КРИСТАЛЛОГРАММЫ  КУЛЬТУР,  ВЫДЕЛЕННЫХ  ИЗ  РАЗНЫХ  БИОТОПОВ  НОВОРОЖДЕННЫХ  ДЕТЕЙ

Сейтханова  Бибигул  Толегенкызы

д-р  мед.  наук,  Южно-Казахстанская  Государственная  Фармацевтическая  академия.  Казахстан

Шапамбаев  Насриддин  Заитович

канд.  мед.  наук  Южно-Казахстанская  Государственная  Фармацевтическая  академия.  Казахстан.

E-mail: 

CRYSTALLOGRAMS  OF  CULTURES  EXTRACTED  FROM  VARIOUS  BIOTYPES  OF  NEWBORN  CHILDREN

Bibigul  Seythanova

doctor  of  Medical  Sciences,  South  Kazakhstan  State  Pharmaceutical  Academy,  Kazakhstan

Nasriddin  Shapambaev

candidate  of  Medical  Sciences,  South  Kazakhstan  State  Pharmaceutical  Academy,  Kazakhstan

АННОТАЦИЯ

Нами  предпринята  попытка  использования  Кристаллографического  метода  для  идентификации  микроорганизмов,  выделенных  из  разных  биотопов  новорожденных  детей.  Анализ  представленных  результатов,  показывает,  что  кристаллограммы  штаммов  разных  видов  микроорганизмов  существенно  отличались  друг  от  друга.  Эти  данные  свидетельствуют  о  наличии  специфических  видовых  особенностей  кристаллограмм  микроорганизмов,  которые  можно  использовать  при  решении  вопросов  дифференциации  и  идентификации  микроорганизмов.  Применение  кристаллографического  метода  дает  возможность  существенно  ускорить  и  упростить  идентификацию  и  дифференциацию  микроорганизмов. 

ABSTRACT

The  author  takes  a  shot  at  the  use  of  crystallographic  method  for  identification  of  microorganisms  extracted  from  various  biotypes  of  newborn  children.  The  analysis  of  results  shows  that  strains’  crystallograms  of  different  kinds  of  microorganisms  differ  a  lot  from  each  other.  This  data  imply  specific  characteristics  of  crystallograms  of  microorganisms,  which  can  be  used  when  differentiation  and  identification  of  microorganisms.  The  use  of  crystallographic  method  allows  to  quicker  and  simpler  identification  and  differentiation  of  microorganisms. 

Ключевые  слова:  культура,  штамм,  кристаллограмм.

Keywords:  culture;  strain;  crystallogram. 

Микрофлора,  присутствующая  на  коже  и  слизистых  оболочках  открытых  полостей,  включает  в  себя  десятки  и  сотни  разнообразных  видов  микроорганизмов  [1—6].В  настоящее  время  досконально  изучены  и  широко  используются  в  таксономии  микроорганизмов  их  физиологические,  биохимические  и  иммуногенные  свойства.  Однако,  часто  этого  бывает  недостаточно,  в  таких  случаях  могут  потребоваться  дополнительные  весьма  сложные  аналитические  процедуры,  такие  как  электрофорез  клеточных  белков  в  полиакриламидном  геле,  анализ  состава  липидов,  гибридизация  нуклеиновых  кислот,  метод  генетических  зондов  и  другие  [7].

Вместе  с  тем  достоверная  идентификация  многих  родов  и  видов  микроорганизмов,  в  том  числе  и  патогенных  (учитывая  наличие  у  них  многочисленных  мутаций),  не  может  быть  основана  на  постановке  только  одного  теста,  а  основывается,  как  правило,  на  целом  их  комплексе.  Все  это  свидетельствует  о  том,  что,  несмотря  на  многолетнее  изучение  различных  способов  идентификации  микроорганизмов,  перечисленные  выше  методы,  не  могут,  полностью  удовлетворить  микробиологов.  Отсюда  возникает  потребность  в  выявлении  существенно  новых  свойств  микроорганизмов,  определение  которых  характеризовалось  бы  простотой,  стабильностью  и  специфичностью,  достаточной  для  достоверной  их  идентификации. 

