УФ-СПЕКТРОМЕТРИЯ  В  КОЛИЧЕСТВЕННОМ  ОПРЕДЕЛЕНИИ  ФИТИНА

Пенчева  Иванка  Димитрова

доцент,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет,

г.  София,  Болгария

Обрешкова  Данка  Петрова

профессор,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет

г.  София,  Болгария

Пейкова  Лили  Пламенова

ассистент,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет

г.  София,  Болгария

Папанов  Стоян  Илиев

ассистент,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет  г.  Пловдив,  Болгария

Петкова  Екатерина  Георгиева

доцент,  Медицинский  колледж,  Медицинский  университет  г.  Пловдив,  Болгария

E-mail: 

Иванов  Калин  Валентинов

ассистент,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет

г.  Пловдив,  Болгария

Петров  Георги  Йорданов

ассистент,  Фармацевтический  факультет,  Медицинский  университет

г.  Пловдив,  Болгария

Трайкова  Николета  Иванова

доцент,  Медицинский  колледж,  Медицинский  университет

г.  Пловдив,  Болгария

Божкова  Мария  Кръстева

ст.преп.,  Медицинский  колледж,  Медицинский  университет

г.  Пловдив,  Болгария

UV  SPECTROMETRIC  METHODS  QUANTITATIVE  CHARACTERIZATION  OF  FITIN

Penchev  Ivanka  Dimitrova

Associate  Professor  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Sofia,  Bulgaria

Obreshkova  Danka  Petrova

Professor  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Sofia,  Bulgaria

Peykova  Lily  Plamenova

Assistant  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Sofia,  Bulgaria

Papanov  Stoyan  Iliev

Assistant  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Petkova  Ekaterina  Georgieva

Associate  Professor,  College  of  Medicine  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

E-mail: 

Kalin  Ivanov  Valentine

Assistant  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Petrov  Georgi  Yordanov

Assistant  Faculty  of  Pharmacy,  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Traykova  Nikoleta  Ivanova

Associate  Professor,  College  of  Medicine  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

Bozhkova  Maria  Krasteva

Senior  Lecturer.,  College  of  Medicine  Medical  University,  Plovdiv,  Bulgaria

АННОТАЦИЯ

Фитин  (калциево-магниевая  соль  фитиновой  кислоты),  растительный  материал,  получаемый  из  семян  житных,  бобовых  растений.  Открываются  новые  фармакологические  свойства  фитина,  что  делает  продукт  привлекательным.

Фитин,  фитиновая  кислота  и  инозитол  входят  в  составе  большой  группы  медикаментов.  Настоящая  разработка  раскрывает  результаты  из  УФ-спектрометрического  метода  для  количественного  исследования  фитина  в  чистом  материале. 

Фитин  G  сделан  в  Германии  на  чистом  материале,  фитин  S  сделан  в  России.

ABSTRACT

Fitin  (calcium-magnesium  salt  fitin  acid).

This  plant  material  is  pull  out  of  the  wheat  seeds,  beans  plants.  This  open  a  new  pharmacological  properties,  which  make  the  product  relevant.

The  Fitin  acid  and  the  inositol  are  composed  of  a  big  group  of  medicines.

The  present  developments  reveal  the  results  of  UV  spectrometric  methods  for  quantitative  analysis  of  clear  Fitin  material.

Fitin  G  is  made  in  Germany  and  the  clear  material  of  Fitin  S  is  made  in  Russia.

Ключевые  слова:  Фитин,  УФ-спектральные  методы.

Keywords:  Fitin,  UV  spectral  methods.

Введение.  Фитин  —  белый  аморфный  порошок  без  вкуса  и  запаха.  Он  нерастворим  в  воде,  в  минеральных,  а  также  в  органических  кислотах.

Одна  часть  фитина  растворяется  в  10  частях  соляной  кислоты. 

Наблюдения  УФ-спектрального  метода  для  количественного  определения  фитина.

Материалы  и  аппаратура.

1.  исходные  вещества

·     Чистая  субстанция  Фитин  (G),  производитель  —  Германия,  серия:  69324.

·     Чистая  субстанция  Фитин  (S),  производитель  —  Россия,  серия:  21832.

2.  Реактивы

·     Соляная  кислота  (1M  HCl).

3.  Аппаратура:

UV-VIS  спектрометр  НР8452А.

Спектрометр  содержит  следые  элементов:

·     источник  света  —  дейтериевая  ламп,

·     входная  и  выходная  щель 

·     устройство  для  дисперсий  —  голографическая  дисперсная  решетка,

·     кювета  для  исследуемого  раствора,

·     детектор-фотодиод.

