ВЛИЯНИЕ  СИМВАСТАТИНА  И  АНТАГОНИСТА  РЕЦЕПТОРОВ  ИНТЕРЛЕЙКИНА-1  НА  ЭКСПРЕССИЮ  TLR-2  ЛИМФОЦИТАМИ  У  КРЫС  С  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ  ОКСАЗОЛОНОВЫМ  КОЛИТОМ

Жеребятьев  Александр  Сергеевич

ст.  лаборант  Запорожского  государственного  медицинского  университета,  Украина,  г.  Запорожье

E-mail:  Gerya2009@yandex.ru

Камышный  Александр  Михайлович

д-р  мед.  наук,  доцент  Запорожского  государственного  медицинского  университета,  Украина,  г.  Запорожье

E-mail: 

EFFECT  OF  SIMVASTATIN  AND  RECOMBINANT  ANTAGONIST  OF  RECEPTORS  OF  INTERLEUKIN-1  ON  EXPRESSION  OF  TLR-2  WITH  LYMPHOCYTES  IN  RATS  WITH  EXPERIMENTAL  OXAZOLONE-INDUCED  COLITIS

Zherebiatiev  Aleksandr  Sergeevich

senior  technician  of  Zaporozhye  State  Medical  University,  Ukraine,  Zaporozhye

Kamyshnyi  Aleksandr  Mikhailovich

doctor  of  Medicine,  Associate  Professor  of  Zaporozhye  State  Medical  University,  Ukraine,  Zaporozhye

АННОТАЦИЯ

Целью  данного  исследования  было  изучение  возможности  применения  симвастатина  и  арил-1  для  фармакологической  коррекции  колита  у  крыс.  Колит  индуцировали  ректальным  введением  оксазолона.  Иммунопозитивные  клетки  определяли  с  помощью  иммуногистохимии.  Было  установлено,  что  введение  препаратов  при  развитии  экспериментальной  патологии  сопровождалось  изменением  экспрессии  TLR-2  в  кишечнике.  В  заключение,  наше  исследование  показало,  что  симвастатин  и  арил-1  оказывают  положительные  эффекты  на  течение  колита.

ABSTRACT

The  aim  of  this  study  was  to  investigate  the  possibility  of  Simvastatin  and  ARIL-1  for  pharmacological  correction  of  colitis  in  rats.  Colitis  was  induced  by  the  rectal  administration  of  oxazolone.  The  immunopositive  cells  were  determined  by  using  an  immunohistochemistry.  It  has  been  established  that  drug  administration  during  the  development  of  experimental  pathology  was  accompanied  by  changes  in  the  expression  of  TLR-2  in  the  inflamed  colonic  tissue.  In  conclusion,  our  study  indicated  that  an  administration  of  Simvastatin  and  ARIL-1  reveals  a  potential  mechanism  for  their  beneficial  effects  in  colitis.

Ключевые  слова:  язвенный  колит;  Toll-подобный  рецептор  2;  симвастатин;  антагонист  рецепторов  интерлейкина-1  (АРИЛ-1)

Keywords:  ulcerative  colitis;  Toll-like  receptor  2;  simvastatin;  recombinant  antagonist  of  receptors  of  interleukin-1  (ARIL-1).

