ВЛИЯНИЕ  КАРБОКСИГЕМОГЛОБИНА  НА  ОПРЕДЕЛЯЕМЫЙ  УРОВЕНЬ  ОБЩЕГО  ГЕМОГЛОБИНА  В  КРОВИ  КРЫС

Фаткуллин  Ким  Вилевич

аспирант  кафедры  клинической  лабораторной  диагностики  ИДПО  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Ряховский  Андрей  Евгеньевич

аспирант  кафедры  патологической  физиологии  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Е-mail:  dr.ryahov@yandex.ru

Еникеев  Дамир  Ахметович

д-р  мед.  наук,  профессор  зав.  кафедрой  патологической  физиологии  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Байков  Денис  Энверович

д-р  мед.  наук,  профессор  кафедры  общей  хирургии  с  курсом  лучевой  диагностики  ИПО,  РФ,  г.  Уфа

Актуальность:  Определение  гемоглобина  (Hb)  является  одним  из  самых  распространенных  исследований  в  современной  лабораторной  диагностике.  В  то  же  время,  определяемый  уровень  общего  гемоглобина  лишь  отражает  суммарный  уровень  как  его  функциональных,  так  и  нефункциональных  форм.  Среди  десятков  производных  гемоглобина  одним  из  наиболее  значимых  является  карбоксигемоглобин  (COHb),  образующийся  при  связывании  угарного  газа  с  атомом  Fe²⁺  в  составе  гема  и  неспособный  переносить  кислород.  Угарный  газ  может  иметь  как  эндогенное,  так  и  экзогенное  происхождение.  В  организме  он  образуется  при  распаде  гемоглобина  в  клетках  РЭС  за  счет  окисления  метинильной  группы,  находящейся  между  пиррольными  кольцами  гема.  В  ходе  катаболизма  гема  эритроцитов  (включая  разрушение  части  клеток  во  время  эритропоэза  в  костном  мозге)  образуется  около  79  %  эндогенного  угарного  газа;  остальная  его  часть  (до  21  %)  формируется  в  результате  расщепления  миоглобина,  цитохромов,  металлосодержащих  ферментов  (каталаза,  пероксидаза,  триптофанпирролаза,  гуанилатциклаза,  NO-синтаза  и  др.),  перекисного  окисления  липидов,  а  также  действия  ксенобиотиков  и  некоторых  бактерий  [1;  3;  5].  За  счет  образования  СО  в  организме  уровень  карбоксигемоглобина  в  крови  здоровых  людей  достигает  3  %  от  общего  Hb.  Основными  экзогенными  источниками  угарного  газа  являются  выхлопные  газы  машин,  печи  и  камины,  а  также  краски  и  растворители,  содержащие  метиленхлорид  (его  пары  абсорбируются  легкими,  попадают  в  кровоток  и  при  окислении  в  печени  могут  образовать  СО),  а  также  курение  табака.  У  курящих  отмечается  увеличение  уровня  COHb  в  крови  до  15—22  %  [2].

Давно  известен  факт  интерференции  карбоксигемоглобина  в  отношении  определения  общего  гемоглобина  классическим  гемиглобинцианидным  методом  (λ=540  нм):  в  присутствии  COHb  увеличивается  время  реакции,  зависящее  от  pH  трансформирующего  реактива  и  температуры  среды  [4].

Цель:  Определить  интерферирующие  влияние  COHb  на  определяемый  уровень  Hb  в  крови  крыс.

Материалы  и  методы:  Работа  выполнена  на  10  беспородных  белых  крысах  самцах.  Лабораторные  животные  содержались  на  стандартной  диете  вивария,  при  свободном  доступе  к  пищи  и  воде,  за  12  часов  до  начала  эксперимента  животные  не  получали  корм,  доступ  к  воде  не  ограничивался.  В  ходе  настоящего  исследования  нами  собрано  20  образцов  по  3  мл  крови.  Полученный  материал  был  в  разной  степени  насыщен  монооксидом  углерода.  С  целью  выявления  интерферирующего  влияния  COHb  нами  были  проведены  измерения  образцов  с  одинаковым  уровнем  Hb  и  разной  долей  COHb.  При  этом  использовались  приборы,  реализующие  различные  методы  определения:  азидметгемоглобиновый  (λ=570  и  880  нм,  HemoCue),  гемиглобинцианидный  в  двух  вариантах  (λ=540  нм,  Минигем-540,  λ=525  нм,  ГЕМА  8-01-“АСТРА”),  а  также  гемихромный  метод  (при  λ=540  нм,  спектрофотометр  UNICO  2605).

