ВЛИЯНИЕ ГЕПАРИНА И ЗООТОКСИНОВ НА ЭРИТРОЦИТАРНЫЙ СТАТУС ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ КРЫС

Малиновский Дмитрий Сергеевич

аспирант, ННГУ, г. Н. Новгород

E-mail: 

По немногочисленным данным литературы известно, что при внутривенном введении гепарина кроликам в дозе 15—30 МЕ/кг неза­висимо от дозы препарата содержание эритроцитов, уровень гемогло­бина и гематокрит находились в пределах физиологических колебаний на протяжении 10—12 часов после введения. Количество ретикуло­цитов в первые часы увеличивалось на 15 %, с последующим сниже­нием до исходных величин. Через 30 мин после введения гепарина от­мечается отчетливый сдвиг кислотной эритрограммы вправо, что сви­детельствует о повышении стойкости эритроцитов. Спустя 5—7 часов эритрограмма возвращалась к норме [1].

В наших экспериментах внутрибрюшинное введение физиологи­ческого раствора белым лабораторным крысам, содержащимся на об­щем рационе вивария, сопровождается достоверным снижением коли­чества эритроцитов в периферической крови (табл. 1).

Таблица 1

Изменение количества эритроцитов на фоне введения возрастающих доз гепарина

* — различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р≤0,05)

Это снижение количества эритроцитов в периферической крови возможно связано с тем, что гепарин увеличивает проницаемость сосу­дов для воды, т. е. тканевая вода увеличивает общий объём крови и данное понижение количества эритроцитов является не абсолютным, а относительным.

При введении яда кобры и яда щитомордника количество эритроцитов достоверно увеличивается относительно контрольных величин (рис. 1).

Рис. 1. Количественная оценка эритроцитов при введении зоотоксинов и смеси гепарин-яд

Яд пчелы (5 мг/кг);  яд эфы (3 мг/кг); яд гюрзы (3 мг/кг); яд кобры (1 мг/кг); яд щитомордника (4 мг/кг).

1 — яд;       2 — гепарин;       3 — яд + гепарин;

штрих — контроль (физиологический раствор).

* — различия между контрольной и экспериментальными группами статистически значимы (р<0.05).

Так при введении яда кобры в дозе 1 мг/кг и яда щитомордника в дозе 4 мг/кг количество эритроцитов увеличивается с 7.8±0.3 до 9.4±0.1 и 10.6±0.1 1х10^12/л. Исследуемые дозы пчелиного яда, яда эфы и гюрзы достоверно не изменяют эритроцитарного статуса перифери­ческой крови крыс (рис. 1).

Смесь зоотоксинов с гепарином в весовом соотношении 2:1 не влияет на количество эритроцитов относительно контроля, а также относительно группы животных, которым вводили только яд, хотя смесь яд щитомордника — гепарин вызывает достоверное увеличение эритроцитов относительно контрольных величин (рис. 1).

При введении зоотоксинов и гепарина изменяется не только количество эритроцитов в периферической крови крыс, но и их диа­метр. Измерение диаметров эритроцитов в контрольной серии опытов показало, что максимум (47,6±0,9%) приходится на эритроциты диа­метром 5,7 мкм (рис. 2).

Рис. 2. Изменение диаметра эритроцитов при введении пчелиного яда и гепарина

1 — контроль (физиол. р-р); 2 — гепарин (50 МЕ/кг);

3 — яд пчелы (2 мг/кг);          4 — яд пчелы + гепарин (2:1).

* — Различия между контрольными и экспериментальными группами статически значимы (p<0.05)

При введении гепарина в дозе 50 МЕ/кг и пчелиного яда в дозе 2 мг/кг кривая Прайс-Джонса сдвигается влево, т. е. в сторону микро­цитоза, а макроциты полностью отсутствуют. Совместное применение пчелиного яда и гепарина в виде смеси в соотношении 2:1 сопровож­дается сдвигом кривой Прайс-Джонса вправо, причём количество мак­роцитов возрастает с 1.6±0.2 % в контроле до 9.6±0.6 % в эксперименте, а эритроциты с диаметром 2.3 мкм полностью отсутствуют (рис. 2).

