ИЗУЧЕНИЕ  ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО  И  РАЗДРОЖАЮЩЕГО  ДЕЙСТВИЯ  ПРОБИОТИЧЕСКОЙ  КОРМОВОЙ  ДОБАВКИ

Гнеуш  Анна  Николаевна

аспирант  кафедры  биотехнологии,  биохимии  и  биофизики

Кубанского  государственного  аграрного  университета,  РФ,  г.  Краснодар

E-mail:  Gneush.anna@yandex.ru

STYDY  OF  TOXICOLOGICAL  AND  IRRITANT  EFFECT  OF  PROBIOTIC  FEED  ADDITIVE

Gneush  Anna

postgraduate  student  of  the  Department  of  Biotechnology.  Biochemistry  and  Biophysics  of  the  Kuban  State  Agrarian  University,  Russia,  Krasnodar

АННОТАЦИЯ

В  данной  работе  представлены  результаты  по  изучению  токсикологического  и  раздражающего  действия  пробиотической  добавки  полученой  на  основе  штамма  микроскопического  гриба  Trichoderma  lignorum  на  простейших  и  лабораторных  животных. 

ABSTRACT

This  article  presents  the  resalts  of  stucly  toxicological  and  irritating  effect  probiotic  supplements  obtained  on  the  basis  of  the  microscopic  strain  sungus  Tr.  Lignorum  on  the  simples  and  laboratory  animals.

Ключевые  слова:  Кормовая  добавка;  микроскопический  гриб;  микотоксикозы;  токсичность;  стилонихии,  сохранность.

Keywords:  Feed  additive,  microscopic  fungus;  mycotoxicoses;  toxicity;  stylonychia,  safety.

Активное  применение  пробиотических  добавок  и  признание  безальтернативности,  неоспоримости  их  применения  в  связи  с  их  функциональными  свойствами  начинается  с  2003  года,  когда  ЕС  принимает  закон  о  запрете  с  1  января  2006  г.  кормовых  антибиотиков.  Ожидая  этот  запрет,  в  2004  и  2005  г.  большинство  Европейских  производителей  кормов  стали  искать  замену  антибиотическим  стимуляторам  роста  в  составе  своих  комбикормов,  сравнивая  результаты  применения  антибиотиков  и  их  альтернативных  аналогов  на  животных  и  птице  [1;  3;  4;  7].

Достаточно  популярна  проблема  минимизации  применения  антибиотиков,  но  кроме  нее  и  остра  проблема  микотоксикозов  —  специфических  заболеваний,  развивающихся  в  результате  поедания  животными  кормов  содержащих  токсические  метаболиты  жизнедеятельности  микроскопических  патогенных  грибов.  Они  оказывают  негативное  влияние  как  на  потребление  корма,  здоровье  и  продуктивность  животного,  так  и  на  здоровье  человека,  обладая  мутагенными  и  канцерогенными  свойствами,  что  влечет  за  собой  нанесение  значительного  экономического  ущерба.  В  соответствии  с  этим  сейчас  для  производства  кормов  и  кормовых  добавок,  обеспечивающих  получение  безопасной  и  экономически  выгодной  продукции  животноводства,  актуально  использование  не  токсического  кормового  сырья  и  применение  обогащенных  компонентов  повышающих  эко-безопасность  комбикормов  [2;  5;  8].

Для  внедрения  в  производства  любого  препарата  или  кормовой  добавки  необходимо  его  детальное  изучение  и  одним  из  показателей  качества  является  токсичность.  В  соответствии  с  этим  целью  данной  работы  являлось  изучение  токсического  и  раздражающего  действия  разработанной  пробиотической  добавки  [6].

Материал  и  методы.  Опыт  проводился  в  виварии  факультета  ветеринарной  медицины,  на  кафедре  биотехнологии,  биохимии  и  биофизики  Кубанского  государственного  аграрного  университета.

Исследуемая  пробиотическая  добавка  получена  на  основе  штамма  микроскопического  гриба  Trichoderma  lignorum.  В  качестве  носителя  использовалась  лузга  подсолнечника,  на  которой  выращивались  пищевые  грибы.  Добавка  предназначена  для  сельскохозяйственной  птицы.  Культура  микроскопического  гриба  Trichoderma  lignorum  получена  из  Всероссийской  коллекции  промышленных  микроорганизмов  (ВКПМ).

