Телефон: 8-800-350-22-65
WhatsApp: 8-800-350-22-65
Прием заявок круглосуточно
График работы офиса: с 9.00 до 18.00 Нск (5.00 - 14.00 Мск)

Статья опубликована в рамках: Научного журнала «Студенческий» № 16(144)

Рубрика журнала: Технические науки

Секция: Биотехнологии

Скачать книгу(-и): скачать журнал часть 1, скачать журнал часть 2, скачать журнал часть 3, скачать журнал часть 4, скачать журнал часть 5, скачать журнал часть 6

Библиографическое описание:
Лесневская Д.А. ОПТИМИЗАЦИЯ ПАРАМЕТРОВ ИНКУБАЦИИ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ШТАММА A/VICTORIA/2570/2019 (H1N1) ВИРУСА ГРИППА НА КУРИНЫХ ЭМБРИОНАХ // Студенческий: электрон. научн. журн. 2021. № 16(144). URL: https://sibac.info/journal/student/144/209982 (дата обращения: 27.11.2021).

ОПТИМИЗАЦИЯ ПАРАМЕТРОВ ИНКУБАЦИИ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ШТАММА A/VICTORIA/2570/2019 (H1N1) ВИРУСА ГРИППА НА КУРИНЫХ ЭМБРИОНАХ

Лесневская Дарья Александровна

студент, институт естественных наук, Рязанский государственный университет имени С. А. Есенина,

РФ, Рязань

Научный руководитель Круглова Алла Петровна

канд. биол. наук, доц., институт естественных наук, Рязанский государственный университет имени С. А. Есенина,

РФ, Рязань

АННОТАЦИЯ

В статье представлены экспериментальные данные по изучению параметров культивирования штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа на куриных эмбрионах для изготовления вакцины.

 

Ключевые слова: вирус гриппа, культивирование вирусов, вакцина.

 

Введение

В настоящее время грипп является актуальной проблемой для всего человечества, занимая первое место по частоте и количеству случаев заболевания. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) считает, что единственным эффективным методом профилактики гриппа является массовая вакцинация населения [2].

Ежегодно Глобальная система эпиднадзора за гриппом (GISRS), регулируемая ВОЗ, подаёт сведения о заболеваемости. На основании этих сведений ВОЗ даёт рекомендации по штаммовому составу вакцин на следующий эпидемиологический сезон, а также предоставляет новые образцы штаммов вируса гриппа [1].

Для производства гриппозных вакцин нового поколения используются вирус гриппа типа A (подтипы A(H1N1) и A(H3N2)) и тип B (линии Yamagata и линии Victoria). Задачей биотехнологов на производстве гриппозных вакцин является оптимизация параметров культивирования вируса гриппа с целью увеличения выхода биомассы.

По данным ВОЗ на 2021 год одним из актуальных штаммов вируса гриппа типа A является A/Victoria/2570/2019 (H1N1).

Материалы и методы

Исследование проводилось на базе Биофармацевтической компании ООО «ФОРТ» в период с 1 марта по 10 марта 2021 года.

Для проведения исследования был взят штамм вируса гриппа типа A подтип A/Victoria/2570/2019 (H1N1). Образец штамма был предоставлен ВОЗ и рекомендован для производства гриппозной вакцины на 2021 год.

Использовались куриные эмбрионы в возрасте 9-15 суток, полученные с 1-ой Минской птицефабрики.

В ходе исследования было поставлено 4 опыта по определению четырех параметров инкубации при культивировании штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа на куриных эмбрионах: опыт 1 - температура, опыт 2 - влажность, опыт 3 - время инкубации и опыт 4 - возраст куриных эмбрионов.

Для опытов 1 и 4 заражение куриных эмбрионов проводили в аллантоисную жидкость на автоматической линии заражения.

Для опытов 2 и 3 заражение куриных эмбрионов проводили в аллантоисную жидкость по стандартной методике. Яйцо помещали в штатив, тупым концом вверх. Делали отверстие в скорлупе и вводили вертикально тонкую иглу на глубину 10-12 мм и заражали вируссодержащим материалом куриный эмбрион.

Зараженные куриные эмбрионы помещались в лотки и отправлялись на инкубацию в термальные камеры.

После инкубации куриные эмбрионы в опытах 1 и 4 проходили овоскопирование и отправлялись на автоматическую линию по сбору вируссодержащей аллантоисной жидкости. Далее проводилась инактивация вируса. И после стадий сепарирования, микро- и ультрафильтрации и центрифугирования определяли выход вирусного белка в сахарном вирусном концентрате.

В опыте 2 извлекали аллантоисную жидкость с помощью дозатора и наконечника в пробирку и градацией (мл). Объем аллантоисной жидкости является результатом опыта.

В опытах 3 после инкубации определяли жизнеспособность куриных эмбрионов с помощью овоскопирования и вскрытия [3].