Введение.  Воспалительные  заболевания  кишечника  (ВЗК)  включают  в  себя  язвенный  колит  (ЯК),  точная  причина  которого  остается  неизвестной.  Имеющиеся  данные  свидетельствуют  о  том,  что  аномальный  иммунный  ответ,  направленный  на  микроорганизмы  кишечной  флоры,  отвечает  за  развитие  заболевания  у  генетически  восприимчивых  индивидуумов.  Последние  достижения  в  области  иммунологии  и  генетики  показали,  что  врожденный  иммунный  ответ  является  столь  же  важным,  как  и  адаптивный  иммунитет,  в  развитии  и  поддержании  кишечного  воспаления  у  этих  больных.  Изменение  экспрессии  Toll-подобных  рецепторов  2  типа  (TLR-2),  лигандами  для  которых  являются  липотейхоевые  кислоты  и  бактериальные  липопротеины,  входящие  в  состав  клеточной  стенки  грамположительных  и  грамотрицательных  бактерий  может  быть  связано  с  патогенезом  ВЗК.  Особого  внимания  заслуживает  уровень  экспрессии  TLR-2  лимфоцитами  кишечно-ассоциированной  лимфоидной  ткани  (КАЛТ),  учитывая  что  прямая  активация  TLR  на  поверхности  клеток  адаптивной  иммунной  системы  влияет  на  направление  их  дифференцировки,  пролиферацию,  выживание,  продукцию  цитокинов  и  костимуляторных  молекул,  подчеркивая  участие  сигналов  от  TLR  в  развитии  воспаления  кишечника  [9,  с.  453].

Остается  открытым  вопрос  качественной  терапии  ЯК,  и  в  этом  ракурсе  привлекает  внимание  использование  статинов.  Статины  ингибируют  3-гидрокси-3-метилглутарил-КоА-редуктазу,  которая  катализирует  превращение  ГМГ-КoA  в  L-мевалонат,  и  были  активно  использованы  в  качестве  гипохолестеринемических  агентов.  Кроме  того,  недавние  исследования  показали,  что  статины  оказывают  дополнительные  иммунорегулирующие  эффекты,  независимые  от  гиполипидемической  активности;  им  приписывают  модулирующее  действие  на  иммунную  систему,  влияние  на  экспрессию  MHC  класса  II,  функции  Тh1  и  Th2-лимфоцитов,  экспрессию  молекул  адгезии,  подвижность  и  миграцию  лейкоцитов,  синтез  провоспалительных  цитокинов.  Например,  было  сообщено,  что  аторвастатин  снижает  продолжительность  и  тяжесть  активного  и  пассивного  экспериментального  аутоиммунного  энцефаломиелита  (ЕАЕ),  демонстрируют  положительный  эффект  у  пациентов  с  рассеянным  склерозом  и  у  пациентов  с  ревматоидным  артритом  [5,  с.  361].

Кроме  того,  наиболее  мощным  системным  провоспалительным  цитокином  является  IL-1β,  поэтому  наше  внимание  привлек  антагонист  рецепторов  интерлейкина-1  (АРИЛ-1)  в  качестве  терапевтического  средства  при  экспериментальном  оксазолон-индуцированном  колите  (ОИК).

Цель  исследования.  Изучение  экспрессии  TLR-2  лимфоцитами  толстого  кишечника  крыс  в  условиях  развития  экспериментального  оксазолон-индуцированного  колита,  и  при  коррекции  его  симвастатином  и  рекомбинантным  антагонистом  рецепторов  интерлейкина-1.

