РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ СУММАРНОГО ЭКСТРАКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ПОЛИСАХАРИДОВ, ВЫДЕЛЕННОГО ИЗ FERULA KUHISTANIСA В КАЧЕСТВЕ ИММУНОТРОПНОГО СРЕДСТВА

RESULTS OF THE EXPERIMENTAL STUDY OF THE TOTAL EXTRACTIVE PREPARATION OF POLYSACCHARIDES ISOLATED FROM FERULA KUHISTANICA AS AN IMMUNOTROPIC AGENT

Dilfuza Saidkhodjaeva

junior researcher, Institute of Chemistry of Plant Substances named after Academician S.Yu. Yunusov AS RUz,

Uzbekistan, Tashkent

Gulnara Shakhmurova

Doctor of Biology, Professor, Leading Researcher, Institute of Chemistry of Plant Substances named after Academician S.Yu. Yunusov AS RUz,

Uzbekistan, Tashkent

Rano Rakhmanberdiyeva

doctor of chemical sciences, professor, head of lab chemistry of macromolecular compounds, Institute of Chemistry of Plant Substances named after Academician S.Yu. Yunusov AS RUz,

Uzbekistan, Tashkent

Vladimir Syrov

Doctor of Medical Sciences, Professor, Chief Researcher, Institute of Chemistry of Plant Substances named after Academician S.Yu. Yunusov AS RUz,

Uzbekistan, Tashkent

АННОТАЦИЯ

Суммарный экстрактивный препарат полисахаридов, выделен из широко распространенного в центрально-азиатском регионе растения - Ferula kuhistanica. Целью исследования было изучение его влияния на некоторые иммунные процессы в организме. Наиболее четко иммуностимулирующее действие суммарного полисахаридного препарата проявлялось в условиях развившихся вторичных иммунодефицитов (острый токсический гепатит, облученние в сублетальной дозе). По выраженности иммуностимулирующего действия суммарный полисахаридный препарат из F.kuhistanica в большинстве случаев превосходил эффект референс – препарата иммунала.

ABSTRACT

The total extractive preparation of polysaccharides was isolated from a plant widely distributed in the Central Asian region - Ferula kuhistanica. The aim of the study was to study its effect on some immune processes in the body. The immunostimulating effect of the total polysaccharide preparation was most clearly manifested in conditions of developed secondary immunodeficiencies (acute toxic hepatitis, sublethal dose exposure). In terms of the severity of the immunostimulating effect, the total polysaccharide preparation from F.kuhistanica in most cases exceeded the effect of the reference preparation immunal.

Ключевые слова. Ferula kuhistanica, суммарный экстрактивный полисахаридный препарат, иммуностимулирующее действие.

Keywords. Ferula kuhistanica, total extractive polysaccharide preparation, immunostimulatory effect.

Введение. Растительные полисахариды являются довольно распространенным классом природных веществ. Многочисленными исследованиями установлено, что они способны проявлять самую разнообразную биологическую активность. Помимо таких, давно известных свойств, как обволакивающее и мягчительное, они оказывают противовоспалительное, антиульцерогенное, гепатопротекторное, пребиотическое, гиполипидемическое и другие свойства [1, с.196; 3, с.212; 4, с.21]. Большой интерес представляют также работы, показывающие наличие у них иммуномодулирующих свойств [5, с.112; 6, с. 53]. Последнее представляет особую значимость, поскольку выявление новых эффективных средств для использования в качестве иммуностимуляторов является крайне важной проблемой настоящего времени. В этой связи в настоящей работе рассмотрено влияние нового суммарного экстрактивного полисахаридного препарата, выделенного из растения - Ferula kuhistanica на некоторые показатели, отражающие функциональное состояние иммунной системы в норме и при развитии вторичных иммунодефицитных состояний. Опыты были проведены в сравнении с растительным иммуностимулирующим средством иммуналом.