Результаты и обсуждение

Опыт 1. Определение оптимальной температуры инкубации КЭ при культивировании штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа.

Для опыта 1 было взято 12 серий куриных эмбрионов, по 36 штук в каждой серии. После заражения, куриные эмбрионы помещались в термальные камеры, и устанавливалась температура инкубации. Результаты опыта представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Определение оптимальной температуры инкубации КЭ

№ серии

Температура инкубации, °C

Выход вирусного белка с 1 КЭ, мкг

1

36

17,3

2

36

25,4

3

36

24,2

4

35

24,2

5

35

29,6

6

35

28,9

7

34

32,3

8

34

33,1

9

34

29,8

10

33

34,4

11

33

37,1

12

33

36,6

 

При снижении температуры с 36°C до 33°C выход вирусного белка увеличивается. Ниже 33°C вирус гриппа не культивируется.

Опыт 2. Определение оптимальной влажности инкубации КЭ при культивировании штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа.

Для опыта 2 было взято 9 серий куриных эмбрионов, по 20 штук в каждой серии. После заражения, куриные эмбрионы помещались в термальные камеры, и устанавливалась влажность инкубации. Результаты опыта представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Определение оптимальной влажности инкубации КЭ

№ серии

Влажность инкубации, %

Объем аллантоисной жидкости, мл

1

55±2

6,7

2

55±2

7,1

3

55±2

6,9

4

65±2

8,3

5

65±2

8,9

6

65±2

9,2

7

70±2

7,5

8

70±2

7,8

9

70±2

7,9

 

При повышении влажности с 55±2% до 65±2% объем аллантоисной жидкости увеличивается. При дальнейшем ее увеличении объем аллантоистой жидкости падает.

Опыт 3. Определение оптимального времени инкубации КЭ при культивировании штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа.

Для опыта 3 было взято также 9 серий куриных эмбрионов, по 20 штук в каждой серии. Результаты опыта представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Определение оптимального времени инкубации КЭ

№ серии

Время инкубации, ч

Гибель КЭ, %

1

24

4,5

2

24

5,6

3

24

5,1

4

48

9,6

5

48

11,0

6

48

13,1

7

72

24,2

8

72

31,4

9

72

35,0

 

При увеличении времени инкубации с 24 часов до 72 часов процент гибели КЭ увеличивается.

Опыт 4. Определение оптимального возраста КЭ для культивирования штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа.

Для опыта 4 было взято 21 серия куриных эмбрионов, по 36 штук в каждой серии. Результаты опыта представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Определение оптимального возраста КЭ для культивирования вируса гриппа

№ серии

Возраст КЭ, сутки

Выход вирусного белка с 1 КЭ, мкг

1

9

15,6

2

9

17,2

3

9

19,1

4

10

28,4

5

10

30,2

6

10

34,2

7

11

45,7

8

11

44,2

9

11

49,1

10

12

62,4

11

12

65,3

12

12

64,3

13

13

67,5

14

13

69,8

15

13

59,7

16

14

55,4

17

14

59,1

18

14

57,6

19

15

51,4

20

15

50,9

21

15

48,0

 

При увеличении возраста КЭ с 9 суток до 13 суток выход вирусного белка увеличивается. А при дальнейшем увеличении возраста КЭ выход вирусного белка снижается.

Вывод

В ходе исследования были установлены оптимальные параметры инкубации при культивировании вируса штамма A/Victoria/2570/2019 (H1N1) вируса гриппа на куриных эмбрионах. Для производства гриппозной вакцины данный штамм рекомендуется культивировать при температуре 33°C и влажности 65±2% в течение 24 часов, и возраст куриных эмбрионов должен составлять 13 суток.

 

Благодарность

Автор выражает благодарность своему научному руководителю канд. биол. наук, доц. Кругловой Алле Петровне за советы и рекомендации при планировании и написании данной рукописи, а также начальнику цеха производства вакцин ООО «ФОРТ» Куликову Алексею Викторовичу за предоставленный опыт и оказанную помощь при проведении исследования, а также за важнейшие замечания по оформлению настоящей статьи.

 

Список литературы:

  1. Глобальная система эпиднадзора за гриппом и реагирования на него (GISRS): [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://www.who.int/influenza/gisrs_laboratory/en/ (Дата обращения: 11.04.2021).
  2. Кошина О. С., Еровеева М. К., Никифорова А. Н., Максакова В. Л. Вакцинопрофилактика гриппа в современных условиях // Медицинский совет. - 2016. - №07. - С. 86-89.
  3. Строганова И. Я. Куриные эмбрионы и их использование в вирусологии: метод. указания к лабораторным занятиям / Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2013. - 19 с.

Оставить комментарий

Форма обратной связи о взаимодействии с сайтом