ОПРЕДЕЛЕНИЕ  ЗАВИСИМОСТИ  МЕЖДУ  СОДЕРЖАНИЕМ  БИОЛОГИЧЕСКИ  АКТИВНЫХ  СОЕДИНЕНИЙ  И  ВЫРАЖЕННОСТЬЮ  АНТИОКСИДАНТНОЙ  АКТИВНОСТИ  В  РАСТИТЕЛЬНОМ  СЫРЬЕ,  ОБЛАДАЮЩЕМ  ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ  ДЕЙСТВИЕМ

Бердыбекова  Айдана  Ахметовна

E-mail: 

Курунова  Елена  Александровна

студенты  5  курса  фармацевтического  факультета  Оренбургского  государственного  медицинского  университета,  РФ,  г.  Оренбург

E-mail:  Alena4ka56@mail.ru

Михайлова  Ирина  Валерьевна

научный  руководитель,  д-р  биол.  наук,  доцент  кафедры  химии  и  фармацевтической  химии  Оренбургского  государственного  медицинского  университета,

РФ,  г.  Оренбург

Гепатопротекторы  –  биологически  активные  вещества,  которые  осуществляют  защиту  мембраны  гепатоцитов,  нормализуют  или  усиливают  их  ферментативную  активность,  что  приводит  к  улучшению  метаболизма  и  функции  клеток  печени.  Основная  цель  использования  данной  лекарственной  группы-  предохранение  гепатоцитов  от  повреждающего  воздействия  различных  вредных  факторов,  в  том  числе  и  от  реакций  неконтролируемого  окисления.  В  современной  медицинской  практике  широко  используются  гепатопротекторы  растительного  происхождения  [5,  с.  36].  Это  объясняется  тем,  что  они  обладают  меньшими  побочными  эффектами  по  сравнению  с  синтетическими  препаратами,  хорошей  переносимостью,  малой  токсичностью,  возможностью  применения  в  детском  возрасте.

Защита  гепатоцитов  осуществляется  за  счёт  желчегонного  действия,  антиоксидантной  активности  (АОА)  и  регенерирующей  способности  в  отношении  клеток  и  тканей.  Следовательно,  одним  из  аспектов  исследования  гепатопротекторного  действия  является  определение  АОА,  которая  обеспечивается  флавоноидами,  витаминами  Е,  А,  дубильными  веществами,  содержащимися  в  лекарственном  растительном  сырье  (ЛРС)  растений-  гепатопротекторов.  В  качестве  источников  данных  биологически  активных  соединений  (БАС)  мы  использовали  сырье  травы  травы  чистотела  большого,  тысячелистника  обыкновенного,  цветков  бессмертника  песчаного,  листьев  мяты  перечной  [3,  с.  16].

Целью  настоящей  работы  явилось  определение  зависимости  между  суммарным  содержанием  биологически  активных  соединений  и  выраженностью  антиоксидантной  активности  в  ЛРС,  обладающем  гепатопротекторным  действием.

Материалы  и  методы.  Объектами  исследования  явились  листья  мяты  перечной  семейства  губоцветные  (Mentha  piperita  L.,  Lamiaceae  );  трава  тысячелистника  обыкновенного  семейства  астровые  (  Achillea  millefolium  L.,  Asteraceae  );  цветки  бессмертника  песчаного  семейства  астровые  (  Helichrysum  arenarium  L.,  Asteraceae  );  трава  чистотела  большого  семейство  маковые  –  (Chelidonium  majus  L.,  Papaveraceae  ).  Сырье  было  приобретено  в  аптечной  сети.

Содержание  кислоты  аскорбиновой  проводили  методом  визуального  титрования,  используя  окислительно-восстановительную  реакцию  с  2,6-дихлорфенолиндофенолятом  натрия  (реактивом  Тильманса)  [2,  с.  154]  и  рассчитывали  по  формуле  в  мг  %  :

x  ;

где:  0,000038  –  количество  аскорбиновой  кислоты,  соответствующее  1  мл  раствора  2,6-дихлорфенолиндофенолята,  в  граммах; 

V  –  объём  раствора  2,6-дихлорфенолиндофенолята  натрия,  пошедшего  на  титрование,  в  миллилитрах; 

m  –  масса  сырья  в  граммах; 

W  –  потеря  в  массе  при  высушивании  сырья,  в  процентах.

