К  ВОПРОСУ  О  ВОЗРАСТНОЙ  ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ  МОРФОЛОГИИ  КЛЕТОК  ЛЕЙДИГА:  МОРФОМЕТРИЧЕСКОЕ  ИССЛЕДОВАНИЕ

Волков  Владимир  Петрович

канд.  мед.  наук,  РФ,  г.  Тверь

E-mail:  patowolf@yandex.ru

TO  THE  QUESTION  ABOUT  THE  AGE-RELATED  FUNCTIONAL  MORPHOLOGY  OF  LEYDIG  CELLS:  MORPHOMETRIC  RESEARCH

Volkov  Vladimir  Petrovitch

candidate  of  medical  sciences,  Russia  Tver

АННОТАЦИЯ

Морфометрическое  изучение  функциональной  морфологии  тестикулярных  эндокриноцитов  (клеток  Лейдига)  в  возрастном  аспекте  показало  достаточно  чётко  выраженный  и  разнонаправленный  характер  изменений:  численность  клеток  Лейдига  и  их  компоновка  в  интерстициальной  ткани  семенников  указывают  на  их  возрастную  гиперплазию,  в  то  время,  как  показатели  индивидуальной  функциональной  клеточной  активности  свидетельствуют  о  гипофункции,  прогрессирующей  с  возрастом.  Оба  процесса  длительное  время  находится  в  равновесии,  обеспечивая  достаточную  продукцию  тестостерона.

ABSTRACT

Morphometric  studying  of  functional  morphology  the  testicular  endocrine  cells  (Leydig  cells)  in  age  aspect  stood  on  rather  accurately  expressed  and  multidirectional  hind  legs  of  changes:  the  number  of  Leydig  cells  and  their  configuration  in  interstitial  tissue  of  seed  plants  indicate  their  age  hyperplasia  while  indicators  of  individual  functional  cellular  activity  testify  to  the  hypofunction  progressing  with  age.  Both  processes  a  long  time  are  in  balance  providing  sufficient  production  of  testosterone.

Ключевые  слова:  клетки  Лейдига;  возрастные  изменения;  морфометрия.

Keywords:  Leydig  cells;  age  changes;  morphometry.

Сексуальная  и  репродуктивная  функции  здоровых  мужчин  сохраняется  на  протяжении  всей  жизни  с  периода  полового  созревания  до  старческого  возраста  [5].  Наблюдающееся  некоторое  возрастное  их  снижение  является  физиологическим  процессом  и  происходит  плавно  и  постепенно,  длительное  время  оставаясь  на  уровне,  приемлемом  для  полноценной  жизнедеятельности  организма  [4,  5,  9].

Это  обеспечивается  действием  мужского  полового  гормона  —  тестостерона,  уровень  которого  с  возрастом  неуклонно  снижается  даже  у  здоровых  мужчин  [22,  24,  27].  Главным  продуцентом  тестостерона  являются  интерстициальные  эндокриноциты  семенников  —  так  называемые  «клетки  Лейдига»  (КЛ)  [9,  10,  16,  19,  27,  33].

Эти  клеточные  элементы  расположены  в  межуточной  ткани  яичек  между  извитыми  канальцами  поодиночке  или  в  виде  скоплений  различной  численности  вблизи  кровеносных  капилляров  [3,  12,  21].  КЛ  весьма  крупные,  их  размер  достигает  20  мкм  и  более  [16].  Ядра  КЛ  обычно  округло-овальной  формы,  светлые,  с  1—2,  иногда  больше,  ядрышками  [12,  16].  Цитоплазма  ацидофильная,  зернистая,  содержит  многочисленные  органеллы,  среди  которых  преобладают  митохондрии  и  гладкий  эндоплазматический  ретикулум,  что  свидетельствует  о  высокой  синтезирующей  способности  данных  клеточных  элементов  [3,  9,  12,  16].

Число  КЛ  достигает  максимума  к  20  годам  жизни  человека  [27,  40]  и  мало  изменяется  до  60  лет,  составляя  4  %  объёма  зрелого  яичка  [25,  27].  После  60  лет  их  число  постепенно  снижается  на  половину  [27].

