Телефон: +7 (383)-202-16-86

Статья опубликована в рамках: LIX Международной научно-практической конференции «Научное сообщество студентов XXI столетия. ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ» (Россия, г. Новосибирск, 11 декабря 2017 г.)

Наука: Химия

Скачать книгу(-и): Сборник статей конференции

Библиографическое описание:
Хандогин А.В., Харькова М.С. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ПО БИУРЕТОВОЙ РЕАКЦИИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ // Научное сообщество студентов XXI столетия. ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ: сб. ст. по мат. LIX междунар. студ. науч.-практ. конф. № 12(58). URL: https://sibac.info/archive/nature/12(58).pdf (дата обращения: 02.07.2020)
Проголосовать за статью
Конференция завершена
Эта статья набрала 2 голоса
Дипломы участников
У данной статьи нет
дипломов

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ПО БИУРЕТОВОЙ РЕАКЦИИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Хандогин Андрей Вячеславович

студент, кафедры химии БГУ,

РФ. г. Брянск

Харькова Марина Сергеевна

студент, кафедры химии БГУ,

РФ. г. Брянск

Научный руководитель Белов Сергей Петрович

канд. хим. наук, доцент БГУ,

РФ, г. Брянск

Белки играют важную роль, поскольку являются самой главной составной частью клеток всех органов и тканей организмов. В литературе описаны различные способы качественного и количественного определения белков, имеющие разную степень погрешности и сложности исполнения. Поэтому количественное определение белка экспрессными, точными и дешевыми методами является актуальной задачей аналитических исследований. В современной аналитической химии сегодня большое внимание уделяется таким метрологическим оценки методов анализа таким как: открываемый минимум, абсолютная и относительная погрешности измерения и их изменение при модификации методик, которые часто используются как в научных, так и в заводских лабораториях.

Цель работы заключается в осуществлении метрологической оценки количественного определения белка при помощи биуретовой реакции, ее модификации.

Определение открываемого минимума.

Биуретовая реакция является цветной универсальной реакцией на белки, дающей фиолетовый комплекс двухвалетной меди с атомами, входящих в пептидную связь белка [3, с 4].

Измерение открываемого минимума биуретовой реакции проводилось методом разбавления стандартного раствора белка с фиксированием значений оптической плотности на спектрофотометре ССП 310 при 540 нм. Эксперимент продолжался до сравнивания значений оптической плотности нулевого и исследуемого раствора. Результаты опыта представлены на рисунке 1.

 

Рисунок 1. Открываемый минимум биуретовой реакции

 

Открываемый минимум биуретовой реакции равен 0,016 мг/мл.

Сравнение модифицированной и классической методик. Модификация методики приготовления биуретового реактива заключалась в отсутствии KI, в то время как «классический» биуретовый реактив готовится с добавлением йодистого калия. Сравнение классической и модифицированной методики проводилось параллельно с использованием стандартного раствора белка и добавлением его в исследуемые растворы с концентрацией 2 мг/мл. Оптические плотности этих растворов попарно измерялись на спектрофотометре ССП 310 при длине волны равной 540 нм. Спустя некоторые промежутки времени растворы обновлялись: добавлялись новые порции обычного и модифицированного биуретового реактива к стандартному раствору белка. Проведенные семь повторений с экспозицией по 260 мин, позволили создать выборочные средние значения изменений концентраций белка для двух методик и рассчитать для каждого ее стандартного отклонения от добавленной при каждом опыте концентрации белка. Так же были проведены сравнения методик по критерию Фишера: дисперсии концентраций для каждого отрезка времени двух методик воспроизводимы и не выходят в критическую область. Результаты эксперимента представлены на рисунке 2.

 

Рисунок 2. Изменение концентрации яичного альбумина от времени

 

На рисунке 2 представлено выборочное среднее изменение концентраций белка, с использованием разных методик, относительно времени получения оптических плотностей. На нем так же нанесены стандартные отклонения значений каждой из методик: стандартное отклонение классического метода (S с KI) равно ±0,0137 мг/мл, в то время как стандартное отклонение модифицированной методики (S без KI) равно ±0,0246 мг/мл [1, c. 17].

Устойчивость калибровочной зависимости. В продолжение исследования были выявлены метрологические характеристики устойчивости калибровочной зависимости биуретовой реакции во времени. Была составлена калибровочная зависимость на спектрофотометре ССП 310 при длине волны 540 нм, которая выдерживалась в течение 480 мин. Используемые концентрации в калибровочной зависимости: 0,25; 0,75; 1,25 и 1,75 мг/мл. Образцы при этом не обновлялись, фиксировались только оптические плотности растворов относительно времени. На основании полученных значений, которые представлены на рисунке 3, рассчитаны метрологические характеристики (s-дисперсии, квантили t-распределения, уравнения линии тренда). Для наглядности разброса значений был построен «коридор ошибок» для каждой концентрации белка, равной оптическим плотностям калибровочной прямой. «Коридор ошибок» представлен на рисунке 4 [1, c. 55].

 

Рисунок 3. Зависимость оптической плотности растворов белка от времени

 

Рисунок 4. Коридор ошибок

 

В ходе исследования было установлено, что открываемый минимум биуретового спектрофотометрического метода определения без учета инструментальной погрешности равен 0,016 мг/мл.

Проведено сравнение стандартных отклонений каждой из методик: стандартное отклонение классического метода (S с KI) равно ±0,0137 мг/мл, в то время как стандартное отклонение модифицированной методики (S без KI) равно ±0,0246 мг/мл. Исходя из этого, точность модификации метода хуже в сравнении с точностью распределения значений классической методики приготовления биуретового реактива.

Для больших концентраций для уменьшения систематической ошибки необходима выдержка калибровочной зависимости в течении одного часа после приготовления биуретового реактива.

Увеличение концентрации яичного альбумина от нулевой точки калибровочного графика с увеличением экспозиции растет систематическая ошибка калибровочной зависимости.

 

Список литературы:

  1. Беляев А.П. Физическая и коллоидная химия. Практикум обработки экспериментальных результатов: учебное пособие. M.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. 112 с.
  2. Друцы В.Л., Королева О.Н. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991, 544 с.
  3. Петров О.А., Пуховская С.Г. Практикум по биохимии: методические указания. Иваново: Ивановский государственный химико-технологический университет, 2006. - 60 с.
  4. Северин С.Е., Соловьева Г.А. Практикум по биохимии. М.: Издательство МГУ, 1989. - 509 с.
  5. Сиянова Н.С., Невзорова Т.А., Неуструева С.Н. Методическое руководство для практикума по биохимии: учебно-методическое руководство. Казань: КГУ, 2008. - 46 с.
Проголосовать за статью
Конференция завершена
Эта статья набрала 2 голоса
Дипломы участников
У данной статьи нет
дипломов

Оставить комментарий

Форма обратной связи о взаимодействии с сайтом