ПОДБОР ДОЗОЗАВИСИМОГО ЭФФЕКТА ПРЕПАРАТА ТРОМБОВАЗИМ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТРОМБОЗОВ ВЕРХНЕГО САГИТТАЛЬНОГО СИНУСА У КРЫС

В настоящее время проблема тромбозов церебральных венозных синусов актуальна, так как причина возникновения тромбоза остается неизвестной в 20-35 % случаев. По данным статистики ISCVT (International Study on Cerebral Vein and Dural Sinus Thrombosis, 2004), заболеваемость ежегодно составляет 3–4 случая на 1 млн у взрослых и до 7 случаев на 1 млн у детей. Летальность при данном заболевании составляет от 5 до 30%, в процессе более чем 2-летнего наблюдения зафиксирован соответствующий показатель 8,3 %.

Основными факторами риска развития тромбоза мозговых вен и венозных синусов являются воспалительные процессы, вызванные инфекционными агентами (отиты, мастоидиты, синуситы, септические состояния), а также неинфекционные причины.

Неинфекционные причины тромбоза мозговых вен и венозных синусов могут быть локализованными (опухоли, ЧМТ, хирургические вмешательства в области головы и шеи) и общими (нарушение гемодинамики (обезвоживание, застойная сердечная недостаточность), заболевания крови (тромбоцитопения, полицитемия) и коагулопатии (при ДВС-синдроме, дефиците антитромбина) а также тромбофилитические состояния, связанные с беременностью, родами и приёмом оральных контрацептивов).

В развитии тромбоза мозговых вен и венозных синусов участвуют два механизма. Первый- окклюзия мозговых вен, вызывающая отёк мозга и нарушение венозного кровообращения. Вторым звеном патогенеза тромбоза является развитие интракраниальной гипертензии вследствие нарушения циркуляции ликвора, т.к. в норме цереброспинальная жидкость транспортируется из желудочков мозга через субарахноидальное пространство, адсорбируется в паутинных сплетениях и оттекает в верхний сагиттальный синус. Оба эти механизма обусловливают клиническую симптоматику синус-тромбоза.

Основной целью терапии является восстановление проходимости мозговых вен и синусов. Лечение включает 4 направления: этиологическое, антитромботическая терапия, лечение внутричерепной гипертензии и симптоматическое лечение.

Тромбовазим – первый пероральный тромболитик. Создан учеными Новосибирского Академгородка, производится АО Сибирский центр фармакологии и биотехнологии (СЦФБ) с применением запатентованной AXIS-технологии.

Препарат обладает тромболитическим действием, противовоспалительным и кардиопротективным эффектами. Механизм тромболитического действия связан с прямым разрушением нитей фибрина, образующих основной каркас тромба. Механизм кардиопротективного действия связан с улучшением кровоснабжения миокарда. Противовоспалительный эффект связан с влиянием на окислительную функцию нейтрофилов крови и тканевых макрофагов. Тромбовазим является низкотоксичным препаратом, не снижает уровень тромбоцитов и не влияет на время свертывания и длительность кровотечения.

Ранее проводимые исследования доказали эффективность и безопасность Тромбовазима для лечения хронической венозной недостаточности и инсультов у крыс.

Эксперимент проведен на 10-ти самцах крыс линии Wistar. Была проведена хирургическая подготовка животных: вводили Хлоралгидрат для наркоза в дозировке 450 мг/кг, фиксировали крыс в стереотаксической рамке в положении лежа. Череп был обнажен с помощью 1,5-см разреза по средней линии на спинной стороне головы. Были выявлены лямбда- и брегма-швы и продольное черепное окно (10х1,5 мм) было сделано между швами для выявления ВСС. Были приняты меры для сохранения твердой мозговой оболочки.

Тромбоз ВСС был вызван местным применением полоски фильтровальной бумаги, соответствующей размерам черепного окна, пропитанной 40% хлоридом железа в течении 3 минут в темноте. Далее поле промывали 0,9% солевым раствором. Удалённую полоску кости заменяли, герметизировали костным цементом и зашивали кожу. Во время хирургического вмешательства температуру тела поддерживали на уровне 37 °C с помощью термостатически контролируемой грелки. Крысу держали в клетке и давали свободный доступ к воде и пище. Общая процедура заняла около 15 минут. Контрольная группа подверглась аналогичной оперативной процедуре за исключением того, что вместо 40% хлорида железа использовался  0,9% солевой раствор. В ходе эксперимента вводился препарат в дозировках 40, 80, 160, 320 ЕД/кг дважды в сутки внутрибрюшинно. Через сутки после экспериментально вызванного тромбоза крыс вновь наркотизировали, снимали швы, удаляли костный цемент, вновь обнажая верхний сагиттальный синус для фиксации изменений. Дозировка считается эффективной, если при вторичном обнажении верхнего сагиттального синуса не наблюдается темных участков и ткань имеет первоначальный вид.

Процент выживаемости составил 90 %. Через сутки после вызванного тромбоза у животных не наблюдалось неврологической симптоматики: нарушений спонтанной и двигательной активности, чувствительности при оценке по тесту Гарсия (см. табл.1) 

Таблица 1.

Шкала неврологического дефицита Гарсия у крыс с ишемическим инсультом

Через 2 ч после операции производили внутрикардиальную инъекцию раствора Эванса синего (7,5 % р-р 2 мл).

На шести срезах, полученных с помощью альты с толщиной 2 мм, отсутствует зона ишемии и не наблюдается отека мозга (рис.1).

Рисунок 1. Окраска Эвансом синим

Через 2 суток после операции у животных извлекали мозг, рассекали его на 6 фрагментов; окрашивали трифенилтетразолий-хлоридом (1,5 % р-р).

На срезах отсутствует некроз и отек мозга (рис.2).

Рисунок 2. Окраска трифенилтетразолий-хлоридом

Вероятно, это связано с тем, что тромб не перекрывал полностью просвет сосуда, а также были хорошо развиты коллатеральные сети.

В результате поэтапного интрапеританеального введения экспериментальным животным раствора препарата Тромбовазим была обнаружена эффективность дозировки 320 ЕД/ кг. Это соответствует эффективной дозировке применения препарата у человека 4000 ЕД. При введении препарата в дозировках 40, 80, 160 ЕД/кг фиксировался тромбоз верхнего сагиттального синуса, видимых изменений не обнаруживалось.

Список литературы:

1. Максимова М.Ю., Домашенко М.А., Брюхов В.В.  Трудности диагностики тромбоза мозговых вен и венозных синусов// РМЖ -2015.- №24- С. 1476-1482
2. Бонь Е.И., Максимович Н. Е. Методы оценки неврологических нарушений в эксперименте// Вестник ВГМУ. - 2018. - Том 17, №4. - С. 22-28.
3. Руководством по уходу и использованию лабораторных животных / Национальный ин-т здоровья. США. № 85-23.
4. Хабриев Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005. 832 с.
5. Schaar, K. Functional assessments in the rodent stroke model / K. Schaar, M. M. Brenneman, S. I. Savitz // Exp. Transl. Stroke Med. - 2010 Jul. -Vol. 2, N 1. - P. 13.
6. Ferro J.M., Canhao P., Stam J. et al. Prognosis of cerebral vein and dural sinus thrombosis: results of the International Study on Cerebral Vein and Dural Sinus Thrombosis (ISCVT) // Stroke. 2004. Vol. 35. Р. 664–670
7. Ameri A. Cerebral venous sinus thrombosis /A. Ameri, M. G. Bousser //Neurol. Clin. – 1992. – №10. – P.87-111