ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ТРИХОФИТИИ ВЕРБЛЮДОВ

PREVENTION AND TREATMENT TRICHOPHYTII CAMELS

Mynbay Umitzhanov

doctor of veterinary sciences, as. professor, Kazakh scientific research veterinary institute,

Kazakhstan, Almaty

Shukirbay Tokeev

candidate of veterinary sciences, Kazakh scientific research veterinary institute,

Kazakhstan, Almaty

АННОТАЦИЯ

В статье приведены результаты эффективности инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов, раствора и мазей при кожных заболеваниях, вызванных возбудителями грибковой инфекции.

ABSTRACT

The results of the effectiveness of the inactivated vaccine against Trichophyton camels, solution and ointment for skin diseases caused by pathogens of fungal infection.

Ключевые слова: вакцина, инактивация, верблюд, трихофития, штамм.

Keywords:  vaccine, inactivation, camel, trichophytia, strain.

Введение. Дерматомикозы (трихофития, микроспория, фавус) – это кожное заболевание, встречающееся между шерстью и кожным покровом и относящаяся к большой группе особо опасных грибковых инфекций. С этой особо опасной грибковой инфекцией десятки лет и до настоящего времени боряся научные исследователи Казахстана, ближнего и дальнего зарубежья.

В странах независимых государств (СНГ) и в странах дальнего зарубежья сельское хозяйство развито на высоком уровне и если против бактериальных и вирусных инфекций найдены эффективные меры защиты, то дерматомикозные болезни до сегодняшнего дня считаются актуальной проблемой.

В Республике Казахстан по результатам последнего подсчета насчитывается 160000 поголовья верблюдов. Самое большое количество верблюдов насчитывается в Мангыстауской – 41500, Атырауской – 17300, Южно-Казахстанской – 16900 областях и самое меньшее количество верблюдов не превышает 500 голов в северных областях.

В Республике Казахстан верблюды содержатся в крупных фермерских, крестьянских хозяйствах и у частных индивидульных владельцев.

Повышению рейтинга верблюдоводческих хозяйств и получения от верблюдов продукции высшего качества, в первую очередь, препятствует такое заболевание, как трихофития.

Это заболевание вызывается патогенными грибками, поэтому лечение трихофитии антибиотиками не всегда эффективно.

После развала Союза и с обретением каждой республики независимости, производство вакцины «КЕМЕЛВАК» прекратило свое существование.

В последние годы частота встречаемости трихофитии верблюдов в странах СНГ и дальнего зарубежья, приводит к опасности заражения людей, что требует разработке наиболее эффективной, безвредной, высокоиммуногенной и бехопасной вакцины.

Целью исследования является специфическая профилактика и лечение трихофитии верблюдов.

Материалы и методы исследований. Мониторинг эпизоотической ситуации по трихофитии верблюдов проведен в верблюдоводческих хозяйствах Алматинской, Мангыстауской, Кызылординской и Южно-Казахстанской областей путем сбора анамнестических данных, исследования больных животных в стаде, клинического обследования животных различного возраста и микологических исследований патологического материала.

Экспериментальные исследования проводили в условиях лаборатории микологии ТОО «КазНИВИ».

Для проведения исследований патологический материал у больных животных отбирали с периферии очагов поражения, не подвергавшихся медикаментозному лечению. Корочки с остатками шерсти, а также некоторое количество шерсти выдергивали пинцетом из зараженных участков (по возможности менее загрязненных) и помещали в пробирки с ватными пробками или в бумажные пакетики.

Образцы снабжали этикеткой с указанием области, района, хозяйства, возраста и степени поражения животного, а также даты взятия материала для исследования в лаборатории.

Для микроскопического исследования, патологический материал помещали в стерильные чашки Петри по ГОСТ 1770-74, которые ставили на темный фон (черную бумагу). С помощью глазного скальпеля отрезали и отбирали, отрезки утолщенные корневые части покрова шерсти, покрытые белым налетом и чешуйки кожи. Длина отрезков, подготовленных к микроскопии 1–2 мм. Затем несколько отрезков покрова шерсти и чешуек (8–10) переносили на предметное стекло по ГОСТ 9284-75 в каплю 10–15 %-ного едкого калия или натрия по ГОСТ 4328-77, слегка подогревали над пламенем горелки до появления белого ореола вокруг капли, после чего добавляли каплю 50 %-ного водного раствора глицерина по ГОСТ 6259-75 и препарат накрывали покровным стеклом. Микроскопирование проводили вначале с объективом х10, а затем х40.

