ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ  ИССЛЕДОВАНИЕ  РОЛИ  Α₁  АДРЕНЕРГИЧЕСКИХ  РЕЦЕПТОРОВ  В  АНТИНОЦИЦЕПТИВНОМ  ЭФФЕКТЕ  АНТИДЕПРЕССАНТА  КЛОМИПРАМИН

Костадинов  Илия  Димитров

главный  ассистент,  кафедрой  фармакологии  и  клинической  фармакологии,

Медицинский  факультет,  Медицинский  Университетет,  г.  Пловдив,  Болгария

E-mail:  ilia_197575@abv.bg

Делев  Делян  Пенев

главный  ассистент,  кафедрой  фармакологии  и  клинической  фармакологии,

Медицинский  факультет,  Медицинскй  Университетет,  г.  Пловдив,  Болгария

Кокова  Весела  Юлиева

аассистент,  кафедрой  фармакологии  и  лекарственной  токсикологии,

Фармацевтический  факультет,  Медицинсикй  Университетет,  г.  Пловдив,  Болгария

Мурджева  Мариана  Атанасова

профессор,  кафедрой  микробиологии  и  имунологии,

Фармацевтический  факультет,  Медицинсикй  Университетет,  г.  Пловдив,  Болгария

Костадинова  Иванка  Илиева

профессор,  кафедрой  фармакологии  и  клинической  фармакологии,

Медицинский  факультет,  Медицинский  Университетет,  г.  Пловдив,  Болгария

EXPERIMENTAL  STUDY  ON  THE  ROLE  OF  Α₁  ADRENERGIC  RECEPTORS  IN  THE  ANTINOCICEPTIVE  EFFECT  OF  THE  ANTIDEPRESSANT  CLOMIPRAMINE

Kostadinov  Ilia  Dimitrov

assistant  professor,  Department  Pharmacology  and  Clinical  pharmacology,  Medical  Faculty,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Delev  Delian  Penev

assistant  professor,  Department  Pharmacology  and  Clinical  pharmacology,  Medical  Faculty,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Kokova  Vessela  Julieva,

assistant  professor,  Department  Pharmacology  and  Drug  Toxicology,

Pharmaceutical  Faculty,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Murdjeva  Marianna  Atanassova

professor,  Department  Microbiology  and  Iimmunology,

Pharmaceutical  Faculty,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Kostadinova  Ivanka  Ilieva,

professor,  Department  Pharmacology  and  Clinical  pharmacology,

Medical  Faculty,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

АННОТАЦИЯ

Цель  настоящего  исследования  —  установить  роль  α₁  адренергических  рецепторов  в  механизме  антиноцицептивного  действия  кломипрамина.  Использованы  были  32  самца  белых  крыс  породы  Wistar  разделенных  в  четыре  группы.  Животных  тестировали  трeмя  ноцицептивными  тестами:  «горячая  плита»,  анальгезиметр  и  перитонеальное  раздражение  индуцированное  уксусной  кислотой.  На  основании  результатов  исследования  сделаны  выводы,  что  кломипрамин  обладает  анальгетическую  активность  в  использованных  ноцицептивных  тестов,  причëм  α₁  адренергичные  рецепторы  играют  роль  в  механизме  его  антиноцицептивного  действия  относительно  теплового  и  механического,  что  не  касается  химического  стимула  боли. 

ABSTRACT

The  aim  of  the  present  study  was  to  investigate  the  possible  role  of  α₁  adrenergic  receptors  in  the  mechanism  of  the  antinociceptive  action  of  clomipramine.  32  male  Wistar  rats  were  divided  in  four  groups.  Three  antinociceptive  assays  were  used:  hot  plate,  analgesimeter  and  acetic  acid  test.  Based  on  results  of  the  study  we  made  conclusion  that  clomipramine  has  analgesic  activity  in  the  nociceptive  tests  used  and  α₁  adrenergic  receptors  play  role  in  the  mechanism  of  its  anatinociceptive  action  against  thermal  and  mechanical  stimuli  but  not  against  chemical  pain  stimulus.