Выделяют  3  различных  морфофункциональных  типа  КЛ  в  зависимости  от  их  величины:  малые,  средние  и  большие  [7,  8,  12,  15,  17].  Согласно  литературным  данным,  КЛ  малых  размеров  являются  малоактивными  в  отношении  стероидогенеза  и  представляют  собой  инволюционирующие  формы;  напротив,  КЛ  среднего  и  большого  размера  активно  продуцируют  тестостерон  [6—8,  11,  12,  17,  20,  37,  17]. 

Этот  андрогенный  гормон  необходим  для  нормального  течения  сперматогенеза,  регулирует  развитие  и  функцию  добавочных  желез  половой  системы,  обеспечивает  развитие  вторичных  половых  признаков,  определяет  сексуальную  активность  и  половое  поведение  [9,  19].

Регуляция  синтеза  тестостерона  КЛ  находится  под  контролем  гипоталамо-гипофизарной  системы  [3,  9,  10,  17,  27].  Гонадолиберин,  секретируемый  в  пульсовом  режиме  в  портальную  систему  гипофиза,  стимулирует  в  нём  синтез  гонадотропных  гормонов,  одним  из  которых  является  лютеинизирующий  гормон  (ЛГ),  стимулирующий  эндокринную  функции  яичка  за  счёт  прямого  действия  на  КЛ,  —  чем  больше  ЛГ  в  крови,  тем  интенсивнее  продукция  тестостерона.  Напротив,  повышение  сывороточного  уровня  последнего  приводит  к  угнетению  секреции  ЛГ  (обратная  связь).

Большинство  научных  исследований,  посвященных  тестикулярным  интерстициальным  эндокриноцитам,  носит  экспериментальный  характер  [12].  При  этом  часто  использовались  разнообразные  морфометрические  методы,  позволяющие  с  разных  сторон  объективно  осветить  те  или  иные  изменения  различных  тканевых  и  клеточных  структур,  в  частности,  КЛ  [15,  37,  38].  К  настоящему  времени  достаточно  подробно  изучена  возрастная  функциональная  морфология  семенников.  Однако  разработка  этой  проблемы  у  человека  дала  противоречивые  результаты  [27,  30—32,  34,  35,  39,  42].

Вместе  с  тем,  особенности  функциональной  морфологии  КЛ,  ассоциированные  с  возрастом,  применительно  к  относительно  здоровым  мужчинам  могут  служить  так  называемой  «условной  нормой»  (УН)  и  быть  полезными  при  изучении  эндокринной  части  семенников  в  условиях  патологии.

Поэтому  цель  нашего  исследования  —  проследить  возрастную  динамику  изменений  КЛ  и  определить  границы  УН,  что  является  первым  этапом  более  углублённого  изучения  данных  клеточных  элементов  при  действии  различных  экзогенных  повреждающих  факторов,  в  частности,  некоторых  лекарственных  препаратов.

Материал  и  методы

Морфометрически  изучены  КЛ  семенники  35  мужчин  в  возрасте  от  23  до  72  лет,  умерших  в  общесоматическом  стационаре  от  различных  остро  развившихся  заболеваний,  не  имевших  связи  с  эндокринной  патологией  и  нарушениями  обмена,  что  верифицировано  на  аутопсии. 

Материал  разделён  на  следующие  возрастные  группы:  I  —  до  30  лет  (4  человека),  II  —  31—40  лет  (7),  III  —  41—50  лет  (8),  IV  —  51—60  лет  (9),  V  –  61  год  и  старше  (7).