Тенденция изменений диаметра эритроцитов при введении яда кобры (0.5 мг/кг) и гепарина (5.0 МЕ/кг) является аналогичной введе­нию пчелиного яда. Также как и в предыдущем случае кривая Прайс-Джонса сдвигается в сторону микроцитоза. Однако при совместном введении яда кобры и гепарина в соотношении 1:0.1 в мазке крови присутствуют как микроциты, так и макроциты (табл. 2).

Таблица 2

Изменение диаметра (%) эритроцитов при введении яда кобры и гепарина

* — Различия между контрольными и экспериментальными группами статически значимы (p<0.05)

Несколько иная картина наблюдается при введении яда щито­мордника в дозе 1.0 мг/кг, для которого характерным является макро­цитоз, причём количество эритроцитов с диаметром 8.0 мкм увеличи­вается с 1.6±0.2 % в контроле до 4,8±0.2 % в эксперименте (рис. 3).

Рис. 3. Изменение диаметра эритроцитов при введении яда щитомордника и гепарина.

1 — контроль,

2 — гепарин (5 МЕ/кг),

3 — яд щитомордника (1 мг/кг),

4 — яд щитомордника + гепарин (1:1).

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статически значимы (p<0.05)

Наибольшей выраженностью отличается макроцитоз при введе­нии яда щитомордника в смеси с гепарином в весовом соотношении 1:1. В этом случае количество макроцитов достигает 17.0±0.9 %, а микроциты с диаметром 2.3 мкм полностью отсутствуют (рис. 3).

Таким образом, пчелиный яд и яд кобры вызывают изменения диаметра эритроцитов в сторону микроцитоза. Наибольшее число кле­ток принимали вид тутовой ягоды, с выраженной неравномерностью структуры по всей клетке. Наблюдалось изменение краёв клеток, они становились зазубренными. Под влиянием пчелиного яда и яда кобры форма эритроцитов становилась шиповатой. При действии яда щито­мордника, количество эритроцитов с большим диаметром увели­чивалось.

В изменении формы эритроцитов участвуют важнейшие компо­ненты мембраны — белки и липиды. Различие в величинах площадей поверхности наружного и внутреннего липидных монослоёв может быть причиной, определяющей форму эритроцитов [5]. Можно пред­положить, что величина разности площадей липидных монослоёв изменяется при действии зоотоксинов.

Известно, что форма клеток зависит от уровня АТФ в ней. АТФ-зависимые изменения формы обусловлены процессами, протекающи­ми в самой мембране [3]. При изменении уровня АТФ изменяется ак­тивность мембранных АТФ-аз, блокируются катионные насосы, в частности натриевая помпа. Это приводит к нарушению ионного равновесия. Таким образом, при действии зоотоксинов уровень АТФ в клетке снижается и это приводит к изменениям в форме эритро­цитов [2].

Гепарин, вступая во взаимодействие с пчелиным ядом и ядом кобры [4], снижает микроцитарные эффекты зоотоксинов и кривая Прайс-Джонса сдвигается вправо. При использовании смеси яда щито­мордника с гепарином регистрируется отчётливо выраженный макро­цитоз. Это связано с тем, что гепарин не взаимодействует с ядом щито­мордника [4].

Список литературы:

1. Бабак А. Ф. Влияние гепарина на морфологическую картину красной крови в эксперименте. В кн.: Гепарин. Физиология, биохимия, фармако­логия и клиническое применение. Тезисы III Всесоюзной конференции. М., 1973. — С. 27—28.
2. Орлов Б. Н., Вальцева И. А. Яды змей. Ташкент: Медицина, 1977.—158 с.
3. Рубина Х. М. Биохимия эритроцитов. В кн.: Физиология системы крови. Физиология эритропоэза. Л.: Наука, 1979. — С. 211—232.
4. Хомутов А. Е., Малиновская С. Л., Звонкова М. Б., Малиновский Д. С. Селективное действие гепарина на токсические свойства ядов животных, относящихся к разным таксономическим группам // // Материалы между­народной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, химии, физики. Новосибирск: Изд-во Экор-книга, 2012. — С. 77—86.
5. Черницкий Е. А., Воробей А. В. Структура и функция эритроцитарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. — 215 с.