Кристаллографический  метод  является  принципиально  новым  методом  идентификации  микроорганизмов,  отличающимся  доступностью  и  высокой  воспроизводимостью.  Использование  данного  метода  позволяет  практически  с  помощью  одного  только  теста  достоверно  идентифицировать  перечисленные  микроорганизмы,  тогда  как  при  традиционной  идентификации  необходима  постановка  от  5  до  20  и  более  тестов. 

Цель:  Нами  предпринята  попытка  использования  данного  метода  для  идентификации  микроорганизмов,  выделенных  из  разных  биотопов  детей.  Материалом  для  исследований  послужили  культуры,  изолированные  из  кожи  и  носа  новорожденных  детей.  При  их  выделении  и  предварительной  идентификации  использовали  традиционные  методы,  а  также  описанный  выше  кристаллографический  метод  идентификации  микроорганизмов.

Методы  исследования.  Изучение  кристаллогенных  свойств  исследуемых  культур  выполняли  следующим  образом:  из  суточной  культуры,  выращенной  на  скошенном  мясо-пептонном  агаре,  готовили  густую  микробную  взвесь  в  стерильном  физиологическом  растворе  (10—25  млрд.  микробных  тел/мл).  Затем  на  дно  пластиковой  чашки  Петри  помещали  каплю  микробной  взвеси  и  равномерно  распределяли  ее  кончиком  пипетки  в  виде  овала  размером  примерно  1,5х1,0  см.  Чашку  помещали  в  эксикатор  с  силикагелем,  закрывали  эксикатор  и  инкубировали  его  в  термостате  при  37  ⁰С  в  течение  18—24  часов  до  полного  высыхания  капель  и  образования  на  их  месте  кристаллического  налета  (кристаллограмма).  Полученные  кристаллограммы  изучали  визуально  и  с  помощью  стереоскопического  микроскопа,  затем  фотографировали  и  переносили  в  банк  кристаллограмм  в  компьютере.  Все  исследования  повторяли  с  разными  концентрациями  микробной  взвеси  в  трех  сериях.  Для  контроля  использовали  кристаллограммы  условно  патогенных  микроорганизмов  (E.coli,  Ps.  aeruginosa  68,  C.  albicans  723),  хранящихся  в  коллекции  бактериологической  лаборатории  РСЦХ  им.  ак.  В.  Вахидова  и  физиологического  раствор.

Результат.  На  рисунке  1.1  представлены  кристаллограммы  культур,  изолированных  с  кожи  новорожденных  детей.  При  этом  изучены  кристаллограммы  штаммов  Klebsiella,  E.  coli  и  S.  epidermidis.

Кристаллограмма  Klebsiella  12  имела  вид  правильных  четырехугольных  кристаллов  среднего  размера,  на  их  поверхности  имелись  ряды  параллельных  линий,  идущих  по  периметру  кристаллов.  Кристаллограмма  E.coli  18  состояла  из  крупных  кристаллов  с  неровными  краями,  некоторые  из  них  были  сдвоенными.  Кристаллограммы  штаммов  S.  epidermidis  16  и  9  содержали  кристаллы  правильной  в  основном  прямоугольной  формы  с  испещренной  поверхностью.

На  рисунке  1.2.  представлены  кристаллограммы  культур,  выделенных  из  носа  новорожденных  детей.  Кристаллограммы  Klebsiella  pneumoniae  10  и  17  имели  вид  крупных  четырехугольных  кристаллов  с  крестовидным  рисунком  на  их  поверхности.  Характерной  особенностью  этих  кристаллограмм  было  наличие  дочерних  кристалловидных  отростков  от  основных  кристаллов.  Кристаллограмма  S.  aureus  14  состояла  из  однотипных  крупных  листовидных  кристаллов  с  желтоватым  оттенком. 

Анализ  представленных  результатов,  показывает,  что  кристаллограммы  штаммов  разных  видов  микроорганизмов  существенно  отличались  друг  от  друга.  Эти  данные  свидетельствуют  о  наличии  специфических  видовых  особенностей  кристаллограмм  микроорганизмов,  которые  можно  использовать  при  решении  вопросов  дифференциации  и  идентификации  микроорганизмов.  При  отработке  методики  кристаллографического  метода  в  рамках  нашего  исследования  важным  было  изучение  влияния  концентрации  микробной  взвеси  на  характер  образующихся  кристаллограмм.  Концентрация  взвеси  играет  существенную  роль. 

