ВЛИЯНИЕ  СОМАТИЧЕСКОГО  ЭКСТРАКТА  FASCIOLA   HEPATICA  НА  СОСТОЯНИЕ  СЕМЕННИКОВ  ЛАБОРАТОРНЫХ  ЖИВОТНЫХ

Красникова  Евгения  Владимировна

аспирант  ФГБОУ  ВПО  Пермская  ГСХА,  РФ,  г.  Пермь

E-mail:  

Сивкова  Татьяна  Николаевна

д-р  биол.  наук,  профессор  ФГБОУ  ВПО  Пермская  ГСХА,  РФ,  г.  Пермь

E-mail: 

IMPACT  OF  FASCIOLA  HEPATICA  SOMATIC  EXTRACT  INOCULATION  TO  CONDITION  OF  LABORATORY  ANIMALS  TESTES

Eugenia  Krasnikova

postgraduate  student  of  Perm  State  Agricultural  Academy,  Russia,  Perm

Tatyana  Sivkova

doctor  of  Biological  Science,  professor  of  Perm  State  Agricultural  Academy,  Russia,  Perm

АННОТАЦИЯ

Кариопатическими  и  гистологическими  методами  доказано  повреждающее  действие  соматического  экстракта  фасциолы  на  сперматогенный  эпителий  лабораторных  мышей  после  однократного  внутрибрюшинного  введения.  Под  воздействием  экстракта  нарушается  аппарат  микротрубочек  веретена  деления,  что  приводит  к  формированию  патологических  половых  продуктов.

ABSRACT

Negative  effect  after  single  intraperitoneal  injection  of  Fasciola  hepatica  somatic  extract  to  spermatogenic  epithelium  of  laboratory  mice  is  proven  by  karyopatical  and  histological  investigations.  Division  of  cells  proceeded  with  damage  of  microtubules  apparatus  and  pathological  sperm  cells  formed.

Ключевые  слова:  фасциола;  экстракт;  мыши;  семенники.

Keywords:  Fasciola;  extract;  mice;  testes.

В  настоящее  время,  как  экспериментальными  исследованиями,  так  и  клиническими  наблюдениями  установлено  кариопатическое  воздействие  продуктов  метаболизма  трематод  на  органы  размножения  животных  [1—3].  В  то  же  время,  сведений,  касающихся  патологий  органов  размножения  у  сельскохозяйственных  животных  при  фасциолезе  практически  нет.  Известна  только  возможность  абортов  у  коров  при  данной  инвазии.  В  связи  с  недостаточной  изученностью  проблемы  воздействия  продуктов  метаболизма  трематод  целью  нашей  работы  было  установить  характер  и  степень  патологических  изменений  сперматогенного  эпителия  белых  мышей  под  их  влиянием.

Материалы  и  методы.   Половозрелые  формы  F.hepaica  получали  от  спонтанно  зараженных  овец,  обрабатывали  раствором  антибиотиков,  гомогенизировали,  растирали  в  ступке  с  кварцевым  песком  и  экстрагировали  фосфатно-солевым  буферным  раствором.  Очищенный  экстракт  проверяли  на  стерильность,  определяли  содержание  белка  на  полуавтоматическом  биохимическом  анализаторе  StatFax  с  применением  стандартных  реактивов  «Витал»  и  «Ольвекс».

Затем  экстракт  однократно  внутрибрюшинно  вводили  нелинейным  белым  мы­шам  —  самцам  массой  18—20  г  в  дозе  100  мкг  белка  на  голову.  Контрольная  группа  жи­вотных  оставалась  интактной.  Убой  мышей  проводили  через  4;  12;  24;  48;  72  часа  методом  цервикальной  дис­локации. 

Из  семенников  готовили  мазки-отпечатки,  которые  фиксировали  метиленовым  синим  по  Май-Грюнвальду  и  затем  окрашивали  по  Романовскому  и  просматривали  под  микроскопом  при  увеличении  окуляра  10  объектива  40—100.  Определяли  митотический  индекс  в  процентном  соотношении  делящихся  клеток  к  общему  числу  и  подсчитывали  количество  патологических  фигур  деления.  Отдельно  отмечали  различные  патологии  мейоза  и  определяли  их  процентное  соотношение  к  общему  количеству  клеток. 