Объект  и  методы  исследования.  Исследования  проведены  на  40  самцах-крысах  линии  Вистар  весом  110—160  грамм.  Экспериментальную  часть  работы  выполняли  в  соответствии  с  положениями  «Европейской  конвенции  о  защите  позвоночных  животных,  которых  используют  для  экспериментальных  и  других  научных  целей»  (Страсбург,  1985).  Животные  были  разделены  на  четыре  группы  по  10  крыс:  группа  1  ―  контрольные  животные,  группа  2  ―  животные  с  экспериментальной  патологией  ―  оксазолон-индуцированным  колитом  (ОИК),  группа  3  ―  животные  с  ОИК  которым  вводили  симвастатин,  группа  4  ―  животные  с  ОИК  которым  вводили  АРИЛ-1  (производство  ОАО  «РЭСБИО»  г.  Санкт-Петербург,  Россия).  ОИК  индуцировали  на  седьмые  сутки  после  предварительной  сенсибилизации,  однократным  внутриректальным  введением  0,1  %  раствора  оксазолона  (Sigma,  США)  в  дозе  10  мг/животное  под  кетаминовым  наркозом.  Предварительная  сенсибилизация  осуществлялась  нанесением  на  предварительно  выбритый  участок  кожи  животного  0,2  мл.  3  %  сенсибилизирующего  раствора  состоящего  из  смеси  ацетона,  оливкового  масла  и  оксазолона  [13,  с.  543].  Симвастатин  вводили  внутрибрюшинно  в  дозе  20  мг/кг  через  24  часа  после  индукции  колита  в  течение  5  дней.  АРИЛ-1  вводили  подкожно  в  дозе  3  мг/кг  через  24  часа  после  индукции  колита  в  течение  5  дней.  Все  группы  животных  выводили  из  эксперимента  декапитированием  под  наркозом  на  6  сутки  после  индукции  колита.  Изымали  участки  проксимального  и  дистального  отделов  толстого  кишечника  и  на  20  часов  погружали  в  фиксатор  Буэна.

Структуру  популяции  TLR-2⁺  лимфоцитов  изучали  на  основании  анализа  серийных  гистологических  срезов  и  данных  их  морфометрических  и  денситометричних  характеристик.  Для  проведения  данного  исследования  на  ротационном  микротоме  MICROM  HR-360  (Microm,  Германия)  делали  5-микронные  серийные  срезы  проксимального  и  дистального  отделов  толстого  кишечника,  которые  затем  депарафинировали  в  ксилоле,  проводили  регидратацию  в  нисходящих  концентрациях  этанола  (100  %,  96  %,  70  %),  отмывали  в  0,1  М  фосфатном  буфере  (рН=7,4)  и  окрашивали  гематоксилином-эозином  или  инкубировали  с  поликлональными  антителами  (МКАТ)  к  TLR-2  (HycultBiotech,  Нидерланды)  конъюгированными  с  флюоресцеином  изотиоционатом  (FITC)  в  течение  18  часов  во  влажной  камере  при  Т  =  4  ^оС.  После  инкубации  все  срезы  промывали  0,1  М  фосфатным  буфером  и  помещали  в  смеси  глицерина  и  фосфатного  буфера  (1:9)  для  последующей  люминесцентной  микроскопии.  Обработанные  гистологические  срезы  изучали  с  помощью  компьютерной  программы  ImageJ  (NIH,  США).  Изображение,  получаемое  на  микроскопе  Primo  Star  (ZEISS,  Германия)  в  ультрафиолетовом  спектре  возбуждения  390  нм  (FITC)  с  помощью  высокочувствительной  камеры  Axio  Cam  5  c  (ZEISS,  Германия)  и  пакета  программ  для  получения,  архивирования  и  подготовки  изображений  к  публикации  Axio  Vision  4.7.2  (ZEISS,  Германия)  немедленно  вводили  в  компьютер.  При  этом  в  автоматическом  режиме  определялись  области  со  статистически  значимой  флюоресценцией,  характерной  для  лимфоидных  клеток  экспрессирующих  рецепторы.  Исчислялись  морфометрические  и  денситометрические  характеристики  имунопозитивних  клеток.  При  окраске  МКАТ  исследовали  TLR-2⁺  лимфоциты,  расположенные  в  собственной  пластинке  слизистой  оболочки  (СПСО)  и  в  подслизистой  основе  (ПО)  толстого  кишечника.

Все  полученные  экспериментальные  данные  обрабатывали  на  персональном  компьютере  пакетом  прикладных  и  статистических  программ  EXCEL  из  пакета  MS  Office  2010  (Microsoft  Corp.,  США),  STATISTICA  6.0  (Stat-Soft,  2001).  Для  всех  показателей  рассчитывали  значение  средней  арифметической  выборки  (М),  ее  дисперсии  и  ошибки  средней  (m).  Для  выявления  достоверности  различий  результатов  исследований  в  опытных  и  контрольных  группах  животных  определяли  коэффициент  Стьюдента  (t),  после  чего  определяли  возможность  разницы  выборок  (р)  и  доверительный  интервал  средней.  Критический  уровень  значимости  при  проверке  статистических  гипотез  принимали  равным  0,05.