Ключевые  слова:  кломипрамин,  доксазозин,  антиноцицепция,  α₁  адренорецепторы

Keywords:  clomipramine;  doxazosin;  antinociception;  α₁  adrenergic  receptors

Введение

Кломипрамин  трициклический  антидепрессант,  который  ингибирует  обратный  захват  серотонина  и  норадреналина  в  синапсах  ЦНС.  В  экспериментальных  моделях  боли  он  обладает  анальгетическую  активность.  Rojas-Corrales  MO  и  соавт.  установили,  что  как  кломипрамин,  так  и  его  активный  метаболит  дезметилкломипрамин  проявляют  сигнификантный  анальгетический  эффект  при  тесте  «горячая  плита»,  перитонеальное  раздражение  уксусной  кислотой  и  ноцицептивной  модели  с  интраплантарным  впрыскиванием  формалина  [6].  Ageel  AM  исследует  влияние  на  трициклических  антидепрессантов  дезипрамин  и  кломипрамин  на  эффект  опиоидного  анальгетика  бупренорфин  у  мышей.  Он  устанавливает  значительный  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина  в  моделях  боли  с  тепловым  стимолом,  и  значительное  потенцирование  анальгетического  эффекта  опиоида  бупренорфин  под  давлением  кломипрамина  [1].  Несмотря  на  установленного  анальгетического  эффекта  кломипрамина  в  ряд  экспериментальных  исследований,  до  сих  пор  механизм  достигнутой  анальгезии  остается  недостатъчно  выясненным.

Адренергическая  система  действует  синергистично  с  серотонинергической  при  контроле  боли.  Так  как  кломипрамин  блокирует,  хотя  и  слабее  обратный  захват  норадреналина,  можно  предположить  участие  адренергических  рецепторов  в  механизме  его  анальгетического  эффекта.

Цель  настоящего  исследования  —  установить  роль  α₁  адренергических  рецепторов  в  механизме  антиноцицептивного  действия  антидепрессанта  кломипрамин.

Материал  и  методы:

Животные

Использованы  были  32  самца  белых  крыс  породы  Wistar  разделенных  случайным  выбором  в  четыре  группы  по  8  животных  как  следует:  I  группа  (контрольная)  —  третированные  физиологическим  раствором  i.  p.  (интраперитонеально);  II  группа  (позитивная  контрольная)  —  третированные  анальгетиком  метамизол  в  дозе  150  mg/kg  т.м.  i.  p.;  III  группа  —  третированные  кломипрамином  в  дозе  20  mg/kg  т.м.  i.  p.  ;  IV  группа  —  третированные  кломипрамином  20  мг/кг  т.м.  +  доксазозином  (антагонист  α₁  адренорецепторов)  в  дозе  1  mg/kg  т.м.  i.  p.

Животных  выращивали  в  стандартных  лабораторных  условиях:  12:12  часовый  цикл  темно-светло,  45  %  относительная  влажн.  воздуха,  температура  26,5  ±  1⁰  C  и  свободный  доступ  к  пище  и  воде.

Ноцицептивные  тесты

Hot-plate  test  (тест  «горячая  плита»).  Используется  горячая  поверхность  с  температурой  55±5  ⁰  C.  Отчитывается  латентное  время,  определëнное  как  период  с  момента  размещения  животного  поверх  горячей  плиты  до  момента  когда  оно  начнëт  лизать  одну  из  задных  лап.  Максимальное  пребывание  на  плите  (cut-off  time)  30  секунд.  Для  статистической  обработки  использован  был  индикатор:  максимальный  возможный  эффект  (%  МВЕ),  вычисленный  по  формуле:

%  MВE  =  (Стоимость  после  третирования  —  стоимость  до  третирования  /  Cut-off  time  —  стоимость  до  третирования)  х  100.

Животных  поставляли  на  плите  за  час  до  их  третирования  и  на  первом,  втором  и  третьем  часу  после  третирования.  Для  групп  тестированных  двумя  медикаментами  опыт  провели  на  первом,  втором  и  третьем  часу  после  третирования  вторым  медикаментом.

Analgesimeter  (анальгезиметр).  Тест  описали  Randall  &  Selitto  (1957).  Используется  механический  стимул  боли.  Ноцицептивный  порог  измеряют  применяя  нажим  на  одну  из  задных  лап  крысы.  Отчитывается  в  условных  единицах  (сантиметры)  сила  нажима  при  котором  животное  оттягивает  тестированную  лапу.  Максимальный  нажим  25  см.  Для  статистической  обработки  использовали  индикатор:  максимальный  возможный  эффект  (%  MВE),  вычисленный  по  формуле:

%MВE  =  (Стоимость  после  третирования  —  стоимость  до  третирования  /  25  —  стоимость  до  третирования)  х  100.

