ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ТОКСИЧНОСТИ КОРМА, ПОРАЖЁННОГО TILLETIA CARIES

Проблема микотоксикозов является актуальной во всём мире. Ежегодные потери в животноводстве причиняют колоссальный ущерб [3]. Попадая в организм, главным образом алиментарным путём, микотоксины негативно влияют на организм животных, снижая продуктивность, качество получаемой продукции, увеличивая экономические издержки, и представляют угрозу для здоровья человека и животных. В Омской области большой вред посевам пшеницы наносят головневые заболевания [5]. Наиболее часто встречающимся является возбудитель твердой головни Tilletia caries. В настоящее время, несмотря на успехи в разработке сельскохозяйственных защитных мероприятий против грибов, поражение твёрдой головнёй часто регистрируется, так как большинство хозяйств не проводят химическую обработку семян [4].

Цель настоящего исследования — установить изменения в организме лабораторных животных при введении в рацион корма, поражённого T.caries.

Материал и методы исследования. До начала опыта определяли содержание спор головнёвых грибов в корме. Для этого их отмывали от зерна. Содержание спор в процентах вычисляли по формуле: X=(m₁-m₂)×2, где m₁ - масса фильтра после фильтрации, г., m₂ - масса фильтра до фильтрации, г [2].

Для определения общей токсичности провели тестирование на суточной культуре стилонихий, находящихся в фазе активного роста. Предварительно пробы корма просеивали и измельчали. Навеску помещали в пробирку и заливали 1 % раствором ацетона. Подсчёт проводили через 1 и 3 часа. Выживаемость стилонихий определяли по формуле: N₂/N₁∙100 %, где N₂ – количество стилонихий в конце опыта, шт.; N₁ - количество стилонихий в начале опыта, шт. [1].

Биопроба была проведена на белых беспородных крысах (2 группы по 3 животных в каждой). Животных содержали в стандартных условиях вивария. В течение 14 дней их кормили пшеницей разного качества. В рацион опытной группы входило зерно, поражённое T.caries. Контрольная группа получала полноценную зерносмесь. Крыс выводили из эксперимента под эфирным наркозом.

Анализ лейкограммы проводили при окрашивании мазков по Романовскому-Гимза. Мазки исследовали под световом микроскопом при увеличении ×90. Гемоглобин определяли на колориметре КАМЦ-1, подсчёт эритроцитов вели в камере Горяева.

Биохимические исследования сыворотки крови выполняли на анализаторе Screen master LIHD 113 с применением тест-систем «Hospitex Diagnostics», при этом определяли содержание общего белка, глюкозы, альбуминов, глобулинов, мочевины и уровень щелочного резерва.

При статистической обработке вычисляли среднее арифметическое значение и ошибку среднего арифметического значения (M±m), достоверность различий - с использованием непараметрического критерия Mann-Whithey U test (STATISTICA 6.0).

Результаты исследования. При исследовании зерна пшеницы было установлено, что содержание спор головнёвых грибов в нём составляет 0,83 %, что значительно превышает допустимый уровень (0,1 %).

При определении интегральной токсичности корма учитывали требования ГОСТа: при 70—100 % выживаемости стилонихий - корм не токсичен, при 40—69 % - слаботоксичен, при 0—39 % - токсичный. При исследовании корма опытной группы выживаемость стилонихий составила 45—49 %, что указывает на слабую токсичность корма.

При проведении биопробы у животных обеих групп отмечали хорошую поедаемость корма. На всём протяжении исследований не выявлено заметных изменений в поведении и клинических признаков интоксикации, однако, время принятия бокового положения при эфирном наркозе у крыс контрольной группы составило в среднем 10 минут, у крыс опытной группы этот период сокращался до 7 минут. Масса крыс опытной группы (141,6±0,6) по окончании эксперимента была выше, чем у крыс контрольной группы (136,6±1,1), p<0,05.

При вскрытии у крыс опытной группы обнаружили увеличение объёма желудка вследствие большей наполненности кормом. Содержимое тонкого кишечника у контрольных животных имело зеленовато-коричневый цвет, у экспериментальных – серо-коричневый, что может свидетельствовать о нарушении процесса желчевыделения. У крыс опытной группы выражена дилатация двенадцатиперстной кишки, при этом слепая кишка переполнена содержимым, отмечаются признаки метеоризма, что является следствием усиления бродильных процессов и нарушения функции всасывания.

Печень крыс опытной группы гиперемирована, неравномерно окрашена, что связано с сосудистыми расстройствами и дистрофическими изменениями в гепатоцитах. Селезёнка также полнокровна, края её закруглены в отличие от животных контрольной группы.

Таблица 1. Содержание эритроцитов и гемоглобина в крови крыс

Примечание: * – p<0,05

Таблица 2. Лейкограмма экспериментальных животных

Примечание: * – p<0,05

Изменения в лейкограмме свидетельствуют об относительной нейтрофилии с увеличением процентного содержания сегментоядерных нейтрофилов на фоне общего лейкоцитоза и снижения доли лимфоцитов. Некоторые лимфоциты имели токсическую зернистость.

Таблица 3. Влияние поражённого T.caries и доброкачественного корма на биохимические показатели крови.

Примечание: * – p<0,05

Не отмечено торможения белоксинтезирующей функции печени. Имеет место тенденция к гипергликемии, что может быть связано с повышением потребности в углеводах и носит компенсаторный характер. Кроме того, регистрировали увеличение содержания мочевины, что, вероятно, стало результатом активации глюконеогенеза, в результате чего от белков отщепляется аммиак, который обезвреживается в мочевину. Возрастание щелочного резерва можно объяснить увеличением концентрации аммиака.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о потенциальной опасности поражения кормов головнёвыми грибами. В организме лабораторных животных в результате введения в рацион пшеницы, поражённой T.caries, были отмечены существенные изменения в картине крови и внутренних органах. Данные исследования убеждают в необходимости строгого контроля качества кормов.

Список литературы:

1.            ГОСТ Р52337-2005. Корма, комбикорма, комбикормовое сырьё. Методы определения общей токсичности. — М.: Изд-во стандартов, 2005. — 15 с.

2.            ГОСТ 13496.11-74. Зерно. Метод определения содержания спор головнёвых грибов. — М.: Изд-во стандартов, 1975. — 2 с.

3.            Иванов А. В. Микотоксикозы животных: (этиология, диагностика, лечение, профилактика) / А. В. Иванов, М. Я. Тремасов. — М.: Колос, 2008. — 140 с.

4.            Левитин М. М. Грибные болезни зерновых культур / М. М. Левитин, С. Л. Тютерев // Защита и карантин растений. — 2003. — № 11. — С. 47.

5.            Миронова Г. В. Биологические методы защиты яровой пшеницы от листовой инфекции / Г. В. Миронова // Вестн. Ом. гос. аграр. Ун-та. — 1998. — № 4. — С. 46—47.