Семенники  немедленно  помещали  в  стеклянные  контейнеры  и  заливали  10  %-ным  раствором  нейтрального  формалина,  после  чего  проводили  стандартное  гистологическое  исследование  на  гистопроцессоре  Leica  TP  1020  и  на  заливочном  аппарате  Thermo  Scientific  Histostar.  С  полученных  парафиновых  блоков  изготавливали  срезы  толщиной  2—3  микрона  на  микротоме-полуавтомате  фирмы  Leica.  Полученные  срезы  окрашивали  гематоксилином  и  эозином  (обзорная  методика  окраски)  и  по  методу  Ван  Гизон.  Срезы  исследовали  на  световом  микроскопе  фирмы  Leica  с  окуляром  10,  при  увеличении  объектива  5,  40,  100. 

Статистическую  обработку  фактического  материала  проводили  методом  вариационной  статистики  с  использованием  t-критерия  Стьюдента.

Результаты.   Из  половозрелых  форм  фасциол  был  получен  стерильный  экстракт  с  содержанием  белка  0,11  г/л,  который  был  использован  для  последующего  внутрибрюшинного  введения  мышам-самцам.  Общее  состояние  контрольных  и  опытных  животных  оставалось  удовлетворительным  на  протяжении  всего  периода  эксперимента.  Обнаруженные  кариопатические  изменения  представлены  в  таблице.

Таблица  1.

Частота  кариопатических  последствий  в  семенниках  мышей  после  введения  экстракта  F .hepaica

Наши  наблюдения  позволили  установить,  что  под  влиянием  соматических  продуктов  F.hepatica  нарушается  деления  сперматогенного  эпителия  с  повышением  митотического  индекса  через  4  и  48  часов,  в  остальные  периоды  наблюдения  данный  показатель  незначительно  отличался  от  контроля.

Значительное  количество  патологических  фигур  деления  регистрировали  через  24  часа  (в  3,3  раза),  через  48  часов  (в  2  раза)  и  через  72  часа  (в  4,5  раза).  Среди  патологий  деления  наиболее  часто  встречались  преждевременное  расхождение  хромосом  в  метафазе  и  трехполюсная  анафаза.  Количество  остальных  видов  патологий  было  небольшим.

В  результате  наблюдаемых  изменений  аппарата  деления  происходит  формирование  патологических  спермиев.  Гистологические  исследования  показали,  что  в  семенниках  лабораторных  мышей  происходит  отек  стромы  органа,  значительно  снижается  сперматогенез,  в  результате  чего  часть  канальцев  запустевает.  В  сохранивших  активность  канальцах  спермии  фрагментированы  и  находятся  в  состоянии  агглютинации.  Обнаруженные  нами  изменения  свидетельствуют  о  значительном  снижении  репродуктивной  функции  экспериментальных  животных.

Рисунок  1.  Семенник  мыши.  Отек  стромы,  неравномерный  сперматогенез.  Фрагментация  сперматозоидов.  Окраска  гематоксилином-эозином  Увел.Х400

Полученные  в  ходе  нашего  эксперимента  данные  подтверждают  отрицательное  влияние  продуктов  метаболизма  гельминтов  на  половые  клетки  хозяина,  в  значительной  степени  снижающее  репродуктивную  функцию  инвазированных  животных.

Выводы.   Соматический  экстракт  F.hepatica  при  однократном  внутрибрюшинном  введении  самцам  белых  мышей  вызывает  нарушение  сперматогенеза,  которое  наиболее  выражено  спустя  24—48  часов  в  виде  патологии  движения  хромосом  в  метафазе  и  анафазе,  что  приводит  к  формированию  патологических  половых  продуктов  и,  следовательно,  к  угнетению  репродуктивной  функции. 

Список  литературы:

1.Ильинских  И.Н.,  Новицкий  В.В.,  Ильинских  Е.Н.,  Ильинских  Н.Н.,  Ткаченко  С.Б.  Инфекционная  кариопатология.  Под  ред.  Н.Н.  Ильинских.  Томск:  Изд-во  Том.  ун-та,  2005.  —  168  с.:  ил.

2.Hamada  F.M.,  Abdel-Aziz  A.,  Badr  F.,  Moustafa  A.,  Rashad  A.  The  mutagenic  effect  of  praziquantel  in  S.мansoni  —  infected  mice.  Arab.  J.  Lab.  —  1992.  —  vol.  18.  —  P.  301—311.

3.Motorna  O.O.,  Martyn  H.,  Gentile  G.J.,  Gentile  J.M.  Аnalisis  of  lacI  mutation  in  Big  Blue  transgenic  mice  subjected  to  parasite-indused  inflammation.  Mutat.  Res.  fund.  And  Mol.  Mech.  of  Mutagen.  —  2001.  —  Vol.  484.  —  P.  69—76.