Абдоминальный  констрикторный  тест  (перитонеальное  раздражение  уксусной  кислотой).  После  введения  уксусной  кислоты  интраперитонеально  животные  реагируют  выворачиванием  позвоночника.  Просчитывают  этих  выворачиваний  в  течении  20  минут  с  момента  впрыскивания.  Используется  3  %  раствор  уксусной  кислоты,  который  вводится  интраперитонеально  1  час  после  обработки  соответствующими  медикаментами.

Статистический  анализ:  Для  статистической  обработки  данных  использовали  метод  вариационного  анализа  —  One  Way  Anova  программы  SPSS  11.  Каждому  индикатору  были  определенны  средняя  арифметическая  стоимость  (mean)  и  стандартная  ошибка  (±SEM).  Сравнивание  результатов  между  группами  было  выполнено  с  помощью  Independent  Sample  T  test  при  уровне  на  значительности  Р  <  0,05.

Результаты

Рисунок.1.  Влияние  антагониста  α₁  адренергических  рецепторов  доксазозин  на  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина  при  тесте  «горячая  плита».*  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  первом  часу;  **  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  втором  часу;  ***  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  третьем  часу;  +  p  <  0,05  сравнивая  с  кломипрамином  на  третьем  часу

В  тесте  «горячая  плита»  кломипрамин  статистически  значительно  увеличил  стоимость  МВЕ  %  на  третьем  часу  (р  =  0,002),  сравнивая  с  контролем.  Метамизол,  использованный  в  качестве  эталонного  анальгетика  сигнификантно  увеличил  стоимость  этого  индикатора  в  трëх  проведенных  тестирований,  сравнивая  с  контрольной  группой  (р  =  0,001;  р<  0,0001;  р  =  0,005).  На  третьем  часу  группа  третированная  кломипрамином  +  доксазозином  не  отличается  статистически  от  контрольной  группы,  но  показала  достоверно  стоимость  ниже  МВЕ  %  сравнивая  с  животными,  третированные  только  кломипрамином  (р  =  0,008)  (см.  рис.  1).

Рисунок.  2.  Влияние  антагониста  α₁  адренергических  рецепторов  доксазозин  на  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина  в  тесте  Randall  &  Selitto  .  *  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  первом  часу;  **  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  втором  часу;  ***  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем  на  третьем  часу;  +  p  <  0,05  сравнивая  с  кломипрамином  на  третьем  часу

В  тесте  Randall  &  Selitto  кломипрамин  достоверно  увеличил  стоимость  МВЕ  %  сравнивая  с  контролем  в  трëх  проведенных  тестирований  (р  =  0,002;  р  <  0,0001,  р  <  0,0001).  Метамизол,  как  эталонный  анальгетик  демонстрирует  значительный  эффект  на  втором  и  третьем  часу  (р  =  0,008;  р  =  0,002)  сравнивая  с  контролем.  Группа,  третированная  кломипрамином  +  доксазозином  статистически  не  отличается  от  контрольной  во  всех  трëх  тестований.  На  третьем  часу  в  этой  группе  установилось  сигнификантное  уменьшение  стоимостей  МВЕ  %  сравнивая  с  группой  третированной  только  кломипрамином  (р  =  0,008)  (см.  рис.  2).

Рисунок  3.  Влияние  антагониста  α₁  адренергических  рецепторов  доксазозин  на  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина  в  абдоминально  констрикторном  тесте.  *  p  <  0,05  сравнивая  с  контролем

В  абдоминальном  констрикторном  тесте  группы  третированные  кломипрамином,  метамизолом  и  кломипрамином  +  доксазозином  показали  сигнификантное  уменьшение  числа  выворачиваний  позвоночника  сравнивая  с  контролем  (р  =  0,001).  Группа  получившая  кломипрамин  +  доксазозин  не  отличается  достоверно  от  группы,  третированной  только  кломипрамином  (см.  рис.  3).

Обсуждение

Мы  регистрировали  сигнификантный  антиноцицептивный  эффект  антидепрессанта  кломипрамин  в  случаях  использования  теплового,  механического  и  химического  стимула  боли.  С  целью  установления  евентуальной  роли  α₁  адренергических  рецепторов  в  механизме  этого  эффекта  кломипрамин  применили  одновременно  с  их  антагонистом  доксазозин.

Антагонист  α₁  адренорецепторов  доксазозин  сигнификантно  уменьшил  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина  на  третьем  часу  при  тестований  «горячая  плита»  и  анальгезиметр.  Полученные  данные  потверждают  результаты  этих,  а  также  и  других  авторов  о  роли  α₁  рецепторов  в  механизме  индуцированной  антидепресантами  анальгезии.  Otsuka  и  соавт.  установили  что  антагонист  α₁  адренорецепторов  празозин  ингибирует  антиноцицептивный  эффект  трициклических  антидепрессантов  имипрамин  и  дезипрамин  при  тесте  «горячая  плита»  [5].