Принцип  действия  построен  на  базе  матричного  фотодиода,  при  котором  находятся  300  детекторных  элементов  разположенные  в  области  18х0,5  mm.  Разогнаный  решетки  дисперсии  свет  падает  на  фотодиод  сквозь  в  2  nm  в  интервале  200—800  nm  т.  е.  в  целого  UV-VIS  интервала.  Полихроматичный  свет  проходит  сквозь  кюветы  и  потом  разлагается.  Так  целый  UV-VIS  спектр  попадает  на  детекторе.  Абсорбционная  кривая  изображается  на  экране. 

Матричный  фотодиод  подает  информацию  мгновенно  (~0,1  сек),  что  позволяет  повторить  исследования  и  измерение  более  50  раз  за  5  секунд,  а  это  гарантия  точных  результатов  [1,  3].

Подготовка  растворов  для  анализа  чистого  вещества  Phytin  (G)  производства  Германии. 

Приготовления  раствора  A  (G)  фитина  в  концентрации  C_A  =  0,001  g/ml.

Исходящая  субстанция  фитина  измеряется  измерительным  стеклом  с  помощью  аналитической  шкалы  (аналитические  весы).  Точное  количество  из  субстанций  (0,1003  g)  растворяется  в  части  из  растворителя  (1М  HCl),  потом  фильтруется  в  колбе  100  ml.  Прибавляется  вода  до  отметки  (Cg  =  0,001  g/ml).  Получается  исходный  раствор  A(G).  С  помощью  параллельного  разбавления  приготовляются  растворы  с  разными  концентрациями. 

Приготовление  раствора  B(G)  фитина  с  концентрацией  C_B=0,.0005  g/ml.

Из  исходного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  25  ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl. 

Приготовление  раствора  D(G)  фитина  с  концентрацией  C_D=0,0001  g/ml

Из  исходного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  10ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1МHCl.

Приготовление  раствора  E(G)  фитина  с  концентрацией  C_E=0,00005  g/ml

Из  исходного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  5  ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в1MHCl.

Приготовление  раствора  F(G)  фитина  с  концентрацией  C_F=0,00001  g/ml

Из  полученного  раствора  с  помощью  питетки  тип  резила  1  ml  переносится  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl.

Приготовления  раствора  для  анализа  из  чистой  субстанций  Phytin  (S)  производства  России.

Приготовление  раствора  A(S)  фитина  с  концентрацией  C_A=0,001  g/ml.

Исходящая  субстанция  фитина  измеряется  измерительным  стеклом  с  помощю  аналитической  шкалы  (аналитические  весы).  Точное  количество  из  субстанций  (0,1005  g)  растворяется  в  1  MHCl  в  измерительной  колбе  100  ml.  Прибавляется  вода  до  мерки  C_A=0,001  g/ml.  Из  полученного  исходного  раствора  с  помощью  параллельного  разбавления  получаем  растворы  с  разными  концентрациями.

Приготовление  раствора  B(S)  фитина  с  концентрацией  C_B=0,0005  g/ml.

Из  исходного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  50  ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl

Приготовление  раствора  C(S)  фитина  с  концентрацией  C_C=0,00025  g/ml

Из  полученного  раствора  фитина  с  помощью  пипетки  тип  резила  25  ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl.

Приготовление  раствора  D(S)  фитина  с  концентрацией  C_D=0,0001  g/ml

Из  полученного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  10  ml  переносятся  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl.

Приготовление  раствора  E(S)  фитина  с  концентрацией  C_E=0,00005  g/ml

Из  полученного  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  5ml  переносятся  в  измерительную  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl.

Приготовление  раствора  F(S)  фитина  с  концентрацией  C_F=0,00001  g/ml. 

Из  готового  раствора  с  помощью  пипетки  тип  резила  1  ml  переносится  в  колбу  100  ml.  Колба  доливается  до  мерки  в  1  MHCl.

Сущность  метода.  Обработка  результатов

Метод  основан  на  последовательном  измерении  абсорбций  полученных  растворов  Phytin  (G)  и  Phytin  (S)  через  UV-VIS  спектрометр  НР8452А.

Для  стандартной  пробы  (компенсация)  используется  1  MHCl.  На  базе  результатов  определяется  объединенными  параметрами,  необходимыми  для  достоверности  метода:

Повторяемость.  этот  параметр  показывает  степени  совпадения  результатов,  которые  получаются  при  измерении  одной  и  тоже  величины  (в  случае  абсорбция)  исследования,  осуществляется  в  одинаковых  условиях  за  коротких  промежуток  времени.  Для  достоверности  используются  шесть  измерений.

Повторяемость  характеризуется  Relative  Standard  Deviation  (RDS)  или  стандартным  отклонением  в  процентах  [2,  4].

,

где:  SD  —  standard  deviation  (стандартное  отклонение);

n  —  число  исследования

Повторяемость  меньше  или  равная  10  %  считается  нормальной.

Таблица  1  демонстрирует  результаты  исследования  аналитического  параметра  (повторяемость)  для  чистого  Phytin  (G)  с  концентрацией  C=0,001  g/ml.  Измерение  проводилось  при  волне  длиной  λ=208  nm  и  при  температура  20⁰С. 