Парафиновые  срезы  окрашивались  гематоксилином  и  эозином.  Методом  точечного  счёта  [1]  определялась  плотность  КЛ  (процентное  содержание  в  ткани  яичка).  Производился  подсчёт  числа  эндокриноцитов,  приходящихся  на  1  поперечный  срез  семенного  извитого  канальца.  Для  характеристики  компоновки  изучаемых  клеток  в  интерстициальной  ткани  семенника  использовали  методику,  предложенную  К.В.  Буньковым  (2012)  [2],  разработанную  по  материалам  статьи  А.  Gumiñska  с  соавторами  (2007)  [29].  Оценку  проводили  по  бальной  системе:  полное  отсутствие  клеток  в  поле  зрения  —  0  баллов,  наличие  от  1—5  клеток  —  1  балл,  6—10  клеток  —  2  балла,11—30  клеток  —  3  балла,  более  30  клеток  —  4  балла  [11,  15,  17,  37,  38].  Итоговую  величину  обозначали  как  коэффициент  компоновки  (КК). 

С  помощью  выверенного  окуляр-микрометра  измерялись  диаметры  КЛ  и  их  ядер  с  последующим  расчётом  ядерно-цитоплазматического  индекса  (ЯЦИ),  а  также  оценкой  содержания  различных  морфофункциональных  клеточных  типов  (активных  и  неактивных),  на  основании  чего  выводился  коэффициент  активности  (КА)  тестикуляпных  эндокриноцитов  по  И.Ю.  Макарову  (1995)  [6],  представляющий  собой  отношение  числа  активных  КЛ  к  неактивным.

Подробное  описание  применённых  методов  исследование  приведено  в  соответствующей  литературе  [1,  2,  6,  7,  11,  15,  17,  29,  37,  38].

Полученные  количественные  результаты  обработаны  статистически  (компьютерная  программа  «Statistica  6.0»)  с  уровнем  значимости  различий  95  %  и  более  (p≤0,05).  При  этом  определены  не  только  морфометрические  и  количественные  параметры  КЛ  по  возрастным  группам,  но  и  вычислены  обобщённые  средние  показатели  (Σ),  стандартизованные  по  возрасту,  для  наиболее  стабильного  в  сексуальном  и  репродуктивном  плане  возрастного  периода  —  от  30  до  60  лет.

Результаты  и  обсуждение

Итоги  проведённого  исследования  обобщены  в  таблице,  анализ  которой  выявляет  определённые  закономерности.

На  нашем  материале  наблюдаются  признаки  гиперплазии  КЛ,  ассоциированной  с  возрастом.  Так,  плотность  указанных  клеток  по  мере  старения  организма  имеет  тенденцию  к  нарастанию,  приобретающую  статистическую  значимость  после  60-летнего  возраста  (группа  V).

Аналогичным  образом  выглядит  динамика  относительного  числа  КЛ,  но  по  этому  показателю  уже  после  40  лет  (группа  III)  различия  по  сравнению  с  молодым  возрастом  (группа  I)  статистически  достоверны. 

Подобные  явления  находят  двоякое  объяснение.  Во-первых,  это  может  быть  связано  с  определённой  возрастной  атрофией  канальцевого  аппарата  яичка  [26,  41,  44,  45].  Во-вторых,  что  более  вероятно  и  обосновано,  а  также  находит  своё  подтверждение  в  литературе  [14,  23,  31,  34],  имеет  место  гиперплазия  КЛ,  ассоциированная  с  возрастом.  Её  можно  расценивать  как  компенсаторно-приспособительный  процесс,  направленный  на  поддержание  необходимого  сывороточного  уровня  тестостерона  при  возрастном  снижении  функциональной  активности  КЛ  [14,  36].  О  последнем  явлении  свидетельствуют  сдвиги  таких  показателей,  как  размеры  КЛ  и,  особенно,  их  ядер  [7,  8,  12,  17,  18].  При  этом  средний  диаметр  КЛ  в  разных  возрастных  группах  подвержен  колебаниям,  но  статистически  различия  несущественны,  хотя  в  группе  V  этот  параметр,  на  первый  взгляд,  заметно  изменён.

Таблица  1. 

Возрастные  морфометрические  показатели  клеток  Лейдига

Примечание:  *  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  I.