В  частности,  можно  отметить,  что  при  высоких  концентрациях  (20—25  млрд.  микробных  тел/мл)  наблюдается  преимущественно  образование  дендритов,  а  при  меньших  концентрациях  (10—15  млрд.  микробных  тел/мл),  наряду  с  дендритами,  формируются  и  характерные  центры  кристаллизации,  что  существенно  повышает  информативность  кристаллограмм.  Кристаллограммы  изученных  культур,  при  точном  соблюдении  методики,  отличались  высокой  воспроизводимостью. 

Сказанное  свидетельствует  о  том,  что  кристаллограммы  микроорганизмов  характеризуются  высокой  информативностью  и  достоверностью.  На  получение  кристаллограмм  затрачивается  не  более  18—24  часов. 

Выводы.  Таким  образом,  установлена  принципиальная  возможность  использования  кристаллографического  метода  для  идентификации  микроорганизмов  нормальных  биотопов.  Выявлено,  что  эти  микроорганизмы  характеризуются  специфическими  кристаллогенными  свойствами,  что  позволяет  использовать  кристаллографический  метод  для  их  идентификации  и  дифференциации. 

Применение  кристаллографического  метода  дает  возможность  существенно  ускорить  и  упростить  идентификацию  и  дифференциацию  микроорганизмов.

Рисунок  1.1.  Кристаллограммы  культур,  изолированных  с  кожи  новорожденных  детей

Рисунок  1.2.  Кристаллограммы  культур,  выделенных  из  носа  новорожденных  детей

Список  литературы:

1.Авдеева  Н.С.,  Шарипова  И.С.,  Сергевнин  В.И.,  Редько  С.В.  Роль  материнской  микрофлоры  в  формировании  кожного  микробиоценоза  новорожденных  в  конкретном  акушерском  стационаре.  //  Стратегия  и  тактика  борьбы  с  внутрибольничными  инфекциями  на  современном  этапе  развития  медицины.  Матер.  междун.  конгресса.  М.,  2006.  —  С.  19—21.

2.Бектимиров  А.М.-Т.,  Худайбердиев  Я.К.,  Касымов  И.А.,  Мардаева  Г.Т.  Дисбиозы.  Учебное  пособие.  Ташкент.  2007.  —  52  с.

3.Захарова  Ю.А.  Характеристика  микрофлоры  плацентарной  ткани  и  вагинальных  секретов  беременных,  рожениц  и  родильниц  /  Ю.А.  Захарова,  И.В.  Фельдблюм,  М.М.  Падруль  и  др.  //  Пермский  медицинский  журнал.  —  2006.  —  №  3  (23).  —  С.  61—67.

4.Захарова  Ю.А.  Характеристика  микрофлоры  заушной  складки  новорожденного  в  родах  и  ранний  неонатальный  период  /  Ю.А.  Захарова,  И.В.  Фельдблюм  //  Здоровье  населения  и  среда  обитания  (ежемесячный  информационный  бюллетень).  —  2007.  —  №  6  (171).  —  С.  18—23.

5.Хмельницкий  О.К.  О  кандидозе  слизистых  оболочек.  Архив  патологии,  —  2000,  —  Т.  62,  —  №  6,  —  С.  3—10.

6.Gao  Z.,  Tseng  C.H.,  Pei  Z.,  Blaser  M.J.  Molecular  analysis  of  human  forearm  superficial  skin  bacterial  biota.  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.  —  2007.  —  №  104,  —  P.  2927—2932.

7.Moore  ER,  Anderson  GC,  Bergman  N.  Early  skin-to-skin  contact  for  mothers  and  their  healthy  newborn  infants.  Cochrane  Database  of  Systematic  Reviews  2007,  Issue  2.  Art.  No.:  CD003519.  DOI:  10.1002/14651858.CD003519.pub2