ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНА VEGF У ЖЕНЩИН С ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ
ЗАБОЛЕВАНИЯМИ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ

Четвериков Сергей Геннадиевич

д-р мед. наук, профессор ОНМедУ,

г. Одесса

Заволока Александр Васильевич

ассистент ОНМедУ,

 г. Одесса

E-mail: zavoloka977@gmail.com

Морозюк Ольга Николаевна

зав. молекулярно-генетической лабораторией Клиники ОНМедУ, г. Одесса

По данным ВОЗ раком молочной железы (РМЖ) ежегодно заболевает около 750 тыс. женщин и именно это заболевание является главной причиной смерти женщин в возрасте от 40 до 55 лет. В Украине каждая женщина, заболевшая РМЖ, в среднем теряет 17—18 летжизни, что составляет 53 % от DALY [7—9]. По мнению большинства исследователей, адекватная оценка степени распространения опухолевого процесса, прогноза течения заболевания является одним из путей повышения эффективности лечения РМЖ [6, 9]. Точное определение стадии РМЖ позволяет адекватно и наиболее эффективно планировать лечебные мероприятия и индивидуальный прогноз. Однако, существенное прогностическое значение имеют и другие факторы, в том числе генетические [5, 6]. С их помощью возможно не только определение индивидуального риска, но и прогноз ответа на лечение. С другой стороны, не исключено наличие соответствующих генетических маркеров ангиогенеза и пролиферации как у здоровых женщин, так и у женщин с доброкачественными новообразованиями молочной железы [1, 10]. В связи с этим значительный интерес представляет вопрос оценки целесообразности применения инструментов генетического скрининга для нужд ранней диагностики и прогнозирования РМЖ у женщин группы риска.

Целью работы была оценка распространенности однонуклео­тидных полиморфизмов гена VEGF у больных со злокачественными и доброкачественными опухолями молочной железы. Ген VEGF находится в 6 хромосоме в области 6p21.3 и состоит из восьми экзонов, разделенных семью интронами, подлежащих альтерна­тивному сплайсингу и контролирует синтез целой группы белков. Экспрессия гена VEGF модулируется различными факторами, в частности цитокинами, липополисахаридами, гормонами и гипоксией. Экспрессия VEGF весьма вариативна, описано не менее 25 различных полиморфизмов, которые ее определяют, однако наибольшее значение в детерминации риска возникновения опухолевого процесса имеет полиморфизм C634G.

Исследование проведено на базе Центра реконструктивной и восстановительной медицины (Университетская клиника) Одесского национального медицинского университета в течение 2010—2012 гг. Обследовано 143 женщины, в том числе 37 — с морфологически верифицированным РМЖ (I группа), 56 — с доброкачественными опухолями молочной железы (ДОМЖ — II группа) и 50 — здоровых женщин (III, контрольная, группа). Больным I группы было проведено оперативное лечение в радикальном объеме соответственно стадии РМЖ, больным II группы была проведена секторальная резекция с удалением ДОМЖ в пределах здоровых тканей. Средний возраст обследованных женщин составил 38,4 ± 1,2 лет, статистически значимых различий между клиническими группами по возрасту и анамнестическим особенностям обнаружено не было.

Генотипирование VEGF проведено с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим рестрикционным анализом. Праймеры VEGF +634 полиморфизма содержали следующие секвенсные последовательности 5 'ATTTATTTTTGCTTGCCATT 3' и 5 'GTCTGTCTGTCTGTCCGTCA 3'. Статистический анализ проводили с помощью программы Statistica 8.0 (StatSoft Inc., США). Распределение генотипов и частота аллелей сравнивались с исполь­зованием χ2 теста. Соответствие распределения генотипов уравнению Харди-Вайнберга призналась с помощью он-лайн калькулятора (http://www.genes.org.uk/software/hardy-weinberg.shtml). Различия между группами принимались значимыми при p <0,05.