Материал и методы. В работе использовали суммарный экстрактивный препарат полисахаридов (СЭПП), выделенный из Ferula kuhistanica, в составе которого были идентифицированы галактуроновая кислота и нейтральные моносахариды: галактоза, глюкоза, арабиноза, ксилоза и рамноза [2, с.169-171]. Эксперименты выполнены на белых беспородных мышах массой 18-20 г. Использовались как интактные животные, так и животные с вторичными иммунодефицитными состояниями, развивающимися после воспроизведения у них острого токсического гепатита или после их радиоактивного облучения. Острый токсический гепатит вызывали введением мышам CCl₄ (подкожно в виде 20% масляного раствора по 0,2 мл) в течение 3-х дней. Тотальное облучение осуществляли в сублетальной дозе 5 Гр на γ- медицинском облучателе Theratron с мощностью 1,2 Гр/мин (время облучения 20 мин). Расстояние от трубки до поверхности тела мышей 65 см, источник излучения - ⁶⁰Со. Иммунизацию животных эритроцитами барана (внутрибрюшинно в дозе 2*10⁷/мышь) в первом случае осуществляли в последний день введения токсиканта, во втором – по прошествии 5 дней после облучения. И в том, и в другом случае (также как и в опытах с интактными животными) мышей на 5-е сутки после введения полисахаридов (орально в дозе 250 мг/кг) и антигенного стимула брали в опыт. Оценку выраженности действия полисахаридов на первичный иммунный ответ проводили по определению количества антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [8, с.405-407]. Также подсчитывали общее количество клеток в центральных (тимус, костный мозг – использовали бедренную кость) и периферических (селезенка, брыжеечные, лимфатические узлы) органах иммунитета при помощи камеры Горяева. В периферической крови подсчитывали количество эритроцитов и лейкоцитов.

Во всех опытах для сравнения использовали иммунно-активное средство иммунал (фирма производитель “Lek d.d.”, Словения), содержащее в своем составе активные полисахариды. Используемый референс-препарат вводили животным в том же режиме, что и сумму полисахаридов из F.kuhistanica орально в дозе 50 мг/кг. Результаты, полученные в ходе проводимых экспериментов, подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждения. Проведенные эксперименты прежде всего позволили выявить у СЭПП способности повышать процесс первичного антителообразования у интактных мышей, заметно увеличивая в селезенке количество АОК, секретирующих IgM в ответ на иммунизацию тимусзависимым антигеном –эритроцитами барана. Как видно из таблицы 1 всё это четко прослеживается и при расчете количества АОК на всю селезенку и на 1 млн спленоцитов, содержание которых также достоверно повышалось. В ряде работ последнего времени установлено, что некоторые соединения, относящиеся к растительным полисахаридам, помимо активации гуморального ответа на антиген стимулируют фагоцитоз и усиливают реакцию гиперчувствительности замедленного типа [5, с. 10; 7, с.183; 9, с. 618]. Среди других, обнаруженных фактов первичной оценки иммунобиологических свойств СЭПП следует отметить повышение в организме животных при его введении общей клеточности центральных и периферических органов иммунитета (табл. 1) и стимуляцию эритро- и лейкопоэза (табл.2). Ещё более четкое иммуностимулирующее действие СЭПП было выявлено при изучении его эффекта у животных с развившимися вторичными иммунодефицитными состояниями. Так, при остром токсическом гепатите и облучении мышей количество АОК в селезенке по сравнению с их содержанием у интактных животных уменьшилось на 86,1 и 97,4 % (при пересчете количество АОК на 1 млн спленоцитов это уменьшение составляло 75,1 и 88,6% соответственно). Существенные негативные изменения при вторичных иммунодефицитах выявлены и в общей клеточности центральных и периферических органах иммунитета, а также в содержании в крови эритроцитов и лейкоцитов. У мышей с острым токсическим гепатитом количество клеток тимуса, костного мозга, селезенки и брыжеечных лимфатических узлов уменьшилось на 42,9; 26,8; 44,4 и 33,5%, а у животных, подвергнутых облучению на 69,6; 49,1; 76,4 и 78,9% соответственно. В обоих этих случаях СЭПП проявил отчетливую тенденцию к восстановлению всех рассматриваемых показателей. Так, при остром токсическом гепатите введение СЭПП приводило к тому, что количество клеток в тимусе, костном мозге, селезенке и брыжеечных лимфатических узлах было только на 13,1; 8,9; 26,9 и 13,6%, а у облученных на 31,6; 12,5; 33,2 и 39,8% ниже, чем у интактных животных (табл.1). Сходные изменения происходили и в отношении содержания эритроцитов и лейкоцитов в крови (табл.2).