Токсикологическая  оценка  добавки  определялась  экспресс-методом  на  стилонихиях,  острая  токсичность  на  мышах  и  кроликах  в  соответствии  с  ГОСТ  Р  52337-2005,  по  условиям  которого  корма,  отнесенные  к  нетоксичным,  можно  использовать  по  назначению.

В  эксперименте  использовано  30  беспородных  мышей  с  начальной  массой  тела  16—25  г  (возраст  2,5—3,0  мес.),  3  белых  кролика  (живая  масса  2—2,5  кг),  выдержанные  в  течение  5  дней  в  стандартных  условиях  в  целях  акклиматизации.

Результаты  исследований. 

Культивирование  стилонихий  и  биотестирование  осуществляют  в  отдельном  помещении,  свободном  от  химических  токсических  реактивов,  особенно  от  их  летучих  соединений,  а  также  в  химически  чистой  посуде.  Тестирование  проводилось  на  суточной  культуре  стилонихий  (Stylonychia  mytilus),  находящейся  в  стадии  экспоненциального  (активного)  роста  экспресс  методом,  то  есть  путем  воздействия  на  них  водным  и  ацетоновым  экстрактом  из  и  навесок  исследуемой  кормовой  добавки. 

Каждую  пробу  корма  исследовали  пять  раз  (в  пяти  повторностях).  Пересадку  и  подсчет  стилонихий  проводили  под  микроскопом  при  увеличении  2х8  или  2х14.

Общую  токсичность  исследуемого  корма  определяли  по  выживаемости  стилонихий  при  анализе  водного  раствора  ацетатного  экстракта  —  1  ч,  при  экстракции  водой  —  3  ч.  На  начало  опыта  в  каждой  лунке  должно  быть  от  15  до  20  шт.  простейших.  В  качестве  контроля  в  первом  случае  использовали  1  %-й  раствор  ацетона,  а  во  втором  —  минеральный  раствор  Лозина–Лозинского  (МР  ЛЛ).

Выживаемость  стилонихий  N  (%)  вычисляли  по  формуле

N  =  N2  :  N1  ×  100,

где:  N2  —  среднеарифметическое  (из  пяти  испытаний)  значение  количества  стилонихий  в  конце  опыта,  шт.; 

N1  —  среднеарифметическое  (из  пяти  испытаний)  значение  количества  стилонихий  в  начале  опыта,  шт.; 

100  —  перевод  результата  в  проценты.

Безопасной  считается  добавка,  в  которой  70—100  %  особей  микроорганизмов  сохранили  жизнеспособность  при  одновременном  параллельном  исследовании  на  разных  экстрактах.

Результаты  исследования  общей  токсичности  экспресс-методом  на  инфузориях  показаны  в  таблице  1.

Таблица  1.

Показатели  общей  токсичности  экспресс-методом  на  инфузориях

Результаты  исследования  общей  токсичности  экспресс-методом  на  инфузориях  составили  96,8  и  95,7  %,  что,  согласно  ГОСТ  Р  52337-2005,  находится  в  пределах,  характеризующих  ее  как  малотоксичную  добавку.

Определение  общей  токсичности  основным  методом  основано  на  испытании  добавки  на  мышах  предварительно  выдержанных  без  корма  4-5  ч.  (острая  токсичность),  что  позволяет  учесть  его  воздействие  (в  частности,  ацетоно-  и  водорастворимых  токсинов)  на  пищеварительную  систему  теплокровных  животных.  Для  опыта  по  определению  острой  токсичности  нами  были  сформированы  три  группы  по  десять  белых  лабораторных  мышей. 

Первой  группе  мышей  с  помощью  шприца  с  тупой  изогнутой  иглой  длиной  3—4  см  ввели  однократно  через  рот  в  желудок  0,5  см  выпаренного  остатка  ацетонового  экстракта,  а  второй  группе  0,5  см  водного  экстракта.  3  группа  была  контрольной,  получающая  только  основной  рацион.  Наблюдали  за  мышами  в  течение  3  суток,  не  ограничивая  их  в  кормах  и  воде.  По  результатам  опыта  сохранность  лабораторных  животных  во  всех  группах  составила  100  %,  после  мышей  убили  (усыпили  медицинским  эфиром)  и  вскрыли.  Учет  реакции  вели  на  основании  анализа  состояния  внутренних  органов  (желудочно-кишечного  тракта,  печени,  селезенки,  почек)  при  вскрытии  мышей.  На  основании  вскрытия  установили,  что  испытываемая  добавка  является  нетоксичной.  При  вскрытии  всех  живых  мышей  патологоанатомических  изменений  выявлено  не  было.