При оценке соответствия распределения частот различных генотипов (табл. 1), определенных в данном исследовании установлена в группе женщин с РМЖ распространение гомозиготных и гетеро­зиготных генотипов не соответствует уравнению Харди-Вайнберга (χ2 = 26,89 p <0,001), тогда как в группе женщин с ДОМЖ и контрольной группе они находятся в соответствии с данного уравнения (χ2 = 0,08 и χ2 = 0,05, соответственно). Из приведенной таблицы видно, что наличие делеционного аллеля СGполиморфизма C634G гена VEGF увеличивает вероятность возникновения РМЖ в 9,3 раза (ОШ = 9,26 ДИ 95 %: 3,78; 22,67). При наличии гомозиготного состояния GGполиморфизма C634G по данному гену риск возникновения злокачественного новообразования увеличивается почти в 38,6 раза (ОШ = 38,56 ДИ 95 %: 0,69; 2615,11). При этом наличие мутантного аллеля в гетерозиготном состоянии практически не влияла на экспрессию VEGF в периферической крови.

Таблица 1.

Распределение частот различных генотипов

Данные проведенного исследования свидетельствуют о том, что для диагностических потребностей целесообразно применять молекулярно-генетические методы исследования. Выявление патоло­гически отягощенных аллелей гена VEGF является прогностически неблагоприятным фактором как при гомозиготном генотипе, так и при гетерозиготном, что позволяет применять молекулярно-генетические технологии на этапах планирования лечения больных с доброкачественными узловыми новообразованиями молочной железы и динамического наблюдения за группой риска по возникновению РМЖ. Данное исследование можно использовать как дополнительный критерий, определяющий необходимость проведения оперативного лечения больных с ДОМЖ. Целесообразно проведение дальнейших исследований роли генетической детерминации образование опухолей с определением экспрессии генов ангиогенеза и пролиферации в биологических образцах тканей, полученных при биопсии.

Список литературы:

1. Генетическая медицина. / В.Н. Запорожан, В.А. Кордюм, Ю.И. Бажора [и др.] Одесса: Одесский государственный медицинский университет, 2008. — 432 с.
2. Злоякісні новоутворення молочної залози. /у звіті «Рак в Україні, 2009 — 2010. Захворюваність, смертність, показники діяльності онкологічної служби. // Бюлетень національного канцер-реєстру України. Вид. № 12 К., 2011 [Електронний ресурс]. — Режим доступа. — URL: http://www.ucr.gs.com.ua/dovida9/PDF/55-56-mol.pdf.
3. Кучкина Л.П.. Клинико-эпидемиологические аспекты и метаболические особенности у больных раком молочной железы и узловой формой фиброзно-кистозной мастопатии: диссертация кандидата медицинских наук : 14.00.14 / Кучкина Людмила Петровна; — Ростов-н/Д., 2008. — 145 с.
4. Онкологія. Вибрані лекції для студентів і лікарів/ За ред. В.Ф. Чехуна. — К.: Здоров'я України, 2010. — 770 с.
5. Семиглазов В.Ф. Стратегические и практические подходы к решению проблемы рака молочной железы. / В.Ф. Семиглазов // Вопросы онкологии. — 2012 — Vol. 58(2) — P. 148—152.
6. Boudreau A. An "elite hacker": Breast tumors exploit the normal microenvironment program to instruct their progression and biological diversity. / A. Boudreau, L.J. van 't Veer, M.J. Bissell // Cell Adh Migr. — 2012 — Vol. 6(3) — P. 236—248.
7. Giess CS. Distinguishing breast skin lesions from superficial breast parenchymal lesions: diagnostic criteria, imaging characteristics, and pitfalls. / CS Giess, S Raza, RL. Birdwell// Radiographics. — 2011 — Vol. 31(7) —P. 1959—1972.
8. Lack of Association Between LIG4 Gene Polymorphisms and the Risk of Breast Cancer: A HuGE Review and Meta-analysis. / L.P. Zhou, H. Luan, X.H. Dong [et al.] // Asian Pac J Cancer Prev. — 2012 — Vol. 13(7) — P. 3417—3422.
9. Predictive value of BI-RADS classification for breast imaging in women under age 50. / G. Kennedy, M. Markert, J.R. Alexander, E. Avisar // Breast Cancer Res Treat. — 2011 — Vol. 130(3) — P. 819—823.
10. Puliti D. Breast cancer screening: are we seeing the benefit? / Puliti D, Zappa M. // BMC Med. — 2012 — Vol. 10 — P. 106.
11. Stegeman I, Bossuyt P.M. Cancer risk models and preselection for screening. / Stegeman I, Bossuyt P.M. // Cancer Epidemiol. — 2012 — Vol. 36(5) — P. 461—469.