ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ МИКРОФЛОРЫ ЭЯУЛЯТА И ВАГИНАЛЬНОГО БИОТОПА СУБФЕРТИЛЬНЫХ МУЖЧИН И ЖЕНЩИН

Эякулят мужчин и влагалищный биотоп женщин содержат большое количество различных микроорганизмов, которые могут являться как представителями нормофлоры, так и условно-патогенными обитателями, оказывая самый непредсказуемый эффект и выбирая своей точкой приложения сперматозоиды и мочеполовой тракт, нередко оказывая негативное влияние на репродуктивную функцию человека [1, 5].  Нормофлору вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста составляют множество видов микроорганизмов, среди которых ключевое положение занимают Lactobacillus spp [7]. В эякуляте фертильных мужчин зачастую встречаются условно-патогенные микроорганизмы в концентрациях, по данным ВОЗ не превышающих 10³ КОЕ/мл. Клиническое значение бактериоспермии, в особенности при выявлении представителей условно патогенных видов, остается до сих пор неясным [2, 4]. Однако высокая обсемененность условно патогенными микроорганизмами эякулята и вагинальной микрофлоры связана с патологией со стороны  женской и мужской половых систем, проявляющаяся бесплодием и преждевременными родами [7, 9]. Жизнедеятельность условно-патогенной микрофлоры в больших концентрациях способна влиять на количественный и качественный состав влагалищного биоценоза, а контаминация эякулята значительным количеством условно-патогенных микроорганизмов способна вызывать в организме синтез антиспермальных антител, что в свою очередь влияет на качественные и количественные характеристики сперматозоидов. Все это не может не влиять на репродуктивную функцию человека. Имеются результаты научных работ, доказывающие факт взаимосвязи неудачных попыток зачатия с помощью вспомогательных репродуктивных технологий и бактериальной обсемененностью эякулята [3]. Кроме того, некоторые виды, не относящиеся к роду Lactobacillus, способны стимулировать синтез провоспалительных цитокинов, поддерживающих активность воспаления, инициируя процессы, которые в конечном итоге повышают восприимчивость к инфекциям [6, 8, 10].

Цель исследования - изучить микробный пейзаж эякулята мужчин с бессимптомной бактериоспермией и вагинального биотопа женщин, состоящих в бесплодном браке.

Материалы и методы. Был проведен анализ клинических данных и результатов лабораторных исследований образцов эякулята, взятых у 92 мужчин, не имеющих клинических симптомов, характерных для инфекционно-воспалительных заболеваний, и вагинального секрета у 298 женщин. Средний возраст женщин и мужчин составил соответственно 34,1±0,8 и 37,7±0,7 года. У женщин материал мерно получали из заднего свода влагалища с помощью ложки Фолькмана. У мужчин взятие материала и его исследование проводили согласно стандартизованным методикам, предложенным экспертами ВОЗ (2010). Для бактериологического анализа исследуемых образцов готовили десятикратное разведение исходного материала, считая значимым для дальнейшего анализа у мужчин количество бактерий, превышающее 10³ КОЕ/мл. Стрепто- и энтерококки изолировали на кровяном агаре, стафилококки выделяли на желточно-солевом агаре (ЖСА), грибы рода Candida – на среде Сабуро, энтеробактерии определяли при высеве на агар Эндо, анаэробы –  на средах Блаурокка и МРС, а также обогащенной среде для контроля стерильности, разлитой «высоким столбиком» по пробиркам. Количество выделенных микроорганизмов выражали в виде значения десятичного логарифма числа КОЕ/мл биологического материала. Для статистической обработки данных использовали непарный вариант t-критерия Стьюдента.

Результаты. В ходе работы  было установлено, что у 91,3% мужчин эякулят населяли  микроорганизм, а у 8,7% исследуемых - был стерилен. Количество обитателей урогенитального биотопа было различным: бактерии одного вида обнаружены в 53,3%, двух – в 32,6%, трех - в 5,4% случаев. Подавляющее процент имела грамположительная флора, обнаруженная изолированно в спермоплазме у  71,7% исследуемых, среди которой преобладали представители рода Staphylococcus (62%) с высокой встречаемостью S. epidermidis (25%), S. haemolyticus (19,6%) и S.aureus (6,5%). Бактерии рода Streptococcus выделены у 18,5% (S. agalactiae - 4,3%, S. viridans - 6,5%; S. mitis – 3,3%), Enterococcus – у 5,4% мужчин (E. faecalis - 4,3%, E. hirae – 1,1%). Часть коринеформных микроорганизмов в составе микрофлоры эякулята составила 3,3%. У трети мужчин (33,7%) биотоп населяли только грамотрицательные микроорганизмы, среди которых встречались Escherichia coli – 15,2%, бактерии рода Enterobacter – 5,4% (E. aerogenes - 3,3%, E.cloacae et E. sakazakii – по 1,1%), Neisseria spp. – 4,3%, Citrobacter spp. – 4,3% (C. diversus - 2,2%; C. farmeri et C. freundii - 1,1%), Klebsiellapneumoniae – 3,3%. Помимо этого, в эякуляте 1,1% мужчин были обнаружены микрорганизмы рода Gemella или Candida albicans.

