УРОВЕНЬ  МАЛОНОВОГО  ДИАЛЬДЕГИДА  И  ОЦЕНКА  АНТИОКСИДАНТНОЙ  СИСТЕМЫ  В  ЭРИТРОЦИТАХ  У  БОЛЬНЫХ  ЭХИНОКОККОЗОМ

Алымова  Екатерина  Викторовна

студент,  кафедра  медицинской  биологии  ИФБиБТ  СФУ,  г.  Красноярск

E-mail:  katial@bk.ru

Титова  Надежда  Митрофановна

научный  руководитель,  канд.  биол.  наук,  профессор,  кафедра  медицинской  биологии  ИФБиБТ  СФУ,  г.  Красноярск

Высокий  уровень  заболеваемости  эхинококкозом  является  серьезной  экологической  и  медико-социальной  проблемой  для  многих  стран  с  разными  природно-климатическими  и  социально  экономическими  условиями,  в  том  числе  и  для  ряда  регионов  Российской  Федерации  [2].  В  подавляющем  большинстве  у  больных  был  выявлен  эхинококкоз  печени  (90  %  случаев).

Эхинококкоз  печени  (ЭП)  является  одним  из  наиболее  распространенных  и  тяжелых  паразитарных  заболеваний,  лечение  которого  остается  весьма  актуальной  проблемой.  ЭП  вызывает  глубокие  изменения  этого  жизненно  важного  органа,  приводящие  к  местным  и  общим  осложнениям.  Частота  послеоперационных  осложнений  и  летальность  после  хирургического  вмешательства  составляют  соответственно  11—40  и  2,5—7,0  %  [2,  3,  6].  Из  литературы  известно,  что  при  данной  патологии  могут  нарушаться  метаболические  процессы,  развиваться  аллергия,  а  так  же  проявляться  окислительный  стресс,  обусловленный  чрезмерным  образованием  активных  форм  кислорода  (АФК).

Источником  АФК  в  организме  могут  быть  активированные  макрофаги,  моноциты,  нейтрофилы,  эозинофилы  и  другие  клетки  в  ходе  так  называемого  «респираторного  взрыва».  АФК  образуются  как  продукты  окислительного  метаболизма  и  в  других  типах  клеток.  Наибольший  вклад  в  продукцию  АФК  вносит  дыхательная  цепь  митохондрий,  особенно  при  низкой  концентрации  АДФ.  Весьма  существенна  и  роль  цитохрома  Р-450,  локализованного  в  эндоплазматической  сети,  а  также  оксигеназ.

При  низких  концентрациях  АФК  выполняют  функцию  вторичных  мессенджеров,  участвуя  в  регуляции  метаболических  процессов  и  экспрессии  генов.  Высокие  концентрации  активных  форм  кислорода  оказывают  негативное  влияние:  интенсифицируют  процессы  перекисного  окисления  липидов  (ПОЛ),  окислительной  модификации  белков  и  нуклеиновых  кислот.

Проявлению  повреждающего  действия  свободных  радикалов  и  перекисных  соединений  препятствует  многокомпонентная  антиоксидантная  система  (АОС),  обеспечивающая  связывание  и  рекомбинацию  радикалов,  предупреждение  образования  или  разрушение  перекисей.  В  состав  АОС  входят  разнообразные  низкомолекулярные  органические  вещества  с  редуцирующими  свойствами  и  ферменты  [1].

Исследования  процессов  ПОЛ  и  активности  антиоксидантной  системы  у  больных  эхинококкозом  немногочисленны  и  фрагментарны,  поскольку  для  оценки  про/антиоксидантного  статуса  больных  при  данной  патологии  используются  минимальное  число  показателей.

Исходя  из  этого,  целью  данной  работы  явилось  комплексное  изучение  состояния  перекисного  окисления  липидов  и  антиоксидантной  системы  в  эритроцитах  больных  эхинококкозом.

