ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА rs2234693 В ГЕНЕ ESR-1 У ЖЕНЩИН С ГИПЕРАНДРОГЕНИЕЙ ДЛЯ ПРОГНОЗА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННЫМИ ОРАЛЬНЫМИ КОНТРАЦЕПТИВАМИ

В статье представлены результаты предварительного исследования идентификации определенного варианта однонуклеотидного полиморфизма rs2234693(T>C) в гене эстрогеновых рецепторов α (ESR-1) у женщин с синдромом гиперандрогении при отсутствии эффекта антиандрогенной терапии комбинированными оральными контрацептивами (КОК). Впервые отмечено потенциальное влияние данного полиморфизма на формирование различного фармакологического ответа у женщин с гиперандрогенией на проводимую терапию КОК. Было обследовано десять женщин с данным синдромом, материалом исследования явился соскоб буккального эпителия, из которого была выделена ДНК с дальнейшим секвенированием по Сэнгеру интересующей области гена ESR-1. У семи пациенток наблюдалось полное отсутствие эффекта от антиандрогенной терапии, из них у пяти пациенток на фоне сниженного исходного уровня эстрадиола и снижающейся концентрации свободного тестостерона после лечения, тогда как у двух женщин исходный уровень эстрадиола был в пределах нормы, а концентрация свободного тестостерона после лечения оставалась повышенной. У тех же двух пациенток была обнаружена гетерозиготная форма rs2234693(T>C), остальные женщины оказались гомозиготами. Таким образом, показано, что гетерозиготная форма (Т/С) однонуклеотидного полиморфизма rs2234693(T>C) в гене ESR-1 может явиться одной из причин неэффективной антиандрогенной терапией КОК при нормальном исходном уровне эстрадиола и неизмененных концентрациях тестостерона после лечения в сыворотке крови. В свою очередь, данная ассоциация может послужить одним из маркеров в прогнозировании эффективности терапии КОК у женщин с гиперандрогенией, реализуя персонифицированный подход в медицине.

Актуальность. Синдром гиперандрогении – это одно из самых распространенных гормональных нарушений у женщин, встречающееся примерно у 20 % женского населения [3, с. 3]. Наиболее часто встречается гиперандрогения функционального генеза (яичникового, надпочечникового и смешанного), что зачастую в настоящее время продиктовано повышенным уровнем стрессового воздействия современного образа жизни. Данный патологический симптомокомплекс, обусловленный избыточным действием андрогенов на органы и ткани-мишени у женщин репродуктивного возраста, проявляется рядом клинических признаков (нарушения менструального цикла, вульгарные прыщи, гирсутизм и др.), это в свою очередь существенно снижает качество жизни, сопровождающееся эмоциональной лабильностью, депрессивными состояниями, неудовлетворенностью внешностью и общим состоянием здоровья. С другой стороны, гиперандрогения может стать причиной тяжелых репродуктивных нарушений (бесплодие, невынашивание беременности, преждевременные роды и т.д.), что вносит свой вклад в поддержании непростой демографической ситуации в России [2, с. 6-8]. Таким образом, синдром гиперандрогении у молодых женщин является медико-социальной проблемой.

На сегодняшний день идеальной терапией для молодых женщин являются комбинированные оральные контрацептивы (КОК) с антиандрогенным действием. В состав таких лекарственных средств входят гестагены с антиандрогенным действием, выражающееся конкурентным блоком рецепторов андрогенов и ингибированием 5-альфа редуктазы в тканях, и этинилэстрадиол, который, взаимодействуя с эстрагеновыми рецепторами α в печени, стимулируют выработку ГСПС. Он связывается со свободным тестостероном, тем самым снижая его активность, значительно потенцируя антиандрогенный эффект КОК [2, с. 12]. Но по нашим клиническим наблюдением оказалось, что эффективность данной терапии подвержена значительным индивидуальным колебаниям, вплоть до отсутствия положительных результатов в ряде случаев.

Внедрение новых молекулярно-генетических методов исследования, в частности поиск полиморфизмов (Single nucleotide polymorphisms – SNPs) – единичных нуклеотидных замен в геноме, позволяет с другой стороны взглянуть на природу и механизм развития многих заболеваний, ассоциированных с ними, и открывает перспективы прогнозирования исходов и эффективности терапии. А также создает основу для применения персонализированного подхода в медицине с учетом генетической индивидуальности пациентов.

Так, в результате ряда исследований наличие полиморфизма rs2234693(T>C) в гене эстрогеновых рецепторов α уже ассоциируют с развитием у женщин репродуктивных нарушений [1, с. 35; 6, с. 4; 4, с. 4], идиопатической преждевременной недостаточности яичников [5, с. 303], нарушений кальциевого обмена [7, с. 3; 8, с. 1287]. Предположительно, при данной нуклеотидной замене в гене ESR-1 происходит снижение продукции эстрогеновых рецепторов α в тканях [5, с. 302].

Возможно, что отсутствие положительных результатов гормональной терапии у женщин с гиперандрогенией также связано с присутствием данного полиморфизма в их геноме.

Цель исследования: определить наличие полиморфизма rs2234693 гена ESR-1 у женщин с синдромом гиперандрогении с выявлением взаимосвязи исходного уровня  эстрадиола, концентрации тестостерона после лечения и эффективностью лечения, найти ассоциацию неэффективной антиандрогенной терапии  и наличием определенного варианта данного полиморфизма.