При исследовании вагинального содержимого установлено, что нормальная микрофлора, состоящая из представителей родов Lactobacillus и Bifidobacterium, обнаружена у 100 и 99% женщин соответственно. Однако, лишь в 52 и 83,6% случаев количество микроорганизмов было в пределах возрастной нормы.

Среди аэробных микроорганизмов преобладали стафилококки – 65,1% (S.aureus – 12,1%, S. hyicus – 5,7%, S. intermedius – 4,4%, S. epidermitis – 22,2%, S. haemolyticus – 6,7%, S. saprophyticus – 6%,). Enterococcus spp. изолированы у 15,7% женщин. В 10,7% проб присутствовали бактерии рода Streptococcus (в т.ч. 8,4% - S. agalactiae). E. coli обнаружена в вагинальном биотопе 27,5% женщин (включая нетипичные варианты).

Среди анаэробных микроорганизмов наибольшее распространение имели бактерии рода Peptostreptococcus (53,7%) и Peptococcus (45,6%). Bacteroides spp. высеян в 28,5% случаев. В 27,9% проб выделены Fusobacterium spp., а Eubacterium spp. – в 25,8%. Propionibacterium spp. изолирован в 26,9% случаев.

Грибки рода Candida населяли влагалищный биотоп у 20,1% исследуемых, среди которых у 11,1% был обнаружен вид C. albicans.

Заключение. Эякулят субфертильных пациентов с бессимптомной бактериоспермией содержит много видов условно-патогенных микроорганизмов, превышающих концентрацию 10³ и объединенных в ассоциации, с преобладанием грамположительных кокков. У трети мужчин сперма населена представителями семейства Enterobacteriaceae, среди которых чаще всего обнаруживается E.coli. Исследования вагинального биоценоза показали снижение численности основного представителя нормобиоты – Lactobacillus – в вагинальном биотопе у половины субфертильных женщин. Подобные изменения ассоциированы с наличием таких условно патогенных микроорганизмов как коагулазоотрицательные стафилококки, E. coli и энтерококки. Выявленные изменения состава нормофлоры влагалищного биотопа и увеличенное количество условно патогенных микроорганизмов в эякуляте мужчин, возможно, оказывают негативное влияние на эффективность применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Список литературы:

1. Годовалов А.П., Карпунина Т.И. Микробиота эякулята мужчин с бесплодием в условиях крупного промышленного города // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Социальные, гуманитарные, медико-биологические науки. – 2015. – Т.17, №5-2. – С. 338-343.
2. Годовалов А.П., Карпунина Т.И. Опыт изучения образцов эякулята инфертильных мужчин с бессимптомной бактериоспермией // Электронный научно-образовательный вестник Здоровье и образование в XXI веке. – 2015. – Т.17, №11. – С. 19-24.
3. Касимова Т.В., Богданов Ю.А., Кузнецов И.Д., Карпунина Т.И. Микрофлора эякулята как потенциальная причина репродуктивных проблем // Фундаментальные исследования. – 2012. – №2-2. – С. 308-310.
4. Godovalov A.P., Karpunina T.I. Microbiological and morpho-functional features of ejaculate from infertile men with asymptomatic bacteriospermia // Международный научно-исследовательский журнал. – 2016. – №9-3(51). – С. 34-38.
5. Kaur S., Prabha V., Sarwal A. Receptor mediated agglutination of human spermatozoa by spermagglutinating factor isolated from Staphylococcus aureus // J. Urol. – 2010. – Vol. 184(6). – P. 2586-2590.
6. Годовалов А.П. Комплексная оценка микрофлоры кишечника, влагалища и гормонального фона у женщин с вторичным бесплодием // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2016. – № 3 (127). – С. 58-59.
7. Годовалов А.П., Карпунина Н.С., Карпунина Т.И. Микробиота кишечника и влагалища женщин со вторичным бесплодием и заболеваниями желудочно-кишечного тракта // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2016. – № 6 (130). – С. 109-113.
8. Осипович О.А., Годовалов А.П. К вопросу о роли воспалительных заболеваний в развитии бесплодия у женщин // Медицинский альманах. – 2016. – № 5 (45). – С. 85-87.
9. Ширева Ю.В., Сандакова Е.А., Карпунина Т.И., Жуковская И.Г. Оценка социального, психосоматического и гинекологического статуса женщин, страдающих неспецифическим вагинитом // Уральский медицинский журнал. – 2010. – № 3. – С. 77-80.
10. Sheldon I.M., Owens S.E., Turner M.L. Innate immunity and the sensing of infection, damage and danger in the female genital tract. J. Reprod. Immunol. 2016. pii: S0165-0378(16)30027-4.