При микроскопии по ГОСТ 8074-82 зараженных волос от животных, больных трихофитией, обнаруживали чехол из артроспор вокруг и в корне волос, расположенных в виде цепочек, внутренней части волос и развитие мицелия вокруг и внутри стержня волос, а также в кожных чешуйках отмечали мицелий гриба и цепочки артроспор.

Размер артроспор в патологическом материале от животных, больных трихофитией, составлял 2,5–7 мкм.

Обнаружение грибных элементов в патологическом материале (артроспоры, мицелиальные нити, макро - и микроконидий) дает возможность поставить предварительный диагноз на наличие трихофитии. Для точного определения вида возбудителя необходимо выделение гриба в чистой культуре.

Для получения чистой культуры гриба и определения его вида проводили посевы из корневых частей шерсти и кожных чешуек.

Посевы производили на следующие питательные среды:

• сусло-агар и агар Сабуро – для выделения культур от верблюдов, лошадей, пушных зверей, кроликов, морских свинок, мышевидных грызунов, кошек и собак.

При первичной изоляции дерматофитов с целью подавления роста сопутствующей микрофлоры к указанным средам добавляли антибиотики: пенициллин со стрептомицином (100-200 ЕД/см³) и актидион (циклогексимид) 0,1–0,5 мг/см³.

Пораженные частички шерсти и чешуйки кожи размером не более 2 мм переносили в стерильную чашку Петри, откуда брали отобранный материал для высева на питательные среды в пробирки. Посев производили микологической петлей. Предварительно петлю накаливали над пламенем горелки и, слегка погружая в питательную среду, ее охлаждали. Затем иглой прикасались к частичке шерсти (чешуйке) и, соблюдая правила асептики, переносили их по одному на поверхность косяка питательной среды. Шерсть высевали в два-три участка поверхности агара на расстоянии 1–1,5 см друг от друга. На каждую экспертизу брали по 7–10 пробирок. Посевы выдерживали в термостате при температуре 28^оС до 30 дней.

В случае сильного загрязнения материала посторонней микрофлорой, быстро опережающей рост возбудителя, прибегали к обработке 70^о – этиловым спиртом. При этом отобранные частички материала переносили в стерильную чашку Петри, заливали на 5 минут 15-ю см³ спирта, затем спирт удаляли пипеткой и дважды промывали стерильной водой; наливали по 15–20 см³ стерильной воды и отсасывали пипеткой. Шерсть подсушивали в термостате при 37^оС и высевали на питательные среды.

Появление роста колоний дерматофитов на месте посева пораженной шерсти или кожных чешуек отмечали на 3–5-е сутки. В отдельных случаях развитие возбудителя наблюдали на 20-й сутки, поэтому наблюдения за посевами вели в течение месяца. Формирование колоний дерматофитов разных видов наступают в различные сроки – на 21-й день Tr. sarkisovii. Описание культур проводили в этот период.

При определении вида возбудителя описывали культуральные признаки: размеры колоний, их структуру и цвет, строение растущего края, пигментацию обратной стороны колонии к питательной среде, проводили микроскопическое исследование культур, отмечая строение и ширину мицелия, форму и размеры микроконидии, макроконидии, хламидоспор и артроспор.

Микроскопирование препаратов проводили сначала с объективом х10 и х40.

По характеру роста возбудителя дерматомикоза верблюдов на питательных средах МПГА, сусло-агаре, агаре Сабуро и по данным микроскопии с описанием культурально-морфологических свойств и с применением определителей [1; 2; 3; 4] проводили идентификацию выделенных культур дерматофитов.

Культивирование полевых культур проводили на питательных средах суслоагар, агар Сабуро, мясо-пептонно-глицериновый агар с 2 %-ой глюкозой по ГОСТ 17206-96; ГОСТ 20730-75, при температуре 28^о С в течение 2-х недель согласно условиям культивирования в термостате.

