОДИЭТИЛАМИНОМ

Цопанов  Уырызмаг  Владимирович

Годзоева  Алина  Олеговна

студенты  4  курса  лечебного  факультета,  кафедра  фармакологии  с  клинической  фармакологией  СОГМА,  РФ,  г.  Владикавказ

E-mail:  kokoevlev15@mail.ru

Болиева  Лаура  Зелимхановна

научный  руководитель,  д-р  мед.  наук,  профессор,  зав.  каф.  фармакологии  с  клинической  фармакологией  СОГМА,  РФ,  г.  Владикавказ

Резюме.  Изучалось  влияние  экстракта  корня  солодки  на  канцерогенез  печени  и  пищевода,  индуцированный  у  крыс  N-нитрозодиэтиламином  (НДЭА).  В  условиях  проведенного  эксперимента  экстракт  корня  солодки  сухой  эффективно  ингибировал  процесс  канцерогенеза,  что  проявилось  в  статистически  достоверном  снижении  частоты  возникновения  неопластических  изменений  (с  96,2  %  до  60,7  %),  множественности  опухолей  (с  5,3  до  2,8  опухолей/крысу)  и  в  более  поздней  малигнизации  в  ткани  печени.  Каких-либо  неблагоприятных  реакций  при  применении  исследуемого  вещества  не  было  выявлено.  Полученные  данные  свидетельствуют  о  наличии  у  экстракта  корня  солодки  химиопрофилактической  активности  в  отношении  злокачественных  новообразований  печени.

Ключевые  слова:  экстракт  корня  солодки,  канцерогенез  печени,  N-нитрозодиэтиламин,  химиопрофилактика.

Введение.  Химиопрофилактика  —  самостоятельное  и  перспективное  направление  профилактики  злокачественных  новообразований,  целью  которого  является  идентификация  и  внедрение  в  клиническую  практику  биологически  активных  веществ  с  антиканцерогенным  действием,  способных  ингибировать  процесс  канцерогенеза  на  разных  стадиях  его  развития  [7,  с.  49].  Основным  требованием  к  потенциальному  средству  профилактики  рака  является  безопасность  —  «идеальное»  химиопрофилактическое  средство  наряду  с  высокой  активностью  должно  обладать  низкой  токсичностью,  что  необходимо  учитывать  при  длительном  применении  [10,  с.  525].  В  этой  связи,  среди  относительно  небольшого  числа  средств,  антибластомогенный  эффект  которых  можно  считать  к  настоящему  времени  в  той  или  иной  степени  доказанным,  значительный  интерес  вызывают  соединения  растительного  происхождения  [1,  с.  534]  но  до  настоящего  времени  этот  источник  используется  недостаточно.  В  качестве  потенциального  химиопрофилактического  средства  наше  внимание  привлекла  солодка,  использование  которой  в  лечебных  целях  насчитывает  тысячелетия.  На  востоке  лакричный  корень  имел  статус  «чудесного»:  его  прописывали  для  лечения  заболеваний  органов  дыхания,  пищеварения,  почек,  нервной  системы,  как  противовоспалительное  средство  при  инфекционных  заболеваниях,  для  нейтрализации  действия  ядов  и  др.  Несмотря  на  прогресс  фармации  и  медицины,  препараты  солодки  сохранили  свои  позиции  в  терапии  целого  ряда  заболеваний  и  в  наши  дни  [6,  с.  483].  Что  касается  антиканцерогенной  активности,  в  литературе  имеются  данные  о  защитном  действии  экстракта  корня  солодки  или  химически  чистых  соединений,  выделенных  из  солодки,  в  отношении  злокачественных  новообразований  легких,  желудка,  эндометрия,  кишечника,  кожи  и  ряда  других  локализаций  [8,  с.  40.].  Однако,  эти  исследования  немногочисленны,  результаты  требуют  дальнейшего  уточнения,  при  этом  предпочтительными  являются  экспериментальные  исследования,  проведенные  in  vivo,  в  моделях  канцерогенеза,  максимально  приближенных  к  реальным  условиям  опухолевого  роста  у  человека 

Целью  настоящего  исследования  явилось  изучение  влияния  экстракта  корня  солодки  на  канцерогенез  печени,  индуцированный  у  крыс  N-нитрозодиэтиламином  (НДЭА).

Материалы  и  методы  исследования.