Таблица 1

Влияние суммарного экстрактивного препарата полисахаридов из Ferula kuhistanica и иммунала на иммунный ответ к эритроцитам баран в норме и при вторичных иммунодефицитах, развивающихся на фоне CCl₄ – гепатита и радиационного облучения животных (M+m, n=6)

Примечание. ¹ – достоверно по отношению к соответствующим показателям интактных животных; ² - достоверно к соответствующему контролю; ³ – достоверно между соответствующими показателями в группах животных, получавших сумму полисахаридов и иммунал (уровень достоверности принят при p<0,05).

Таблица 2

Влияние суммарного экстрактивного препарата полисахаридов из Ferula kuhistanica и иммунала на содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови мышей, иммунизированных эритроцитами барана в норме и при вторичных иммунодефицитах, развивающихся на фоне CCl₄ – гепатита и радиационного облучения животных (M+m, n=6)

Примечание. Обозначения те же, что и в таблице 1.

Во всех проведенных экспериментах суммарный экстрактивный препарат полисахаридов, выделенный из Ferula kuhistanica проявлял иммуностимулирующее действие, сходное с эффектом в этих случаях иммунала, однако, по степени его выраженности в большинстве случаев имел явное преимущество.

Таким образом суммарный экстрактивный препарат из Ferula kuhistanica можно рассматривать как перспективное иммуностимулирующее средство, особенно при его использовании в условиях вторичных иммунодефицитных состояний.

Список литературы:

1. Васфилова Е.С. Фруктозасодержащие углеводы растений: биологическая активность и использование в медицине // Растит.ресурсы. - 2021. Т.57, №3. – С.195-210.
2. Ёркулов З.Э., Маликова М.Х., Рахманбердыева Р.К. Углеводы надземной части растений Ferula kuhistaniсa и F.tenuisecta // Химия природ.соедин. – 2011. №2. – С.169-174.
3. Криштанова Н.А., Сафонова М.Ю., Болотова В.Ц., Павлова Е.Д., Саканян Е.И. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств // Вестник ВГУ, Серия: Химия, Биология, Фармация. – 2005. №1. – С.212-221.
4. Марков П.А., Попов С.С., Никитина И.Р., Оводова Р.Г., Оводов Ю.С. Противовоспалительная активность пектинов и их галактуронанового кора // Химия раст.сырья. – 2010.  №1. – С.21-26.
5. Оводов Ю.С., Головченко В.В., Гюнтер Е.А., Попов С.В. Пектиновые вещества растений Европейского Севера России. – Екатеринбург: УрО РАН, 2009. – 112 с.
6. Утешов Б.С., Ласкова И.Л., Афанасьева В.А. Иммуномодулирующая активность гетерополисахаридов ромашки аптечной при воздушном и иммерсионном охлаждении // Эксперим. и клин.фармакол.  – 1999. Т.62, №6. – С.52-55.
7. Descotes J. An introduction to immunotoxicology, London: Taylor and Francis, 1999. -183 p.
8. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque formation inagar by single antibody – producing cell // Science.- 1963. Vol.140. – P.405-407.
9. Popov S.V., Popova G.Y., Ovodova R.G. Effects of polysaccharides from Silene vulgaris on phagocytes // Int. J. Immunopharmacol. – 1999. Vol.21. – P.617-624.