Таблица  1. 

Исследование  аналитичного  параметра  «повторяемость»  для  Phytin  (G)

Линейность.  Это  диапазон,  в  котором  результат  представленый  детектором  остается  линейно  зависимым  от  величины  вложенного  компонента.  Если  это  отношение  сохраняется  с  изменением  количества  вещества,  система  находится  в  своей  линейной  области.

Линейность  метода  является  исследованной  как  зависимость  между  абсорбцией  и  концентрацией  согласно  закону  Буге-Ламберта-Беера  [5]. 

Из  полученных  абсорбцией  приготовленных  растворов  с  пониженными  концентрациями  (Табл.  2  и  Табл.  3)  и  при  длина  волны  абсорбционного  максимума  208  nm  построена  графическая  зависимость  абсорбции  из  концентрации  —  рис.  2  (для  Фитин  G)  и  рис.  3  (для  Фитин  S).

Линейная  область  правы  (рис.  1  и  рис.  2)  определяет  интервал,  в  котором  действует  закон  Буге-Ламберта-Беера.

Таблица  2.

Исследования  аналитического  параметра  «линейность»  для  Phytin  (G)

Рисунок  1.  Зависимость  абсорбций  от  концентрации  раствора  Phytin  (G)

Таблица  3. 

Исследования  аналитического  параметра  «линейность»  Phytin  (S)

Рисунок  2.  Зависимость  абсорбций  от  концентрации  раствора  Phytin  (S)

После  (Потом)  линейной  регрессии  получаем  регрессную  праву  (рис.  3)  и  (рис.  4),  а  ее  математическая  зависимость  имеет  вид:

у  =  ах  ±  Ь

Регрессное  уравнение  —  это  аналитическая  зависимость  концентрации  из  абсорбций. 

Степень  зависимости  двух  переменных  выражается  корреляционным  коэфициентом  “r”  и  мерой  определенности  R².  Как  видно  из  рисунков,  R  корреляционной  коэффициент  Phytin  (G)  е  r  =  0,9821  с  линейной  зависимостью  С  и  f(С)  98  %,  а  за  Phytin  (S)  е  r  =  0,9937  с  линейной  зависимостью  С  и  f(С)  99  %. 

Рисунок  3.  Зависимость  абсорбций  от  концентрации  после  линейной  регрессии

Рисунок  4.  Зависимость  абсорбции  от  концентраций  после  линейной  регрессии

Устойчивость.  Аналитический  параметр,  который  поддерживает  качество  системы  сохранить  свой  метрологический  характер  устойчивым  в  течение  времени.

Метрологический  характер  —  это  зависимость  абсорбции  от  изменения  кислотности,  изменения  температуры  системы  или  света,  сезонов,  высоты.

Устойчивость  характеризуется  с  RDS  (%).

Мы  исследовали  аналитический  параметр  «Устойчивость»  чистого  вещества  Phytin  (G)  и  Phytin  (S)  с  концентрацией  С  =  0,001g/ml  по  отношению  к  изменению  температуры  системы.  Определили  тоже  и  абсорбции  проб  (Табл.  5)  и  (Табл.6)  после  предварительного  нагревания  проб  до  20,  25,  30,  50,  70,  100⁰С.

Таблица  4. 

Исследования  аналитического  параметра  «устойчивость»  для  Phytin  (G)

Рисунок  5  Зависимость  абсорбции  от  изменения  температуры  в  системе  для  Рhytin  (G)

Таблица5. 

Исследования  аналитического  параметра  «устойчивость»  для  Phytin  (S)

Рисунок  6.  Зависимость  абсорбции  от  изменения  температуры  в  системе  для  Phytin(S)

Как  видно,  относительное  стандартное  отклонение  (RSD)  в  двух  случаях  ниже  0,5  %.  Устойчивость  системы  в  зависимости  от  температуры  остает  постоянной  во  время. 

Рис.  5  и  Рис.  6  раскрывают  графическую  зависимость  абсорбции  от  температуры.

Список  литературы:

1.Аврамова  П.,  Г.  Георгиев,  Й.  Йовчев,  К.  Йорданова,  О.  Лазанова-Йовчева,  Е.  Найденова,  М.  Христов.  Ръководство  за  практически  упражнения  по  фарм.  Анализ,  МФ,  София,  1996.  —  С.  36—42.

2.Димов  Н.,  Хроматографиите  във  фармацевтичния  анализ,  НИХФИ,  1999.  —  С.  22—46.

3.Крисчън  Г.,  Д.  О`Рейли.  Инструментален  анализ,  Университетско  издателство  «Св.  Климент  Охридски»,  1998.  —  С.  13—22.

4.Watson  D.,  Pharmaceutical  analisys.  —  Edinburg  —  Toronto,  2005.  —  С.  45—48.

5.Winfield  A.  et  al,  Pharmatical  practice.  —  Edinburg-Toronto,  2004.  —  С.  60—65.