Материалы  и  методы.Объектом  исследования  служили  эритроциты  относительно  здоровых  (19  человек  —  контрольная  группа),  больных  эхиноккозом  (5  человек),  и  больных,  прошедших  лечение  цитофловином  после  лечения  немозолом  и  оперативного  вмешательства  (10  человек).  Диагноз  у  больных  устанавливался  на  основании  клинико-лабораторных  данных  и  результатов  ультразвукового  исследования  врачами  ККБ  №  1.  Забор  крови  производили  из  локтевой  вены,  утром  натощак,  в  качестве  антикоагулянта  использовали  гепарин,  затем  кровь  центрифугировали  при  1700  g,  плазма  отбрасывалась.  Оставшуюся  эритроцитарную  массу  трижды  отмыли  физиологическим  раствором  (0,9  %-нымNaCl)  и  центрифугировали  по  15  мин.  при  1700  g.  Супернатант  отбрасывали.  Последнее  центрифугирование  проводили  в  течение  20  мин.  для  более  плотной  упаковки  клеток  (Авраамова,  Титова,  1978).

Содержание  продукта  перекисного  окисления  липидов  —  малонового  диальдегида  определяли  по  методу,  предложенному  (Ko,  Godin,  1990).  Активность  глутатион-S-трансферазы  (GST)  определяли  по  скорости  образования  глутатион-S-конъюгатов  между  восстановленным  глутатионом  (GSH)  и  1-хлор-2,4-динитробензолом  согласно  Habig  (1974).  Активность  супероксиддисмутазы  (SОD)  оценивали  по  степени  ингибирования  реакции  аутоокисления  адреналина  в  щелочной  среде  (Сирота,1999),  каталазную  активность  (САТ)  —  по  количеству  образовавшегося  комплекса  неразрушенного  в  ходе  каталазной  реакции  пероксида  водорода  с  молибдатом  аммония  (Королюк  и  др.,  1988).  Активность  глутатионпероксидазы  (GPO)  оценивали  по  изменению  содержания  GSH  в  пробах  до,  и  после  инкубации  с  модельным  субстратом  в  ходе  цветной  реакции  с  ДТНБК  [4].  Определение  количества  восстановленного  глутатиона  основано  на  взаимодействии  восстановленного  глутатиона  с  ДТНБК  с  образованием  окрашенного  в  желтый  цвет  аниона  2-нитро-5-тиобензоата.  Увеличение  концентрации  желтого  аниона  в  ходе  данной  реакции  регистрируют  спектрофотометрически  при  длине  волны  412  нм  [7].

Статистическую  обработку  результатов  осуществляли  с  помощью  пакета  прикладных  программ  Statistica  6.0.  Проверку  гипотезы  о  статистической  достоверности  полученных  результатов  проводили  согласно  критерию  Манна-Уитни.

Результаты  исследования  и  их  обсуждение

Было  проведено  сравнительное  исследование  уровня  малонового  диальдегида  (MDA)  и  активности  ферментов  антиоксидантной  системы  у  больных  эхинококкозом  печени  при  лечении  немозолом  и  после  принятия  лекарственного  препарата  цитофлавин. 

Известно,  что  при  ряде  патологических  состояний,  сопровождающихся  развитием  оксидативного  стресса,  интенсифицируются  процессы  перекисного  окисления  липидов  и  повышается  уровень  малонового  диальдегида  [5].  При  эхинококкозе  нами  выявлено  повышение  содержания  MDA,  которое  может  быть  косвенным  подтверждением  увеличения  уровня  активных  формы  кислорода,  запускающих  не  только  процессы  ПОЛ,  но  и  оксидативной  модификации  других  биомолекул.  В  эритроцитах  больных  эхинококкозом  при  лечении  немозолом  отмечается  снижение  активности  ферментов,  устраняющих  супероксидный  анион-радикал  и  пероксид  водорода  —  SОD,  САТ,  а  также  активности  GST,  фермента,  участвующего  в  детоксикации  экзо-  и  эндоксенобиотиков.  Степень  выраженности  снижения  активности  разная,  так  активность  SOD  снижается  всего  лишь  на  10,4  %,  CАТ  —  на  26,2  %,  GST  —  на  50  %  по  сравнению  с  аналогичными  показателями  контрольной  группы  (табл.1). 