Эксперимент  проведен  на  60  крысах-самцах  линии  Вистар  с  исходной  массой  130—150  г.  Животные  содержались  по  6  крыс  в  клетке  в  стандартных  условиях  при  температуре  20—22  ºС  и  естественном  световом  режиме,  на  стандартном  рационе  вивария  и  получали  питьевую  воду  без  ограничений.  Все  манипуляции  с  животными  проводились  в  соответствии  с  Правилами  Европейской  конвенции  по  защите  позвоночных  животных,  используемых  для  экспериментальных  и  иных  научных  целей  (ETSN  123,  Страсбург,  18  марта  1986)  [5,  с.  4].  Опухоли  печени  индуцировали  по  описанной  методике  [4,  с.  20]  добавлением  к  питьевой  воде  НДЭА  в  концентрации  100  мг/л  в  течение  4  месяцев.  Животные  были  разделены  на  2  группы:  30  крыс  1-й  группы  служили  контролем  и  получали  только  канцероген;  30  крыс  2-й  группы  получали  дополнительно  экстракт  корня  солодки  сухой  (ООО  «Хармс»,  г.  Санкт-Петербург)  по  100  мг/кг  корма  на  протяжении  36  недель.  Основанием  для  выбора  доз  исследуемых  препаратов  явились  данные  литературы,  согласно  которым  экстракт  корня  солодки  в  указанной  дозе  проявлял  максимальную  антиканцерогенную  активность  на  моделях  рака  толстой  кишки,  печени,  мочевого  пузыря  и  молочной  железы  [2,  с.  32].  Препарат  равномерно  смешивался  с  творогом  и  вводился  в  рацион  крыс  опытной  группы,  начиная  с  первого  дня  применения  НДЭА  и  до  конца  эксперимента,  продолжительность  которого  составила  36  недель.  Корм,  содержащий  исследуемые  вещества,  поедался  животными  полностью.  Крыс,  доживших  до  окончания  опыта,  умерщвляли  парами  фторотана.  При  вскрытии  проводили  макроскопическую  оценку  печени  по  шкале  условных  баллов:  0  —  печень  без  изменений;  1  —  поверхность  местами  неоднородного  цвета,  очаговые  изменения  отсутствуют;  2  —  единичные  опухолевые  узелки  диаметром  0,1—0,2  см;  3  —  множественные  узелки  диаметром  0,1—0,2  см  или  единичные  узелки  диаметром  0,3-0,5  см;  4  –  множественные  узелки  диаметром  0,3—0,5  см  или  единичные  узлы  диаметром  0,6-1,0  см;  5  –  множественные  узлы  диаметром  0,6—1,0  см  или  единичные  узлы  диаметром  более  1  см;  6  —  множественные  узлы  диаметром  более  1  см;  7  —  опухоли  диаметром  более  3  см,  преобладает  опухолевая  ткань.  Материал,  взятый  для  гистологического  исследования,  фиксировали  в  10  %  растворе  формалина,  заливали  в  парафин,  срезы  окрашивали  гематоксилином  и  эозином.  При  анализе  микроскопических  изменений  в  печени  основывались  на  классификации  опухолей  лабораторных  животных,  предложенной  Международным  агентством  по  изучению  рака  [9,  с.  739].  Микроскопическую  оценку  неопластических  изменений  проводили  по  3-балльной  шкале  условных  единиц:  ранние  неопластические  изменения  оценивали  в  1  балл,  доброкачественные  опухоли  в  2  балла,  злокачественные  опухоли  в  3  балла. 

Эффективность  модифицирующего  воздействия  на  канцерогенез  печени  оценивали  по  изменению  количества  крыс  с  неопластическими  процессами,  индекса  множественности  новообразований,  среднего  балла  макро-  и  микроскопических  изменений  в  опытной  группе  животных  по  сравнению  с  контролем.  Результаты  исследований  обрабатывали  статистически.  Для  оценки  степени  достоверности  полученных  различий  в  сравниваемых  группах  пользовались  критериями  t  Стьюдента,  Манна-Уитни  и  χ². 

Результаты  исследования  и  обсуждение.

При  изучении  влияния  экстракта  корня  солодки  на  канцерогенез  печени  получены  следующие  данные  (табл.  1).

В  контрольной  группе  неопластические  изменения  в  ткани  печени  обнаружены  у  25  крыс,  что  составило  96,2  %  от  эффективного  числа  животных,  макроскопическая  оценка  составила  2,96  баллов.  Первая  крыса  с  предопухолевыми  изменениями  в  печени  пала  на  14-й  неделе  эксперимента.  Микроскопическое  изучение  ткани  печени  показало  наличие  гиперплазии  протоков  и  очагов  эозинофильно-  и  базофильноклеточной  гиперплазии  гепатоцитов.  Злокачественные  новообразования  в  условиях  данного  эксперимента  впервые  идентифицированы  у  крысы,  павшей  на  21-й  неделе  опыта:  высокодифференцированный  гепатоцеллюлярный  рак,  развившийся  на  фоне  цирроза  и  гиперплазии  гепатоцитов.  Суммарно  при  морфологическом  анализе  неопластических  изменений  у  15  крыс  контрольной  группы  идентифицирован  высоко-,  умеренно-  или  низкодифференцированный  гепатоцеллюлярный  рак,  у  3  крыс  холангиоцеллюлярный  рак,  у  4  —  гепатоцеллюлярная  аденома.  Эти  процессы  развивались  на  фоне  диффузных  и  очаговых  гиперплазий  гепатоцитов  и/или  протоков,  а  также  цирротических  процессов  разной  степени  выраженности.