  **  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  II. 

  ***  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  III.

  #  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  IV. 

Напротив,  величина  ядер  КЛ  значимо  снижается  по  мере  старения  организма,  начиная  уже  с  группы  III.  Подобный  феномен  считается  признаком  снижения  функциональной  активности  КЛ  [7,  8,  12,  17,  18].  Вместе  с  тем,  такой  традиционный  показатель,  как  ЯЦИ,  оказался  достаточно  инертным  и  не  демонстрирует  достоверных  различий  по  исследованным  группам,  хотя  в  литературе  есть  указания,  что  ЯЦИ  значимо  снижается  при  активации  КЛ  [13].

Однако  наиболее  убедительным  доказательством  возрастной  гипофункции  КЛ  являются  процентные  соотношения  различных  типов  эндокриноцитов,  присутствующих  в  их  популяции  в  разные  возрастные  периоды  [11].  Соответственно  пропорциям,  определённым  в  каждой  возрастной  группе,  наблюдается  существенное  снижение  КА  изучаемых  клеток,  обусловленное  физиологическим  старением  организма.  Различия  КА  с  группой  I  статистически  значимы  уже  после  40  лет  (группа  III),  причём  в  группах  IV  и  V  указанные  различия  достоверны  по  сравнению  со  всеми  предыдущими  группами.

Таким  образом,  комплекс  показателей,  характеризующих  уровень  функциональной  активности  КЛ,  ассоциированный  с  возрастом,  показывает  наличие  возрастной  гипофункции  данных  клеток.

Характер  компоновки  КЛ  в  межуточной  ткани  вблизи  кровеносных  капилляров,  определённый  с  помощью  системы  баллов,  также  имеет  тенденцию,  но  статистически  неподтверждённую,  к  уплотнению  и  увеличению  размера  клеточных  групп.  Однако  в  пожилом  возрасте  (группа  V)  вновь  наблюдается  более  рыхлое  расположение  клеток  и/или  уменьшение  численности  групп  КЛ  —  КК  понижается,  хотя  и  недостоверно.  Подобная  динамика  может  быть  объяснена  как  возрастной  гиперплазией  КЛ,  рассмотренной  ранее,  так  и  определёнными  колебаниями  объёма  интерстициальной  ткани  семенников  за  счёт  роста  их  герминативной  части  в  физиологически  активном  возрасте  и  атрофии  извитых  канальцев  в  старости. 

Заключение 

Морфофункциональные  изменения  КЛ,  ассоциированные  с  физиологическим  старением  организма,  имеют  достаточно  чётко  выраженный  и  разнонаправленный  характер.  Так,  показатели,  характеризующие  численность  КЛ  и  их  компоновку  в  интерстициальной  ткани  семенников,  свидетельствуют  о  наличии  возрастного  гиперпластического  процесса.  Напротив,  показатели  индивидуальной  функциональной  активности  КЛ  указывают  на  их  гипофункцию,  прогрессирующую  с  возрастом. 

Выраженность  обоих  процессов  длительное  время  находится  в  равновесии,  обеспечивая  тем  самым  достаточную  продукцию  тестостерона  для  поддержания  нормальной  жизнедеятельности  организма,  в  частности,  в  плане  сексуальной  и  репродуктивной  функций.  Лишь  в  пожилом  возрасте  (старше  60  лет)  адаптационные  возможности  существенно  сокращаются,  что  ведёт  к  снижению  уровня  тестостерона  в  сыворотке  крови  со  всеми  вытекающими  из  этого  последствиями.

Cписок  литературы:

1. Автандилов  Г.Г.  Медицинская  морфометрия.  М.:  Медицина,  1990.  —  384  с. 
2. Буньков  К.В.  Морфологическая  характеристика  стромального  компонента  семенников  у  детей  различного  возраста  //  Актуальные  вопросы  медицинской  науки:  материалы  международной  заочной  научно-практической  конференции  (05  сентября  2012  г.).  Новосибирск:  Сибирская  ассоциация  консультантов,  2012.  —  С.  55—64.
3. Гистология.mp3  —  Мужская  половая  система  (часть  1).  Мужские  половые  железы.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.morphology.dp.ua/_mp3/male1.php  (дата  обращения:  05.02.2014).
4. Гончаров  Н.  Возраст  и  гормональная  функция  половых  желез  у  мужчин.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.erudition.ru/ref/id.32395_1.html  (дата  обращения:  05.02.2014).
5. Климакс  (климактерий)  у  мужчин.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.f-med.ru/endocrinology/klimaks_man.php  (дата  обращения:  05.02.2014).
6. Кривецький  В.В.,  Москаленко  Р.А.,  Карпенко  Л.І.  [и  др.]  Особливості  морфофункціонального  дослідження  ендокринного  компоненту  сім’яників  в  умовах  експерименту  //  Журн.  клін.  експ.  мед.  дослід.  —  2013.  —  Т.  1,  №  2  (5сс).  —  С.  149—153.
7. Макаров  И.Ю.  Морфофункциональное  состояние  сегментарных  бронхов  и  эндокринного  аппарата  семенников  при  бронхиальной  астме:  Дис.  …  канд.  мед.  наук.  Благовещенск,  1995.  —  181  с. 
8. Медведев  Ю.Л.,  Портной  А.С.  Морфология  гормонопродуцирующих  клеток  яичка  при  дисгормональной  гиперпластической  простатопатии  //  Арх.  пат.  —  1969.  —  Т.  31,  —  №  5.  —  C.  65—71. 
9. Морфофункциональная  характеристика  семенников  крыс  Вистар  при  воздействии  липополисахарида  в  условиях  гиперандрогенемии  /  Васильева  С.Г.,  Мхитаров  В.А.,  Косырева  А.М.  [и  др.]  //  Рос.  мед.-биол.  вестн.  —  2011.  —  №  2.  —  С.  35—40.
10. Мужская  репродуктивная  система.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://cytohistology.ru/embriologiya/muzhskaya-reproduktivnaya-sistema/  (дата  обращения:  05.02.2014).
11. Мужские  половые  железы.  Эмбриология,  анатомия  и  физиология.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.f-med.ru/endocrinology/muz_polovie_jelezy_fiziologia.php  (дата  обращения:  05.02.2014).
12. Романов  А.С.  Морфофункциональные  особенности  становления  генеративной  и  эндокринной  функции  семенников  потомства  самок  крыс  с  хроническим  экспериментальным  поражением  печени  различного  генеза  :  Дис.  ...  канд.  биол.  наук.  Челябинск,  2010.  —  234  с.
13. Саяпина  И.Ю.,  Целуйко  С.С.  Динамика  количественных  показателей  клеток  Лейдига  при  адаптации  организма  к  низким  температурам  //  Далневосточный  мед.  журн.  —  2011.  —  №  2.  —  С.  84—87.
14. Саяпина  И.Ю.,  Целуйко  С.С.,  Доровских  В.А.  Использование  программы  Видеотест-Морфология  5.0  в  оценке  компенсаторно-приспособительных  реакций  органов  мужской  репродуктивной  системы  //  Информатика  и  системы  управления.  —  2010.  —  №  2  (24).  —  С.  73—76.
15. Старкова  Н.Т.  Анатомия  и  физиология  яичек.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://medbe.ru/materials/anatomiya-drugoe/anatomiya-i-fiziologiya-yaichek/  (дата  обращения:  05.02.2014).