Результаты  и  их  обсуждения.  Развитие  колита  сопровождается  макроскопическими  изменениями  в  толстом  кишечнике:  отек,  гиперемия,  множественные  эрозии  и  язвы.  При  гистологическом  исследовании  тканей  окрашеных  гаматоксилином-эозином  мы  наблюдали  признаки  воспаления,  укорочение  и  исчезновение  кишечных  крипт,  воспалительную  инфильтрацию  лимфоцитами  и  плазматическими  клетками  с  примесью  эозинофилов  и  утолщением  СПСО  и  ПО  толстого  кишечника.

Анализ  серийных  срезов  толстого  кишечника  животных  показал,  что  развитие  колита  сопровождается  однонаправленным  уменьшением  суммарной  плотности  популяции  TLR-2⁺  лимфоцитов  в  проксимальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  27  %,  в  ПО  на  31  %,  р<0,05)  (рис.  1A),  и  увеличением  в  дистальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  39  %,  в  ПО  на  88  %,  р<0,05)  (рис.  1D),  по  сравнению  с  контролем.  При  этом  в  обеих  морфофункциональных  зонах  проксимального  отдела  толстого  кишечника  уменьшилась  плотность  TLR-2  на  поверхности  лимфобластов  и  увеличилась  у  средних  лимфоцитов;  в  дистальном  отделе  кишечника  увеличилась  плотность  TLR-2  в  лимфобластах.

Введение  симвастатина  животным  с  ОИК  сопровождается  однонаправленным  уменьшением  суммарной  плотности  популяции  TLR-2⁺  лимфоцитов  как  в  проксимальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  34  %,  в  ПО  на  30  %,  р<0,05)  (рис.  1В),  так  и  в  дистальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  26  %,  в  ПО  на  36  %,  р<0,05)  (рис.  1Е),  по  сравнению  с  контролем.  При  этом  в  СПСО  проксимального  отдела  кишечника  увеличилась  плотность  TLR-2  у  малых  лимфоцитов;  в  СПСО  дистального  отдела  кишечника  уменьшилась  плотность  TLR-2  в  малых  лимфоцитах;  в  ПО  ―  лимфобластах  и  малых  лимфоцитах.

Введение  арила  животным  с  ОИК  сопровождается  однонаправленным  уменьшением  суммарной  плотности  популяции  TLR-2⁺  лимфоцитов  как  в  проксимальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  30  %,  р<0,05)  (рис.  1С),  так  и  в  дистальном  отделе  толстого  кишечника  (в  СПСО  на  28  %,  в  ПО  на  48  %,  р<0,05)  (рис.  1F),  по  сравнению  с  контролем.  При  этом  в  СПСО  проксимального  отдела  кишечника  увеличилась  плотность  TLR-2  в  лимфобластах;  в  СПСО  дистального  отдела  кишечника  уменьшилась  плотность  TLR-2  в  лимфобластах  в  ПО  ―  в  лимфобластах  и  малых  лимфоцитах.

Рисунок  1.  Суммарная  плотность  (на  1мм²)  TLR2⁺  —  клеток  в  СПСО  и  ПО  толстого  кишечника  при  развитии  ОИК  (A,  D),  после  введения  симвастатина  (В,  E)  и  арила  (C,  F)  экспериментальным  животным,  *  —  p  <  0,05