В  спинном  мозге  норадреналин  освобожденный  нисходящими  путями  усиливает  освобождение  ингибиторных  невротрансмитеров  в  субстанции  желатинозной  путем  активирования  пресинаптических  α₁  рецепторов.  Установлено,  что  эти  рецепторы  локализируются  соматодендритно  или  поверх  терминалов  ингибиторных  интерневронов,  в  частности  ГАМК-эргичних  [2,  3].  Так  как  они  упражняют  возбуждающее  воздействие,  следствие  увеличено  освобождение  ГАМК  и  вероятно  глицина.  Они  приводят  к  мембранной  гиперполяризации  и  ингибиторному  эффекту.  Вместе  с  тем  через  пресинаптические  α₂  рецепторы  норадреналин  ингибирует  освобождение  глутамата  от  Аδ  и  С  фибрах  [4].  Постсинаптически  локализированные  в  спинальном  заднем  роге  α₁  рецепторы  ведут  к  деполяризации,  а  постсинаптические  α₂  рецепторы  к  гиперполяризации  [7].  Полученные  нами  данные  показывают,  что  спинальные  пресинаптические  α₁  рецепторы  играют  роль  в  механизме  антиноцицептивного  действия  кломипрамина.

В  абдоминальном  констрикторном  тесте  доксазозин  не  изменил  сигнификантный  антиноцицептивный  эффект  кломипрамина.  Полученные  данные  показывают,  что  α₁  адренорецепторы  не  принимают  участие  в  механизме  этого  эффекта  при  химическом  стимуле  боли  и  висцеральной  боли.

Выводы

1.  Кломипрамин  обладает  анальгетической  активностью  в  использованных  ноцицептивных  тестов.

2.  α₁  адренергичные  рецепторы  играют  роль  в  механизме  антиноцицептивного  действия  кломипрамина  относительно  теплового  и  механического  стимула  боли,  что  не  касается  химического  стимула  боли. 

Список  литературы:

1.Ageel  AM.  Effects  of  desipramine  and  chlorimipramine  on  buprenorphine  analgesia  in  mice.  Jpn  J  Pharmacol.  1986;  Vol.  41(2).  P.  139—145.

2.Baba  H,  Goldstein  PA,  Okamoto  M,  Kohno  T,  Ataka  T,  Yoshimura  M,  et  al.  Norepinephrine  facilitates  inhibitory  transmission  in  substantia  gelatinosa  of  adult  rat  spinal  cord  (part  2):  effects  on  somatodendritic  sites  of  GABAergic  neurons.  Anesthesiology.  2000;  Vol.  92.  P.  485—492.

3.Baba  H,  Shimoji  K,  Yoshimura  M.  Norepinephrine  facilitates  inhibitory  transmission  in  substantia  gelatinosa  of  adult  rat  spinal  cord  (part  1):  effects  on  axon  terminals  of  GABAergic  and  glycinergic  neurons.  Anesthesiology.  2000;  Vol.  92.  P.  473—484. 

4.Kawasaki  Y,  Kumamoto  E,  Furue  H,  Yoshimura  M.  Alpha  2  adrenoceptor-mediated  presynaptic  inhibition  of  primary  afferent  glutamatergic  transmission  in  rat  substantia  gelatinosa  neurons.  Anesthesiology.  2003;  Vol.  98.  P.  682—689.

5.Otsuka  N,  Kiuchi  Y,  Yokogawa  F,  Masuda  Y,  Oguchi  K,  Hosoyamada  A  Antinociceptive  efficacy  of  antidepressants:  assessment  of  five  antidepressants  and  four  monoamine  receptors  in  rats.  J  Anesth.  2001;  Vol.  15(3).  P.  154—158.

6.Rojas-Corrales  MO,  Casas  J,  Moreno-Brea  MR,  Gibert-Rahola  J  et  al.  Antinociceptive  effects  of  tricyclic  antidepressants  and  their  noradrenergic  metabolites.  Eur  Neuropsychopharmacol  2003;  Vol.  13(5).  P.  355—363.

7.Yoshimura  M,  Furue  H.  Mechanisms  for  the  anti-nociceptive  actions  of  the  descending  noradrenergic  and  serotonergic  systems  in  the  spinal  cord.  J  Pharmacol  Sci.  2006;  Vol.  101(2).  P.  107—117.