Третьим  тест-организмом  используемым  для  определения  токсического  и  раздражающего  действия  являлись  кролики  (кожная  проба)  позволяющие  участь  дермонекротическое  действие  токсинов.

У  трех  кроликов  на  участке  кожи  размером  6х6  см  в  области  бедра  и  шеи  в  день  постановки  испытаний  выстригли  волосяной  покров.  Кожа  при  осмотре  была  не  пигментирована,  без  признаков  шелушения.  На  подготовленные  участки  кожи  стеклянной  палочкой  был  нанесен  экстракт  в  первый  и  второй  день  эксперимента,  одной  из  особей  на  подготовленный  участок  не  было  нанесено  экстракта  в  качестве  контроля.  На  основании  обследования  подопытных  животных  установили  отсутствие  воспалительной  реакции.

Выводы.  При  проведении  комплекса  исследований  в  соответствии  с  ГОСТ  Р  52337-2005  разрабатываемой  кормовой  добавки  установили,  что  процент  сохранности  микроорганизмов  составил  96,8  и  95,7  %,  сто  характеризует  ее  как  малотоксичную  добавку.  При  испытании  добавки  на  мышах  —  все  особи  живы,  при  вскрытии  патологоанатомических  изменений  выявлено  не  было.  При  определении  дермонекротического  действия  возможного  присутствия  токсинов  на  кроликах  установили  отсутствие  воспалительной  реакции.  На  основании  полученных  данных  можно  сделать  вывод,  что  разрабатываемая  кормовая  добавка  не  токсична  и  в  дальнейшем  может  вводиться  в  рацион  сельскохозяйственной  птице.

Список  литературы:

1. Петенко  А.И.  Изучение  и  подбор  режима  культивирования  культуры  Azotobacter  chroococcum  на  ферментационном  комплексе  ОКА  МФ-100/Петенко  А.И.,  Гнеуш  А.Н.,  Дмитриев  В.И.//  Политематический  сетевой  электронный  научный  журнал  Кубанского  государственного  аграрного  университета.  —  2013.  —  №  94.  —  С.  163—179.
2. Петенко  А.И.  Особенность  формирования  микробиоценозов  ЖКТ  и  эффективность  обменных  процессов  у  перепелов  при  использовании  пробиотических  кормовых  добавок  /  А.И.  Петенко,  Ю.А.  Лысенко  //  Ветеринария  Кубани.  —  2012.  —  №  4.  —  С.  24—26.
3. Петенко  А.И.  Биотехнология  кормов  и  кормовых  добавок/  А.И.  Петенко,  А.Г.  Кощаев,  И.С.  Жолобова,  Н.С.  Сазонова//  Краснодар:  ФГБОУ  ВПО  «Кубанский  ГАУ»,2012.  —  454  с.
4. Семененко  М.П.  Влияние  функциональной  кормовой  добавки  на  рост  и  развитие  цыплят-бройлеров./  М.П.  Семененко,  И.С.  Жолобова.,  Т.А.  Лымарь//  Труды  Кубанского  государственного  аграрного  университета.  —  2013.  —  №  45.  —  с.  181—182.
5. Улучшение  потребительской  ценности  продукции  птицеводства/  Кощаев  А.Г.//  Хранение  и  переработка  сельхозсырья.  —  2007  —  №  2.  —  с.  34—38.
6. Эффективность  применения  биотехнологических  функциональных  добавок  при  выращивании  перепелов/  А.Г.  Кощаев  [и  др.]//  Ветеринария  Кубани.  —  2011.  —  №  4  —  с.  23—25.
7. Экологизация  продукции  птицеводства  путем  использования  пробиотиков  как  альтернативы  антибиотикам/  Кощаев  А.Г.//  Юг  России:  экология,  развитие.  —  2007.  —  №  3.  —  с.  94—98.
8. Якубенко  Е.В.  Эффективность  применения  пробиотиков  Бацелл  и  Моноспорин  разных  технологий  получения  в  составе  комбикормов  для  цыплят-бройлеров/  Е.В.  Якубенко,  А.И.  Петенко,  А.Г.  Кощаев//Ветеринария  Кубани.  —  2009.  —  №  4.  —  С.  2—5.