Аномальная  сигнализация  через  TLR  может  привести  к  нарушению  гомеостаза  «комменсалы-слизистая»,  способствуя  тем  самым  усилению  воспаления  при  ЯК.  Бактериальные  продукты,  такие  как  липополисахарид  и  пептидогликан,  находятся  в  высокой  концентрации  в  кишечнике  и  способны,  осуществляя  передачу  сигнала  через  TLR-2  активировать  NF-kB,  который  регулирует  транскрипцию  различных  провоспалительных  цитокинов  (IL-1β,  TNF-α  ,  IL-6,  IL-8,  IL-12),  играющих  роль  в  развитии  ЯК.  Существует  убедительные  доказательства,  что  аномальный  уровень  ответа  на  синантропные  бактерий  является  важным  компонентом  возникновения  ВЗК.  Так,  экспериментальный  колит  не  развивается  у  мышей  содержащихся  в  стерильных  условиях  или  подвергшихся  введению  антибиотиков,  предполагая,  что  кишечная  микрофлора  имеет  важное  значение  для  инициирования  развития  и  поддержания  колитогенных  CD4⁺  Т-клеток.  В  совокупности  MyD88-зависимый  путь,  который  контролирует  передачу  сигналов  TLR  в  Т-клетках  может  непосредственно  способствовать  пролиферации  и  выживания  колитогенных  CD4⁺  Т-клеток  и  поддержанию  хронического  колита  [11,  с.  5292].

Прямые  доказательства  роли  комменсальной  микрофлоры  получены  в  исследованиях  иммунных  реакций  по  отношению  к  конкретным  бактериальным  антигенам  кишечника.  Например,  мыши  со  спонтанным  колитом  C3H/HeJBir  (CBIR),  показали  увеличение  реактивности  B-клеток  и  Т-клеток  к  бактериальным  антигенам,  и  перенос  CD4⁺  Т-клеток  от  CBIR  мышей  вызывал  колит  у  иммунодефицитных  мышей-реципиентов.  Этот  ответ  является  специфическим  по  отношению  к  синантропной  микрофлоре,  поскольку  соответствующие  Т-клетки  не  реагировали  на  пищевые  антигены  или  фекальные  экстракты  стерильных  мышей  [10,  с.  149].

Cantó  E.  et  al.  выявил  высокий  уровень  экспрессии  TLR2  и  TLR4  в  слизистой  оболочке  толстой  кишки  пациентов  с  ЯК,  показывая,  что  микроорганизмы  в  кишечнике  играют  важную  роль  в  инициации  и  поддержании  заболевания  [2,  с.  156].  Среди  всех  TLRs,  TLR-2  по-видимому,  один  из  основных  игроков  в  поддержании  гомеостаза  кишечника,  оказывает  цитопротективные  эффекты  в  клетках  кишечного  эпителия.  Отсутствие  TLR-2  повышает  восприимчивость  к  повреждению  кишечника  и  воспалению,  а  TLR2  стимуляция  эффективно  усиливает  защитную  функцию  эпителиального  барьера.  Пероральное  введение  Pam3CSK4  (агонист  TLR2)  показало  терапевтический  потенциал  в  модели  DSS-индуцированного  колита.  Протективный  эффект  при  этом  опосредован  через  сигналы  от  TLR2  которые  индуцируют  выработку  цитопротекторного  фактора  TFF3  и  белка  плотных  контактов  ZO-1  через  активацию  протеинкиназы  С,  которые  способствуют  сохранению  целостности  эпителиального  барьера  и  резистентности  клеток  к  апоптозу.  Хотя  агонисты  TLR2  еще  не  прошли  клинические  испытания  для  терапии  заболеваний  у  человека,  эти  результаты  предполагают,  что  они  могут  быть  идеальной  мишенью  для  лечения  ВЗК  [9,  с.  460].  Dong  L.  et  al.  показали,  что  при  развитии  DSS-индуцированного  колита  повышается  экспрессия  TLR-2  в  эпителии  толстого  кишечника  с  повышением  содержания  Escherichia  coli  и  уменьшением  содержания  Lactobacillus  и  Bifidobacterium,  но  при  введении  моноклональных  антител  к  TLR-2  активность  колита  уменьшается  и  содержание  Lactobacillus  и  Bifidobacterium  повышается  к  нормальному  уровню  [3,  с.  111]