Материалы и методы. В предварительное исследование были включены 10 женщин в возрасте от 20 до 35 лет с клиническими проявлениями гиперандрогении (гирсутизм, вульгарные прыщи, себорея, андрогенная алопеция и др.), нарушением овариально-менструального цикла, с эхо-признаками ановуляторного цикла. Критерии исключения: индекс массы тела ≥30 кг/м2; артериальная гипертензия (АД > 140/90 мм рт. ст.); тяжелые заболевания сердечно-сосудистой системы, печени, почек; гормонпродуцирующие опухоли; кровотечение из половых путей неясной этиологии; злокачественные новообразования в настоящее время или в анамнезе; органическая патология центральной нервной системы; психические заболевания; прием психотропных препаратов, диуретиков в настоящее время. Этим пациенткам  проводилась терапия КОК с антиандрогенным эффектом в течение последних 6 месяцев. Материалом для исследования явился соскоб буккального эпителия. Выделение ДНК проводилось стандартным методом фенол-хлороформной экстракции. С помощью программ Genome Browser, Primer-BLAST и OligoAnalyzer были подобраны праймеры  к исследуемой области гена ESR-1 и условия проведения ПЦР, реакции Сенгера. Полученные секвенограммы были анализированы с помощью программы  Sequence Scanner.

Результаты: Средний возраст обследованных пациенток составил 24 года, у всех были выявлены клинические проявления гиперандрогении: преимущественно гирсутизм (с гирсутным числом Ферримана-Голлвея больше 16 баллов), вульгарные прыщи, на протяжении в среднем 9 лет. Также у всех пациенток наблюдался нерегулярный менструальный цикл, вплоть до вторичной аменореи (у двух женщин), отягощенный гинекологический анамнез (первичное бесплодие, хронический периаденексит и др.). Гиперандрогения была подтверждена результатами исследования уровня гормонов. У все женщин в сыворотки крови была повышена концентрация 17-гидроксипрогестерона, свободного тестостерона; у восьми пациенток уровень ДЭАС был выше референсных значений; у половины обследуемых уровень эстрадиола был понижен, у другой половины – в пределах нормы. Далее было выявлено снижение уровня свободного тестостерона после проведенной терапии у восьми из десяти женщин. Неэффективность терапии, оцененная не ранее 6 месяцев приема КОК с антиандрогенной активностью, была зарегистрирована у 7 пациенток.

Проанализировав полученные секвенограммы исследуемой области ESR-1, были выявлены две гетерозиготы (Т/С), две гомозиготы по цитозину (C/C) и шесть гомозигот по тимину (T/T) однонуклеотидного полиморфизма rs2234693.

Анализ работы показал отсутствие эффекта от проводимой терапии у семи из десяти пациенток, причем у пяти из них на фоне сниженного исходного уровня эстрадиола и снижающегося уровня свободного тестостерона после лечения, у двух - отсутствие эффекта при нормальном исходном уровне эстрадиола и неизмененной концентрации свободного тестостерона после проведенной антиандрогенной терапии КОК. У этих же пациенток была подтверждена гетерозиготность при определении полиморфизма rs2234693 гена ESR-1, остальные были гомозиготами.

Выводы. Гетерозиготная форма полиморфизма rs2234693 гена ESR-1 может явиться причиной неэффективности антиандрогенной терапии, проводимой КОК, на фоне нормального исходного уровня эстрадиола и неизмененной концентрации свободного тестостерона после лечения. Данное обстоятельство позволит на основе индивидуальных генетических маркеров, включая rs2234693 в гене ESR-1, прогнозировать исход и эффективность терапии у женщин с синдромом гиперандрогении, реализуя персонифицированный подход в медицине. В дальнейшем исследовании планируется увеличить количество женщин в группах для статистического подкрепления результатов.

Список литературы:

1. Владимирова И.В., Калинина Е.А., Донников А.Е. Прогнозирование исходов программ вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров // Гинекология. – 2014. - № 6. – С. 33-36
2. Унанян А.Л., Руднева О.Д. Синдром гиперандрогенизма в практике гинеколога // StatusPaesens. - 2014. – С. 20.
3. Хвощина Т. Н. Профилактика нарушений гемокоагуляции у женщин, принимающих контрацептивы с антиандрогенным эффектом: автореф. дис. ... канд. мед. Наук - Тюмень, 2014. – 23 с.
4. Association Study of Estrogen Receptor Alpha Gene Polymorphisms with Spontaneous Abortion: Is This a Possible Reason for Unexplained Spontaneous Abortion? / Anousha N, Hossein-Nezhad A, Biramijamal F, et al. // BioMed Research International. – 2013. – Vol. 2013. – ID 256470. – P. 6
5. He M, Shu J, Huang X, Tang H. Association between estrogen receptora gene (ESR1) PvuII (T/C) and XbaI (A/G) polymorphisms and premature ovarian failure risk: evidence from a meta-analysis // Journal of Assisted Reproduction and Genetics. – 2015. – Vol. 32. – N. 2. – P. 297-304.
6. Liaqat S, Hasnain S, Muzammil S, Hayat S. Polymorphism analysis in estrogen receptors alpha and beta genes and their association with infertile population in Pakistan // EXCLI Journal. – 2015. – Vol. 14. – P. 1085-1094.
7. Massart F., Marini F., Bianchi G. Age-specific effects of estrogen receptors’ polymorphisms on the bone traits in healthy fertile women: the BONTURNO study // Reprod. Biol. Endocrinol. 2009. – Vol. 7. – N. 32. – P. 1-8
8. Mine Durusu Tanriover, Gamse Bora Tatar, Tenzile Deniz Uluturk. Evalution of the effects of vitamin D receptor and estrogen receptor 1 gene polymorphisms on bone mineral density in postmenopausal women // Clin. Rheumatol. – 2010. – Vol. 29. – P. 1285–1293.