ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ  СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ  КАК  ОДИН  ИЗ  МЕТОДОВ  ОПРЕДЕЛЕНИЯ  СОДЕРЖАНИЯ  ФЛАВОНОИДОВ  В  ПОБЕГАХ  ЧЕРНИКИ  ОБЫКНОВЕННОЙ

Минаева  Марина  Сергеевна

студент  5  курса,  кафедра  химии  и  фармацевтической  химии  ОрГМУ,  РФ,  г.  Оренбург

Е-mail:  minaewamarina 1992@mai.ru

Кузьмичева  Наталья  Александровна

ассистент  кафедры  химии  и  фармацевтической  химии  ОрГМУ,  РФ,  г.  Оренбург

Михайлова  Ирина  Валерьевна

научный  руководитель  д-р  биол.  наук,  доцент  ОрГМУ,  РФ,  г.  Оренбург

Черника  обыкновенная  (Vaccinium  myrtillus)  —  растение,  плоды  и  побеги  которого  широко  применяются  в  медицине.  Химический  состав  довольно  разнообразен.  Особое  внимание  следует  уделить  флавоноидам,  которые  наряду  с  дубильными  веществами  содержатся  в  побегах  черники  обыкновенной  и  могут  быть  использованы  для  стандартизации  данного  ЛРС  [2;  5].  Одним  из  методов,  позволяющим  оценить  количественное  содержание  флавоноидов  может  быть  дифференциальная  спектрофотометрия  —  метод,  который  базируется  на  реакции  комплексообразования  флавоноидов  с  алюминия  хлоридом.  Происходящий  при  этом  батохромный  сдвиг  первой  полосы  поглощения  флавоноидов  с  330—350  нм  до  390—415  нм  позволяет  применить  в  качестве  контроля  испытуемый  раствор  без  реактива,  и  тем  самым  уменьшить  влияние  сопутствующих  веществ.  В  качестве  стандартного  вещества  используется  рутин  (ФС  42-2508-87),  максимум  дифференциального  спектра  поглощения  которого  (415  нм)  совпадает  с  максимумом  дифференциального  спектра  извлечения  из  побегов  черники  [1].  В  связи  с  этим  целью  исследования  явилось  определение  суммы  флавоноидов  в  побегах  черники  обыкновенной  методом  дифференциальной  спектрофотометрии.

Методы  и  материалы  исследования .  В  качестве  объекта  исследования  использовалось  официнальное  сырье  лекарственного  растения  черники  обыкновенной  (Vaccinium  myrtillus).  Спиртовое  извлечение  готовилось  путем  нагревания  пробы  сырья  измельченного.

Качественный  анализ  проводился  с  помощью  цветных  реакций  [4]:

1.  С  2  %  раствора  алюминия  хлорида.  К  1  мл  извлечения  изучаемого  сырья  прибавляли  2  мл  2  %  раствора  алюминия  хлорида  в  95  %  спирте  и  7  мл  95  %  спирта.  Наблюдения:  появилось  зеленовато-желтое  окрашивание.

2.  Обработка  флавоноидов  30  %  гидроксидом  натрия.  К  1  мл  извлечения  исследуемого  сырья  прибавляли  2—3  мл  гидроксида  натрия,  в  результате  наблюдается  голубая  деструкция.

3.  Реакция  диазотирования  с  сульфаниловой  кислотой.  с  образованием  окраски  различных  оттенков:  лимонно-желтый  цвет,  оранжевый  или  кирпично-красный  цвет.

4.  Флавоноиды  с  1  %  раствором  железа  (III)  хлорида  дают  коричневую,  зеленую  или  синюю  окраску.

Количественное  определение  проводилось  методом  дифференциальной  спектрофотометрии  [2].  Для  этого  около  1  г  измельченного  сырья  (точная  навеска)  помещали  в  колбу  вместимостью  100  мл,  прибавляли  50  мл  70  %  этилового  спирта.  Колбу  присоединяли  к  обратному  холодильнику  и  нагревали  на  кипящей  водяной  бане  (умеренное  кипение)  в  течение  30  мин.  2  мл  полученного  извлечения  помещали  в  мерную  колбу  вместимостью  25  мл,  прибавляли  2  мл  3  %  спиртового  раствора  алюминия  хлорида  и  доводили  объем  раствора  до  метки  95  %  этиловым  спиртом  (испытуемый  раствор  А).  В  качестве  раствора  сравнения  был  использован  раствор,  приготовленный  при  тех  же  условиях,  но  без  добавления  алюминия  хлорида  (раствор  сравнения  А).  Измерения  оптической  плотности  проводили  на  спектрофотометре  «Genesys  5»,  (США)  при  аналитической  длине  волны  420  нм  через  30  мин  после  приготовления  всех  растворов.  Параллельно  измерялась  оптическая  плотность  испытуемого  раствора  Б  рутина.  Раствором  сравнения  служит  раствор  Б  рутина,  приготовленный  аналогично  испытуемому,  но  без  добавления  алюминия  хлорида  .  Содержание  суммы  флавоноидов  в  пересчете  на  рутин  и  абсолютно  сухое  сырье  в  процентах  (X)  вычисляли  по  формуле:

,

где:  D  —  оптическая  плотность  испытуемого  раствора; 

D_st  —  оптическая  плотность  раствора  ГСО  рутина; 

m_st  —  масса  ГСО  рутина,  в  граммах; 

m  —  масса  сырья,  в  граммах; 

W  —  потеря  в  массе  при  высушивании,  в  процентах.

Результаты  исследования .  Качественный  анализ  установил,  что  флавоноиды  присутствуют  в  исследуемом  сырье.  При  взаимодействии  флавоноидов  с  алюминия  хлоридом  2  %  образовывались  окрашенные  комплексы  (желто-зеленое  окрашивание).  В  случае  обработки  флавоноидов  30%  раствором  щелочи  наблюдалась  глубокая  деструкция  молекулы  с  образованием  соответствующих  артефактов.  Флавоноиды  реагировали  с  диазореактивом  (сульфаниловой  кислотой)  с  образованием  оранжевого  раствора.  Ввиду  наличия  у  флавоноидов  черники  3-ОН-группы  при  реакции  комплексообразования  с  треххлорным  железом  образовывались  коричневые  осадки  (табл.  1).

Таблица  1.

Результаты  качественного  анализа  побегов  черники  обыкновенной

Количественный  анализ  показал,  что  в  побегах  черники  обыкновенной  флавоноидов  в  пересчете  на  рутин  содержится  в  среднем  1,99  ±  2,01  %  (табл.  2).  По  литературным  данным  минимальное  рекомендованное  значение  содержания  флавоноидов  в  побегах  черники  должно  быть  не  менее  0,6  %  [3].  Данные  статистической  обработки  показали,  что  метод  дифференциальной  спектрофотометрии  характеризуется  достаточной  точностью  и  приемлемой  относительной  погрешностью,  что  позволяет  сделать  вывод  о  перспективе  применения  данного  метода  при  определении  флавоноидов  в  побегах  черники  обыкновенной.

Таблица  2.

Результаты  оценки  повторяемости  применённой  методики

Таким  образом,  методом  дифференциальной  спектрофотометрии  установлено,  что  суммарное  содержание  флавоноидов  в  побегах  черники  обыкновенной  соответствует  данным  литературы,  а  проведенная  метрологическая  характеристика  показала,  что  метод  характеризуется  достаточной  точностью.  Это  позволяет  нам  говорить  о  целесообразности  применения  данного  метода  для  идентификации  и  подтверждения  доброкачественности  по  содержанию  флавоноидов.

Список  литературы:

1.Куркин  В.А.,  Рязанова  Т.К.  Количественное  определение  суммы  флавоноидов  в  побегах  черники  обыкновенной  //  Химико-фармацевтический  журнал.  —  2013.  —  Т.  47.  —  №  4.  —  С.  34—37.

2.Куркин  В.А.,  Рязанова  Т.К.  Новые  подходы  в  области  стандартизации  плодов  черники  обыкновенной  //  Известия  Самарского  научного  центра  Российской  Академии  наук.  —  2011.  —  Т.  13.  —  №  1.  —  С.  2010—2015.

3.Куркин  В.А.,  Рязанова  Т.К.  Новые  подходы  к  комплексному  использованию  плодов  и  побегов  черники  обыкновенной  //  Известия  Самарского  научного  центра  Российской  Академии  наук.  —  2012.  —  Т.  14.  —  №  5  (3)  —  С.  757—761.

4.Куркин  В.А.  Фармакогнозия:  учебник  для  студентов  фармацевтических  вузов.  Самара  :  ООО  «Офорт»,  ГОУВПО  «СамГМУ»,  —  с.  721—740.

5.Рязанова  Т.К.  Сравнительное  фитохимическое  исследование  плодов  и  побегов  черники  обыкновенной  и  разработка  подходов  к  их  стандартизации  //  Аспирантские  чтения  —  2013.  —  С.  195—198.