Количественное  определение  суммы  флавоноидов  проводили  спектрофотометрическим  методом,  который  основан  на  поглощении  монохроматического  электромагнитного  излучения  [5,  с.  80].  Расчет  содержания  флавоноидов  в  сухом  сырье  в  пересчете  на  стандарт  и  абсолютно  сухое  проводили  по  формуле:

X  ,%=  ;

где:  D  –  оптическая  плотность  испытуемого  раствора; 

D  0  –  оптическая  плотность  раствора  ГСО  стандарта; 

m  –  масса  сырья,  в  граммах; 

m  0  –  масса  ГСО  стандарта,  в  граммах; 

W  –  потеря  в  массе  при  высушивании  сырья,  в  процентах.

Определение  антиоксидантной  активности  основанно  на  способности  антиоксидантов  «  in  vitro  »  ингибировать  аутоокисление  адреналина  и,  как  следствие,  предотвращать  образование  активных  форм  кислорода.  Антиоксидантную  активность  выражали  в  процентах  ингибирования  аутоокисления  адреналина  и  вычисляли  по  следующей  формуле:

АА,%=  ;

где:  D  1  –  оптическая  плотность  раствора  адреналина  гидрохлорида,  добавленного  к  натрий  –  карбонатному  буферу; 

D2  –  оптическая  плотность  исследуемого  экстракта  и  адреналина  гидрохлорида,  добавленного  к  натрий-карбонатному  буферу.

Наличие  связи  между  содержанием  аскорбиновой  кислоты,  суммы  флавоноидов  в  изучаемых  обьектах  и  значениями  антиоксидантной  активности  определяли  с  помощью  вычисления  коэффициента  корреляции  (r).  О  силе  корреляционной  связи  судили  по  величине  коэффициента  корреляции:  слабая  степень  взаимосвязи  характеризовалась  значениями  коэффициента  от  0  ±  0,29,  средняя  –  от  0,3  до  0,69  (от  –  0,3  до  -0,69),  сильная  –  от  0,7  до  1,0  (от  -0,7  до  –  1,0).  Коэффициент,  равный  0,  свидетельствовал  о  полном  отсутствии  связи  [5,  c.  56]. 

Результаты  и  их  обсуждение.  В  ранее  проведенных  исследованиях  [4,  с.10]  ,  было  установлено,  что  по  содержанию  БАВ  в  ЛРС  растения  можно  расположить  следующим  образом:  1)  по  содеражанию  флавоноидов  Helichrysum  arenarium  (2,73  %)>  Achillea  millefolium  (1,26  %)>  Mentha  piperita  (1,25  %)>  Chelidonium  majus  (0,16  %);  2)  по  концентрации  кислоты  аскорбиновой:  Mentha  piperita  (0,1253  %)>  Helichrysum  arenarium  (0,1113  %)›  Chelidonium  majus  (0,0952  %)  >  Achillea  millefolium  (0,0640  %);  3)  по  выраженности  антиоксидантной  активности  :  Mentha  piperita  (35,55  %)>  Achillea  millefolium  (27,03  %)>  Helichrysum  arenarium  (12,81  %)>  Chelidonium  majus  (4,70  %).

Анализ  содержания  БАС  и  выраженности  АОА  в  ЛРС,  а  также  данные  литературы  [6,  с.  65]  позволяют  предположить  существование  зависимости  между  ними,  в  связи  с  чем  был  проведен  корреляционный  анализ,  который  выявил,  что  между  уровнем  кислоты  аскорбиновой,  суммарным  содержанием  флавоноидов  и  суммарной  АОА  в  ЛРС  Mentha  piperita  установлена  средняя  степень  корреляции  (r=  0,434  и  r=  -0,600,  соответственно).  В  сырье  Chelidonium  majus  установлена  средняя  степень  зависимости  между  суммарным  содержанием  флавоноидов  и  уровнем  общей  АОА  (r  =0,324).  Необходимо  отметить,  что  сильная  корреляционная  зависимость  общей  АОА  от  суммарного  содержания  флавоноидов  выявлена  в  ЛРС  Achillea  millefolium  (r  =  -0,729),  также  в  данном  ЛРС  выявлена  слабая  корреляционная  зависимость  между  суммарной  АОА  и  концентрацией  кислоты  аскорбиновой  (r  =  0,017).  Средняя  корреляционная  зависимость  установлена  между  общей  АОА  и  содержанием  БАВ  (аскорбиновая  кислота,  флавоноиды)  в  цветках  Helichrysum  arenarium  (  r  =0,432  и  r  =0,378,соответственно).  Таким  образом,  в  ходе  анализа  была  выявлена  сильная  степень  корреляционной  зависимости  между  суммарным  содержанием  флавоноидов  и  уровнем  общей  АОА  у  ЛРС  Achillea  millefolium  .  В  ЛРС  Mentha  piperita  ,  Chelidonium  majus  ,  Helichrysum  arenarium  выявлена  корреляционная  зависимость  средней  степени  между  содержанием  флавоноидов  и  общей  АОА.  Также  установлена  средняя  корреляционная  зависимость  между  содержанием  витамина  С  и  уровнем  общей  АОА  в  листьях  Mentha  piperita  и  цветках  Helichrysum  arenarium;  в  сырье  Chelidonium  majus  и  Achillea  millefolium  -  слабая  степень  корреляции  между  содержанием  кислоты  аскорбиновой  и  уровнем  общей  АОА.