Концентрацию гриба (микроконидии) в 1 см³ питательной среды определяли разбавлением физиологическим раствором (9 см³) с последующим подсчетом в камере Горяева с использованием микроскопа.

В исследованиях для контрольного заражения были использованы наиболее иммуногенные полевые гомологичные эпизоотические культуры, выделенные от больных трихофитией верблюдов.

Результаты и обсуждения. В Республике Казахстан под руководством доктора ветеринарных наук, лаборатории микологии ТОО «КазНИВИ» разработана комплексная живая и инактивированная пятивалентная вакцина против трихофитии сельскохозяйственных животных, а также моновакцины: живая и инактивированные вакцины против трихофитии верблюдов. Указанные вакцины против трихофитии сельскохозяйственных животных применяют два раза с интервалом 14 дней согласно рекомендациям. Напряженный иммунитет у иммунизированных животных создается с пролонгацией в течение 12 месяцев [5; 6; 7; 8].

В настоящее время для изготовления биопрепаратов против трихофитии и микроспории используются штаммы Tr.mentagrophytes F-0316, Tr. sarkisovii F-0319, Tr. sarkisovii F-0080, Tr. verrucosum F-0320, Tr. verrucosum F-0271, Tr. verrucosum varriantis autotrophycum F-0321, Tr. equinum F-0322 и Microsporum canis F-0318. Указанные штаммы гриба депонированы в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО «КазНИВИ» и получены на них предварительные и инновационные патенты Республики Казахстан. Против трихофитии и микроспории сельскохозяйственных и плотоядных животных изготовлены мази и растворы для первичной обработки дерматомикозов, а также дезинфицирующее средство против возбудителей бактериальной и дерматомикозной инфекции [8; 9; 10].

Эффективность опытно-экспериментальные серии инактивированной вакцины была проверена на кроликах, получены положительные результаты. Профилактическая и лечебная эффективности разработанной опытно-экспериментальной инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1.

Профилактическая эффективность разработанной опытно-экспериментальной инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов на лабораторных животных (кроликах)

Таблица 2.

Лечебная эффективность разработанной опытно-экспериментальной инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов на лабораторных животных (кроликах)

В таблицах 1 и 2 приведены результаты наблюдения за кроликами опытных и контрольных групп в течение 20 суток, при этом у иммунизированных опытных кроликов клинических признаков трихофитии не наблюдали, а в контрольной группе кроликов наблюдали выраженные клинические признаки болезни.

Для определения лечебной дозы инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов были испытаны на больных в контрольной группе кроликов двойные профилактические дозы инактивированной вакцины внутримышечно 2 раза с интервалом 14 суток. Лечебная эффективность вакцины наблюдалась спустя 28–30 дней после последней иммунизации. В специально зараженных участках наблюдались отпадение корок, заживление и рост новой шерсти.

На 20-и головах верблюжат были применены рекоменодванный раствор [9] для первичной обработки поражений кожи животного дерматофитами, дале были применены мазь для лечения дерматомикозов сельскохозяйственных и плотоядных животных [10] два раза, то есть утром и вечером, которые представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Эффективность раствора для первичной обработки пораженных трихофитией участков и мази против дерматомикозов сельскохозяйственных и плотоядных животных

Из данных 3-ой таблицы видно, что эффективность лечения от применении раствора для первичной обработки пораженных трихофитией участков и мази против дерматомикозов сельскохозяйственных и плотоядных животных составляет 20–25 суток.

В настоящее время для изготовления биопрепаратов против трихофитии и микроспории используются штаммы Tr.mentagrophytes F-0316, Tr. sarkisovii F-0319, Tr. sarkisovii F-0080, Tr. verrucosum F-0320, Tr. verrucosum F-0271, Tr. verrucosum varriantis autotrophycum F-0321, Tr. equinum F-0322 и Microsporum canis F-0318. Указанные штаммы гриба депонированы в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО «КазНИВИ» [11; 12; 13; 14; 15; 16; 17; 18].

Выводы. Профилактическая и лечебная эффективность вакцины наблюдалась спустя 28–30 дней после последней иммунизации, которая составила 100 %. По результатам научных исследований, установлено, что инактивированная вакцина против трихофитии верблюдов рекомендована для определения профилактической и лечебной эффективности в производственных условиях.