16. Ухов  Ю.И.,  Астраханцев  А.Ф.  Морфометрические  методы  в  оценке  функционального  состояния  семенников  //  Арх.  анат.  гист.  эмбр.  —  1983.  —  Т.  84,  —  №  3.  —  С.  66—72.
17. Хэм  А.,  Кормак  Д.  Гистология:  пер.  с  англ.  М.:  Мир,  1983.  —  Т.  5,  —  Гл.  27.  —  С.  186—209.
18. Age-related  changes  in  the  steroid-producting  cells  of  rat  testis  /  Barbutska  D.,  Koeva  Y.,  Bakalska  M.  [et  al.]  //  Scripta  Sci.  Med.  —  2013.  —  V.  45,  —  №  3.  —  P.  32—35.
19. Bardin  C.W.  Androgens:  early  attempts  to  evaluate  Leydig  cell  function  in  man  //  Payne  A.H.,  Hardy  M.P.,  Russell  L.D.  (eds.).  The  Leydig  cell.  Viena:  Cache  River  Press,  1996.  —  P.  31—42. 
20. Bergh  A.  Local  differences  in  Leydig  cell  morphology  in  the  adult  rat  testis:  evidences  for  a  local  control  of  Leydig  cells  by  adjacent  semineferous  tubules  //  Int.  J.  Androl.  —  1982.  —  V.  5,  —  №  3.  —  P.  325—330.
21. Carlos  J.,  Pinto  da  Matta  S.L.  Microscopic  morphology  and  testis  morphometry  of  captivity-bred  adult  bullfrogs  (Lithobates  catesbeianus  Shaw,  1802)  //  Braz.  Arch.  Biol.  Technol.  —  2009.  —  V.  52,  —  №  6.  —  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://dx.doi.org/10.1590/S1516-89132009000600018  (дата  обращения:  05.02.2014).
22. Changes  in  serum  concentrations  of  conjugated  and  unconjugated  steroids  in  40-  to  80-year-old  men  /  Belanger  A.,  Candas  B.,  Dupont  A.  [et  al.]  //  J.  Clin.  Endocrinol.  Metab.  —  1994.  —  V.  79.  —  P.  1086—1090.
23. Correlations  between  intralobular  interstitial  morphological  changes  and  epithelial  changes  in  ageing  testis  /  Pop  O.T.,  Coto  C.G.,  Pleşea  I.E.  [et  al.]  //  Rom.  J.  Morphol.  Embryol.  —  2011.  —  V.  52,  —  Suppl.  1.  —  P.  339—347.
24. Dabbs  J.M.,  Jr.  Age  and  seasonal  variation  in  serum  testosterone  concentration  among  men  //  Chronobiol.  Int.  —  1990.  —  V.  7.  —  P.  245—249.
25. de  Kretser  D.M.,  Kerr  J.B.  The  cytology  of  the  testis  /  Ernst  K.,  Neil  J.D.  (eds.).  The  physiology  of  reproduction.  N.Y.:  Raven,  —  1994.  —  V.  1.  —  P.  1177—1290.
26. Dierichs  R.,  Wrobel  K.H.,  Schilling  E.  Licht-  und  elektronen-mikroskopische  Untersuchungen  an  den  Leydigzellen  des  Shweines  wahrend  der  postnatalen  Entwicklung  //  Z.  Zellforsch.  mikrosk.  Anat.  —  1973.  —  Bd.  143.  —  S.  207—227.
27. Dong  Q.,  Hardy  M.P.  Leydig  cell  function  in  man  /  Winters  S.J.  (ed.).  Male  hypogonadism:  basic,  clinical,  and  therapeutic  principles.  Totowa,  NJ:  Humana  Press  Inc.,  2011.  —  P.  23—43.
28. Dorostghoal  M.,  Sorooshnia  F.,  Zardkaf  A.  Stereological  analysis  of  Wistar  rat  testis  during  early  postnatal  development  //  Anat.,  Histol.  Embryol.  —  2011.  —  V.  40,  —  №  2.  —  P.  89—94. 
29. Features  of  impaired  seminiferous  tubule  differentiation  are  associated  with  germ  cell  neoplasia  in  adult  men  surgically  treated  in  childhood  because  of  cryptorchidism  /  Gumiñska  A.,  Sowikowska-Hilczer  J.,  Kuzañski  W.  [et  al.]  //  Fol.  Histochem.  Cytobiol.  —  2007.  —  V.  45,  —  Supp.  1.  —  P.  163—168.