TLRs  играют  большую  роль  в  адаптивном  иммунитете.  Наивные  CD4⁺  и  CD8⁺  T-клетки  экспрессируют  TLR-2  и  TLR-4.  Передача  сигналов  через  TLR  -2  влияет  на  развитие  и  функцию  Th17,  активность  T_reg  клеток,  дендритных  клеток,  способствующих  дифференцировке  наивных  Т-клеток  в  разные  типы  Т-хелперов.  Например,  используя  мышей,  дефицитных  по  TLR-2  или  MyD88,  было  показано,  что  стимуляция  TLR-2  на  T_reg  клетках  индуцирует  их  пролиферацию  и  преходящую  потерю  супрессивной  активности  [10,  с.  146].  Передача  сигналов  через  TLR-2  влияет  на  развитие  и  функцию  Th17,  которые  участвуют  в  развитии  аутоиммунных  заболеваний  человека,  при  которых  важную  роль  играет  баланс  Th17/Treg  [8,  с.  989].  Gonzalez-Navajas  J.M.  et  al  продемонстрировали,  что  удаление  TLR  в  CD4⁺  T-клетках  привела  к  увеличению  продукции  IFNγ  и  тяжелому  колиту  у  мышей  [4,  с.  577],  а  Lee  J.Y.  et  al.  показали,  что  симвастатин  ингибирует  экспрессию  провоспалительных  генов,  блокирует  передачу  сигналов  через  ядерный  фактор-kB  и  ослабляет  течение  острого  колита  у  мышей  [6,  с.  245].

Баланс  IL-1  и  IL-1ra  играет  важную  роль  в  регуляции  воспаления  и  иммунного  ответа.  Maeda  S.  et  al.  указали  на  дисбаланс  между  IL-1β  и  IL-1ra,  который  может  играть  роль  в  патогенезе  ВЗК  [7,  с.  68].  Birgit  et  al.  продемонстрировали,  что  блокада  IL-1β  путем  введения  животным  антагониста  IL-1R  (ИЛ-1Ra;  Анакинра)  ингибирует  развитие  колита  [1,  с.  5676].  Также  этот  препарат  был  одобрен  в  Америке  для  лечения  ревматоидного  артрита  [12,  с.  478],  однако  высокая  цена  лимитирует  повсеместное  использование  его  в  практике  врача  и  заставляет  акцентировать  внимание  исследователей  на  поиске  и  разработке  бюджетных  аналогов  препарата.

Выводы

1.  При  развитии  оксазолонового  колита  наблюдается  уменьшение  количества  TLR-2⁺  лимфоцитов  в  проксимальном  отделе  толстого  кишечника  с  уменьшение  плотности  Toll-подобных  рецепторов.  В  дистальном  отделе  толстого  кишечника  наблюдается  обратная  тенденция  с  увеличением  числа  TLR-2⁺  лимфоцитов  и  возрастанием  плотности  TLR-2  в  лимфоцитах.

2.  Введение  симвастатина  на  фоне  развития  колита  вызвало  уменьшение  количества  TLR-2⁺  лимфоцитов,  а  также  увеличение  плотности  TLR-2  в  лимфоцитах  проксимального  и  дистального  отделов  толстого  кишечника.

3.  Введение  арила  на  фоне  развития  колита  вызвало  уменьшение  количества  TLR-2⁺  лимфоцитов,  как  в  проксимальном,  так  и  в  дистальном  отделе  толстого  кишечника,  при  этом  наблюдалась  разнонаправленная  тенденция  к  увеличению  плотности  TLR-2  в  лимфоцитах  проксимального  отдела  и  уменьшению  в  дистальном  отделе  толстого  кишечника.