В  группе  животных,  получавших  экстракт  корня  солодки,  неопластические  изменения  ткани  печени  обнаружены  у  17  (60,7  %)  крыс.  Микроскопический  анализ  гистологического  материала  показал,  что  в  данной  группе  в  4  случаях  имел  место  гепатоцеллюлярный  рак,  в  2  —  гепатоцеллюлярная  аденома,  в  1  случае  холангиома.  У  всех  животных  в  ткани  печени  выявлены  диффузные  или  очаговые  гиперплазии  гепатоцитов  и/или  протоков,  в  пяти  случаях  гиперплазии  протоков  имели  кистозное  строение.  Отмечено  статистически  достоверное  снижение  среднего  балла  макро-  и  микроскопических  изменений  в  ткани  печени  по  сравнению  с  контролем.

Таблица  1.

Влияние  экстракта  корня  солодки  (ЭКС)  на  канцерогенез  печени,  индуцированный  у  крыс  НДЭА

*  —  р<0,001  —  при  сравнении  с  контролем

На  протяжении  всего  эксперимента  каких-либо  побочных  или  токсических  эффектов  экстракта  корня  солодки  нами  выявлено  не  было. 

Таким  образом,  в  условиях  проведенного  эксперимента  влияние  экстракта  корня  солодки  на  канцерогенез  печени  проявилось  в  достоверном  снижении  частоты  возникновения  неопластических  изменений  и  множественности  новообразований,  развитием  более  поздней  малигнизации  в  ткани  печени. 

Механизмы,  лежащие  в  основе  антиканцерогенной  активности  экстракта  корня  солодки,  изучены  недостаточно.  Однако  известно,  что  входящие  в  состав  солодкового  корня  компоненты  могут  блокировать  инициированное  канцерогеном  повреждение  ДНК,  проявлять  высокую  антиоксидантную  активность  [3,  с.  67].  Возможным  механизмом  антиканцерогенного  действия  на  этапе  промоции  канцерогенеза  является  способность  подавлять  активность  фермента  циклооксигеназы  (ЦОГ)  и,  соответственно,  блокировать  синтез  простагландинов  из  арахидоновой  кислоты.  Интересным  представляется  установленный  факт  понижения  экспрессии  антиапоптотического  белка  bcl-2  и  стимуляции  апоптоза  опухолевых  клеток.

Таким  образом,  результаты  проведенного  исследования  свидетельствуют  о  наличии  у  экстракта  корня  солодки  антиканцерогенной  активности,  что  позволяет  сделать  вывод  о  необходимости  его  дальнейшего  изучения  и  внедрение  в  качестве  средства  химиопрофилактики  злокачественных  новообразований.

Список  литературы:

1. Беспалов  В.Г.,  Давыдов  В.В.  Лимаренко  А.Ю.  и  др.//  Бюл.  Экспер.биол.  —  1993.  —  Т.  116,  —  №  11.  —С.  534—536.
2. Болиева  Л.З.,  Басиева  И.И.,  Чочиева  А.Р.  изучение  химиопрофилактической  активности  корня  солодки  в  эксперименте.//  Устойчивое  развитий  горных  территорий.  —  2011.  —  №  2.  —  С.  31—34.
3. Денисова  С.Б,  Карачурина  Л.Т,  Муринов  Ю.И.,  Хайруллина  В.Р..  Антиоксидантное  и  гепатозащитное  действие  флавоноидов  корня  солодки.//  II  Всероссийская  конференция  Химия  и  технология  растительных  веществ,  Казань,  24—27  июня  2002  г  —  С.  67.
4. Джиоев  Ф.К.  О  влиянии  некоторых  адаптогенов  на  экспериментальный  канцерогенез  //  Автореферат  дисс.  канд.  мед.  наук.  Л.  1966.  —  20  с.
5. Европейская  Конвенция  о  защите  позвоночных  животных,  используемых  для  экспериментов  или  в  иных  научных  целях  Страсбург,  18  марта  1986  г.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://ecologysite.ru/norms/item/569  (дата  обращения:14.04.2014г.)
6. Пилат  Т.П.,  Иванов  А.А.  Биологически  активные  добавки  к  пище  (теория,  производство,  применение).  М.:  Авваллон,  2002.  —  710  с.  —  С.  483.
7. Разина  Т.Г.  Фитопрепараты  и  биологически  активные  вещества  лекарственных  растений  в  комплексной  терапии  злокачественных  новообразований  (экспериментальное  исследование):  автореф.  дис.  на  соиск.  учен.  степ.  д-ра  биол.  наук:  спец.  14.00.25  /  Разина  Татьяна  Георгиевна;  НИИ  фармакологии  Томского  научного  центра  СО  РАМН.  Томск:  2006.
8. Степанова  Э.Ф.,  Сам  пи  ев  А.М.  Состояние  исследований  и  перспективы  использования  травы  солодки  голой  (обзор)  //Химико-фармацевтический  журн.  —  1997.  —  №  10.  —  С.  39—43.
9. Pathology  of  Tumors  in  Laboratory  Animals.  Vol.  1.  Tumors  of  the  Rat  //  Eds.  V.S.  Turusov.  IARC  Sci.  Publ.  №  99.  Lyon:  IARC.  1990.  —  739  p.
10. Sporn  M.B.,  Suh  N.  Chemoprevention  of  cancer  //  Carcinogenesis.  —  2000.  —  Vol.  21б,  —  №  3.  —  P.  525—530.