В настоящее время инактивированная вакцина против трихофитии верблюдов испытана комиссионно в верблюдоводческих хозяйствах Алматинской, Кызылординской и Мангыстауской областей и получены положительные результаты.

На разработанную инактивированную вакцину подготовлена нормативно-техническая документация, также на вакциный штамм и на инактивированную вакцину получены предварительные и инновационные патенты Республики Казахстан (Умитжанов М., Боранбаева Р.С., Токеев Ш.О. и др., 2012).

Имеется Акты о результатах положительного решения проведенных в производственных условиях испытания вакцины на больных трихофитией верблюдах, а также в 2014 году выпущена монография «Мероприятия против распространения трихофитии верблюдов» (Умитжанов М., Боранбаева Р.С., Токеев Ш.О., 2014).

Список литературы:

1. Кашкин П.Н., Хокряков М.К., Кашкин А.П. Определитель патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов. – Ленинград.: Медицина. 1979. 272 с.
2. Кашкин П.Н., Лисин В.В. Практическое руководство по медицинской микологии. – Ленинград: Медицина. 1983. С. 5–168.
3. Саркисов А.Х., Королева В.П., Квашнинина Е.С., Грезин В.Ф. Диагностика грибных болезней (микозов и микотоксикозов) животных. – М.: Колос. 1971. С. 3–144.
4. Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. – М.: Мир, 2001. С. 3–486.
5. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С. Пятивалентная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных // Предпатент Республики Казахстан № 21359. 2007. Бюл. № 3.
6. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С. Пятивалентная инакти-вированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных // Инновационный патент Республики Казахстан № 20068. 2007. Бюл. № 6.
7. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т., Токеев Ш.О. Вакцина против трихофитии верблюдов // Инновационный патент Республики Казахстан № 21186. 2008. Бюл. № 5.
8. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т., Токеев Ш.О. Способ получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов // Инновационный патент Республики Казахстан № 27243. 2012. Бюл. № 1.
9. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С. Раствор для первичной обработки поражений кожи животного дерматофитами // Инновационный патент № 22255. 2009. Бюл. № 1.
10. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т., Токеев Ш.О. Мазь для лечения дерматомикозом сельскохозяйственных и плотоядных животных // Инновационный патент № 22254. 2009. Бюл. № 1.
11. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., С.А. Турсынкулов Штамм гриба Tr. mentagrophytes F-0316, используемы для изготовления вакцины против дерматомикозов животных // Предпатент Республики Казахстан № 18780. 2006. Бюл. № 6.
12. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Tr. Sarkisovii F-0319, используемы для изготов-ления вакцины против трихофитии верблюдов // Предпатент Республики Казахстан № 19585. 2006. Бюл. № 12.
13. Умитжанов М., Токеев Ш.О., Боранбаева Р.С., Бижанов Б.Р., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Trichophyton sarkisovii F-0080, под-вид sarkisovii, Ivanova et Polyakova sp.nov., используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов // Предпатент Республики Казахстан № 23009. 2009. Бюл. № 10.
14. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Tr. verrucosum F-0320, используемый для изготовления вакцины против трихофитии крупного рогатого скота // Предпатент Республики Казахстан № 20233. 2007. Бюл. № 1.
15. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Шалабаев Б.А. Штамма грибаTrichophyton verrucosum F-0271, используемый для изготовления инактиви-рованной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота // Инновационный патент Республики Казахстан № 29619. 2014. Бюл. № 2.
16. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Tr. verrucosum variantis autotrophycum F-0321, используемый для изготовления вакцины против трихофитии овец и коз // Предпатент Республики Казахстан № 19706. 2007. Бюл. № 12.
17. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Tr. еquinum F-0322, используемый для изготовления вакцины против трихофитии лошади // Предпатент Республики Казахстан № 19707. 2007. Бюл. № 1.
18. Умитжанов М., Бижанов Б.Р., Боранбаева Р.С., Арысбекова А.Т. Штамм гриба Microsporum canis F-0318, используемы для изготовления вакцины против дерматомикозов плотоядных животных // Предпатент Республики Казахстан № 19705. 2006. Бюл. № 11.