Список  литературы:

1.Birgit  E.  Loss  of  TLR2  worsens  spontaneous  colitis  in  MDR1A  deficiency  through  commensally  induced  pyroptosis  //  J.  Immunol.  —  2013.  —  Vol.  190.  —  №  11.  —  P.  5676—5688.

2.Cantó  E.  TNF  alpha  production  to  TLR2  ligands  in  active  IBD  patients  //  Clin.  Immunol.  —  2006.  —  Vol.  119.  —  P.  156—165.

3.Dong  L.  Toll-like  receptor  2  monoclonal  antibody  or/and  Toll-like  receptor  4  monoclonal  antibody  increase  counts  of  Lactobacilli  and  Bifidobacteria  in  dextran  sulfate  sodium-induced  colitis  in  mice  //  Gastroenterol.  Hepatol.  —  2012.  —  Vol.  27.  —  №  1.  —  P.  110—119.

4.Gonzalez-Navajas  J.M.  TLR4  signaling  in  effector  CD4+  T  cells  regulates  TCR  activation  and  experimental  colitis  in  mice  //  J.  Clin.  Invest.  —  2010.  —  Vol.  120.  —  P.  570—581.

5.Greenwood  J.  Statin  therapy  and  autoimmune  disease:  from  protein  prenylation  to  immunomodulation  /  J.  Greenwood,  L.  Steinman,  S.S  Zamvil  //  Nat.  Rev.  Immunol.  —  2006.  —  Vol.  6.  —  №  5.  —  P.  358—370.

6.Lee  J.Y.  Simvastatin  inhibits  NF-kappaB  signaling  in  intestinal  epithelial  cells  and  ameliorates  acute  murine  colitis  //  Ist.  Immunopharmacol.  —  2007.  —  Vol.  7.  —  №  2.  —  P.  241—248.

7.Maeda  S.  Mucosal  imbalance  of  interleukin-1β  and  interleukin-1  receptor  antagonist  in  canine  inflammatory  bowel  disease  //  Vet.  J.  —  2012.  —  Vol.  194.  —  №  1.  —  P.  66—70.

8.Mai  J.  Th  17  cells  interplay  with  Foxp3+  Tregs  in  regulation  of  inflammation  and  autoimmunity  /  J.  Mai,  H.  Wang,  X.F.  Yang  //  Front.  Biosci.  —  2010.  —  Vol.  15.  —  P.  986—1006.

9.Fukata  M.  The  Role  of  Pattern  Recognition  Receptors  in  Intestinal  Inflammation  /  M.  Fukata,  M.  Arditi  //  Mucosal  Immunol.  —  2013.  —  Vol.  6.  —  №  3.  —  P.  451—463.

10.Megan  E.  The  role  of  T-regulatory  cells  and  Toll-like  receptors  in  the  pathogenesis  of  human  inflammatory  bowel  disease  //  Immunology.  —  2008.  —  Vol.  125.  —  №  2.  —  P.  145—153.

11.Takayuki  T.  MyD88-Dependent  Pathway  in  T  Cells  Directly  Modulates  the  Expansion  of  Colitogenic  CD4+  T  Cells  in  Chronic  Colitis  //  J.  Immunol.  —  2008.  —  Vol.  180.  —  №  8.  —  P.  5291—5299.

12.Thompson  R.C.  Interleukin-1  receptor  antagonist  (IL-1ra)  as  a  probe  and  as  a  treatment  for  IL-1  mediated  disease  /  R.C.  Thompson,  D.J.  Dripps,  S.P.  Eisenberg  //  Int.  J.  Immunopharmacol.  —  1992.  —  Vol.  14.  —  №  3.  —  Р.  475—480.

13.Wirtz  S.  Chemically  induced  mouse  models  of  intestinal  inflammation  //  Nat.  Protocols.  —  2007.  —  Vol.  2.  —  №  3.  —  Р.  541—546.