30. Harbitz  T.B.  Morphometric  studies  of  Leydig  cells  in  elderly  men  with  special  reference  to  the  histology  of  the  prostate  //  Acta  Pathol.  Microbiol.  Scand.  [A].  —  1973.  —  V.  81,  —  №  3.  —  P.  301—314.
31. Honore  L.H.  Ageing  changes  in  the  human  testis:  a  lightmicroscopic  study  //  Gerontology.  —  1978.  —  V.  24,  —  №  1/  —  P.  58—65.
32. Kaler  L.W.,  Neaves  W.B.  Attrition  of  the  human  Leydigcell  population  with  advancing  age  //  Anat.  Rec.  —  1978.  —  V.  192,  —  №  4.  —  P.  513—518.
33. Kim  I.,  Yang  H.  Morphometric  study  of  the  testicular  interstitium  of  rats  during  postnatal  development  //  Korean  J.  Anat.  —  1999.  —  V.  32.  —  P.  849—858.
34. Kothari  L.K.,  Gupta  A.S.  Effect  of  ageing  on  the  volume,structure  and  total  Leydig  cell  content  of  human  testis  //  Int.  J.  Fertil.  —  1974.  —  V.  19,  —  №  3.  —  P.  140—146.
35. Leydig  cell  numbers,  daily  sperm  production  and  serum  gonadotropin  levels  in  ageing  men  /  Neaves  W.B.,  Jonson  L.,  Porter  J.C.  [et  al.]  //  J.  Clin.  Endocrinol.  Metab.  —  1984.  —  V.  59,  —  №  4.  —  P.  756—763.
36. Mahmood  I.M.  Histological  changes  in  testicular  tissue  with  age  //  Tikrit  J.  Pure  Sci.  —  2008.  —  V.  13,  —  №  3.  [Электронный  ресурс].  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.iasj.net/iasj?func=fulltext&aId=39154  (дата  обращения:  15.02.2014).
37. Mori  H.,  Christensen  A.K.  Morphometric  analysis  of  Leydig  cells  in  the  normal  rat  testis  //  J.  Cell  Biol.  —  1980.  —  V.  84,  —  №  2.  —  P.  340—354.
38. Morphometric  aspects  of  rat  testis  development  /  Gaytan  F.,  Lucena  M.C.,  Munoz  E.  [et  al.]  //  J.  Anat.  —  1986.  —  V.  145.  —  P.  155—159.
39. Neaves  W.B.,  Jonson  L.,  Petty  C.S.  Age-related  change  in  numbers  of  other  interstitial  cells  in  testes  of  adult  men:  evidence  on  the  fate  of  Leydig  cells  lost  with  increasing  age  //  Biol.  Reprod.  —  1985.  —  V.  33,  —  №  1.  —  P.  259—269.
40. Nistal  M,  Paniagua  R,  Regadera  J,  Santamaria  L,  Amat  P.A  quantitative  morphological  study  of  human  Leydig  cells  from  birth  to  adulthood  //  Cell  Tissue  Res.  —  1986.  —  V.  246.  —  P.  229—236.
41. Pubertal  development  of  the  boar:  age-related  changes  in  testicular  morphology  and  in  vitro  production  of  testosterone  and  estradiol-17β^1,2  /  Allrich  R.D.,  Christenson  R.K.,  Ford  J.J.  [et  al.]  //  Biol.  Reproduct.  —  1983.  —  V.  28.  —  P.  902—909.
42. Testicular  involution  in  elderly  men:  comparison  of  histologic  quantitative  studies  with  hormone  patterns  /  Paniagua  R.,  Martin  A.,  Nistal  M.  [et  al.]  //  Fertil.  Setril.  —  1987.  —  V.  47,  —  №  4.  —  P.  671—679.
43. Testosterone  levels  and  development  of  the  penile  spines  and  testicular  tissue  during  the  postnatal  growth  in  Wistar  rats  /  Silva  M.A.,  Villaseñor  R.M.V.,  Márquez  S.R.[et  al.]  //  Adv.  Sex.  Med.  —  2013.  —  V.  3.  —  P.  1—9.
44. van  Straaten  H.W.M.,  Wensing  C.J.G.  Histomorphometric  aspects  of  testicular  morphogenesis  in  the  pig  //  Biol.  Reprod.  —  1977.  —  V.  17.  —  P.  467—472.
45. van  Straaten  H.W.M.,  Wensing  C.J.G.  Leydig  cell  development  in  the  testis  of  the  pig  //  Biol.  Reprod.  —  1978.  —  V.  18.  —  P.  86—93.