Результаты:  В  результате  экспериментов  было  отмечено  существенное  влияние  карбоксигемоглобина  на  показатели  Hb  при  измерениях  азидметгемоглобиновым  и  гемиглобинцианидным  (при  λ=540  нм)  методами:  в  образцах  с  СОHb  >20  %  происходило  существенное  завышение  значения  общего  гемоглобина  по  сравнению  с  исходными  образцами  (СОHb  <5  %).  Ошибка  составила  до  23  %  для  азиметгемоглобинового  метода  и  до  10,8  %  для  гемиглобинцианидного  метода(при  λ=540  нм).  Необходимо  отметить,  что  гемиглобинцианидный  метод  (при  λ=540  нм)  позволяет  получить  корректные  результаты,  но  время  необходимое  для  полной  реакции  увеличивается  с  ростом  COHb  в  образце  и  может  достигать  2—3  часов  (при  COHb  >80  %,  pH  9,  комнатной  температуре).  Применение  гемихромного  метода  также  может  приводить  к  получению  завышенного  значения  Hb  в  связи  с  длительностью  трансформации  COHb  в  гемихром,  но  время,  необходимое  для  перехода  СОHb  существенно  ниже,  чем  при  классическом  гемиглобинцианидном  (при  COHb  >80  %,  время  реакции  до  15  минут). 

Столь  значительная  интерференция  в  этих  случаях,  вызвана,  вероятно,  «наложением»  спектральной  линии  COHb  в  связи  с  его  медленным  переходом  в  метгемоглобиназид/гемиглобинцианид/гемихром,  а  также  различиями  в  светопоглощении  присутствующих  производных  гемоглобина.

Наилучший  результат  показал  гемиглобинцианидный  метод  при  λ=525  нм,  что  обусловлено  практически  одинаковым  светопоглощением  при  этой  длине  волны  COHb  и  оксигемоглобина.

Таблица  1.

Ошибка  определения  общего  гемоглобина  в  присутствии  HbCO  (кровь  крыс)

Вывод:  Из  использованных  методов  определения  гемоглобина  наиболее  корректным  оказался  гемиглобинцианидный  метод  (при  λ=  525  нм),  а  также  гемихромный  метод  с  учетом  увеличенного  времени  экспозиции  гемолизата.  В  целом,  для  обеспечения  правильности  определения  общего  Hb  в  присутствии  COHb,  нужно  учитывать  аналитические  особенности  применяемого  прибора:  длину  волны,  при  которой  происходит  измерение,  время  реакции,  а  также  температуру  среды  и  pH  трансформирующего  реактива.  Другой  путь  —  экспериментальное  определение  интерференции  COHb  при  измерении  Hb  на  конкретном  приборе.

Список  литературы:

1. Коржов  В.И.,  Видмаченко  А.В.,  Коржов  М.В.  Монооксид  углерода  (обзор  литературы)  //  Журн.  АМН  України.  —  2010.  —  Т.  16,  —  №  1.  —  С.  23—37.
2. Тиунов  Л.А.,  Кустов  В.В.  Токсикология  окиси  углерода./  М.:  Медицина,  1980.  —  С.  142.
3. Шулагин  Ю.А.  Мониторинг  эндогенной  моноокиси  углерода  у  человека  и  животных  методами  лазерного  спектрального  анализа:  Автореф.  дис.  ...  канд.  биол.  наук.  —  М.,  2005.
4. Rodkey  F.  Lee.  Kinetic  Aspects  of  Cyanmethemoglobin  Formation  from  Carboxyhemoglobin/  Clinical  Chemistry  —  1967  Jan  —  Vol.  13  —  №  1  —  P.  2—5.
5. Omaye  S.T.  Metabolic  modulation  of  carbon  monoxide  toxicity  //  Toxicology.  —  2002.  —  №  180.  —  P.  139—150.