Необходимо  также  отметить,  что  выявилась  как  прямая,  так  обратная  корреляционная  зависимость.  В  целом,  данные  результаты  подтверждают  существование  связи  между  содержанием  БАС  и  уровнем  АОА  в  изученном  ЛРС.  Что  касается  обратной  корреляционной  зависимости,  то  она  может  быть  связана  с  тем,  что  флавоноиды  могут  проявлять  как  антиоксидантные  свойства,  так  и  наоборот,  провоцировать,  а  порой  усиливать  оксидативный  стресс.  Это  зависит  от  ряда  факторов,  главными  из  которых  являются:  концентрация  данных  БАВ,  и  их  градация  по  наличию  гидроксильных  групп  в  молекуле,  наличие  тяжелых  металлов,  способных  оттягивать  на  себя  протоны  полифенольных  соединений,  а  также  следует  сказать  о  периоде  вегетации  растения,  в  который  было  собрано  ЛРС,  но  учитывая  факт  заводского  производства  сырья,  мы  можем  гарантировать  правильность  заготовки  ЛРС  [3,  с.  35].

Учитывая  полученные  результаты  и  данные  литературы  [2,  с.  34],  можем  отметить,  что  АОА  сырья  может  быть  обусловлена,  во-первых,  содержанием  БАС-  антиоксидантов  в  отдельности,  во-вторых,  их  суммарным  содержанием,  что  способствует  более  высокому  уровню  АОА,  который  обусловлен  наличием  синергических  связей  между  БАС.  Вместе  с  тем  выявленная  зависимость  между  содержанием  данных  веществ  и  уровнем  общей  АОА  является  величиной,  которая  характеризует  антиоксидантные  свойства  данного  ЛРС,  лежащие  в  основе  гепатопротекторного  действия.

Список  литературы:

1. Государственная  фармакопея  СССР.  Изд.  Выпуск  2.  –  М.:  Медицина,1990.  –  С.  38.
2. Государственная  фармакопея  СССР.  Изд.  Выпуск  2.  –  М.:  Медицина  1990.  –  397  с.
3. Куркин  В.А.  Фармакогнозия  /  В.А.  Куркин  //  Учебник  для  студентов  фармацевтических  вузов.  –  Самара,  2004.  –  С.  321,  386,  996.
4. Определение  количественного  содержания  флавоноидов,  кислоты  аскорбиновой  и  антиоксидантной  активности  в  лекарственном  растительном  сырье,  обладающего  гепатопротекторной  активностью  –  [Электронный  ресурс]  –  Режим  доступа  –  URL:  http://www.nauchforum.ru/ru/node/7038  (  дата  обращения  :  21.09.2015).
5. Рябинина  Е.И.  Новый  подход  в  оценке  антиоксидантной  активности  растительного  сырья  при  исследовании  процесса  аутоокисления  адреналина  /  Е.И.  Рябинина,  Е.Е.  Зотова,  Е.Н.  Ветрова,  Н.И.  Пономарева,  Т.Н.  Илюшина  //  Химия  растительного  сырья.  –  2011.  –  №  3  –  С.  117.
6. Уткина  Е.А.  Зависимость  антиоксидантной  активности  флавоноидов  от  физикохимических  характеристик  в  различных  системах  /  Е.А.  Уткина  //  Автореф.  дис.  канд.  мед.  наук.  –  М.,  2005.  –  114  с.