Снижение  активности  антиоксидантных  ферментов,  по-видимому,  обусловлено  либо  модификацией  белковой  молекулы  малоновым  диальдегидом,  либо  непосредственным  ингибированием  активными  формами  кислорода.

Таблица  1. 

Содержание  МДА,  GSH  и  активность  антиоксидантных  ферментов  у  больных  эхинококкозом

После  лечения  препаратом  цитофлавин  состояние  перекисного  окисления  и  активность  антиоксидантных  ферментов  несколько  изменилась.  Произошло  незначительное  снижение  уровня  малонового  диальдегида.  Активность  супероксиддисмутазы  и  глутатион-S-трансферазы  повысилась  достоверно  по  сравнению  с  соответствующими  показателями  у  больных  при  лечении  немозолом  на  28  %  и  27  %  соответственно,  активность  каталазы  осталась  сниженной,  а  глутатионпероксидазы  —  неизмененной. 

Содержание  восстановленного  глутатиона  в  эритроцитах  при  лечении  цитофлавином  достоверно  снижалось  в  два  раза  и  приближалось  к  показателю  контрольной  группы  (табл.  2).

Таблица  2. 

Влияние  цитофлавина  на  про/антиоксидантный  статус  эритроцитов  больных  эхинококкозом

Выводы:

В  эритроцитах  людей,  больных  эхинококкозом,  уровень  малонового  диальдегида  повышен  в  3,25  раза,  что  может  свидетельствовать  о  интенсификации  процессов  перекисного  окисления  липидов.

Анализируя  результаты,  полученные  при  лечении  больных  цитофлавином,  можно  констатировать,  что  наблюдаемая  положительная  динамика  в  показателях  про/антиоксидантной  систем  эритроцитов  (приближение  к  показателям  здоровых  людей)  обусловлена  антиоксидантными  свойствами  лекарственного  препарата,  то  есть  способностью  взаимодействовать  с  избыточным  количеством  АФК,  прерывая  цепной  процесс  образования  свободных  радикалов  кислорода  и  перекисного  окисления  липидов.

Список  литературы:

1.Дубинина  Е.Е.  Некоторые  особенности  функционирования  ферментативной  антиоксидантной  защиты  плазмы  крови  человека  //  Биохимия.  —  1993.  —  Т.  58,  —  вып.  2. 

2.Жумабаев  Э.С.,  Михайлович  И.Е.,  Василевский  Э.Я.К  тактике  ведения  больных  после  эхинококкэктомии  печени.  Хирургия  Узбекистана.  —  2001.  —  №  3.  —  С.  36.

3.Каримов  Ш.И.  Эпидемиологические  аспекты  эхинококкоза  печени.  Хирургия.  —  1999.  —  №  7.  —  С.  37—40.

4.Медицинские  лабораторные  технологии  и  диагностика:  справочник  /под  ред.  А.И.  Карпищенко,  СПб,  1999.

5.Меньщикова  Е.Б.,  Зенков  Н.К.,  Бондарь  И.А.  с  соавторами.  Окислительный  стресс:  Патологические  состояния  и  заболевания.  Новосибирск.  2008.  —  284  с.

6.Петровский  Б.В.,  Милонов  О.Б.,  Дееничин  II.Г.  Хирургия  эхинококкоза.  М.:Медицина,  1985.

7.Beutler  E.  Red  cell  metabolism  a  manual  of  biochemical  methods/  E.  Beutler.  Grune&Stration,  Orlando,  1990.  —  P.  131—134.