ИЗУЧЕНИЕ  ИММУНОТРОПНОГО  ДЕЙСТВИЯ  НОВОГО  ПРОИЗВОДНОГО  ПИРИМИДИНАВ  АСПЕКТЕ  «ДОЗА-ЭФФЕКТ»

Цибизова  Александра  Александровна

старший  преподаватель  кафедры  фармакогнозии,  фармацевтической  технологии  и  биотехнологии,

Астраханский  государственный  медицинский  университет,

РФ,  г.  Астрахань

E-mail:  sasha3633@yandex.ru

Самотруева  Марина  Александровна

д-р  мед.  наук,  зав.  кафедрой  фармакогнозии,  фармацевтической  технологии  и  биотехнологии,

Астраханский  государственный  медицинский  университет,

РФ,  г.  Астрахань

E-mail:  ms1506@mail.ru

Тюренков  Иван  Николаевич

д-р  мед.  наук,  профессор,  чл.-корр.  РАН,  зав.  кафедрой  фармакологии  и  биофармации  ФУВ,

Волгоградский  государственный  медицинский  университет,

РФ,  г.  Волгоград,

E-mail:  fibfuv@mail.ru

Озеров  Александр  Александрович

д-р  хим.  наук,  профессор,  зав.  кафедрой  фармацевтической  химии  и  токсикологической  химии,

Волгоградский  государственный  медицинский  университет,

РФ,  г.  Волгоград,

E-mail:  post@volgmed.ru

Глухова  Елена  Григорьевна

младший  научный  сотрудник  НИИ  фармакологии,

Волгоградский  государственный  медицинский  университет,

РФ,  г.  Волгоград,

E-mail:  post@volgmed.ru

THE  STUDY  OF  IMMUNOTROPIC  ACTION  A  NEW  PYRIMIDINE  DERIVATIVE  IN  THE  ASPECT  OF  "DOSE-EFFECT"

Аleksandra  Tsibizova

senior  teacher  of  the  Department  of  pharmacognosy,  pharmaceutical  technology  and  biotechnology,

«Astrakhan  state  medical  university», 
Russia,  Astrakhan

Marina  Samotrueva

doctor  of  Medicine,  Head  of  the  Department  of  pharmacognosy,  pharmaceutical  technology  and  biotechnology,

«Astrakhan  state  medical  university», 
Russia,  Astrakhan

Ivan  Tyurenkov

doctor  of  Medicine,  professor,  Corresponding  Member  of  the  RAMS,  Head  of  the  Department  of  pharmacology  and  biopharmacy  Faculty  of  Advanced  Medical,  “Volgograd  state  medical  university”, 
Russia,  Volgograd

Aleksandr  Ozerov

doctor  of  Chemical  Sciences,  professor,  Head  of  the  Department  of  pharmaceutical  and  toxicological  chemistry, 
“Volgograd  state  medical  university”, 
Russia,  Volgograd

Elena  Glukhova

junior  researcher  of  Research  institute  of  pharmacology,

“Volgograd  state  medical  university”, 
Russia,  Volgograd

АННОТАЦИЯ

Показана  иммунотропная  активность  нового  производного  пиримидина  под  лабораторным  шифром  «ВMA–13–03».  Приведены  результаты  исследования  зависимости  иммунотропных  свойств  нового  соединения  в  аспекте  «доза-эффект».  Установлено,  что  новое  соединение  «ВMA–13–03»  в  дозах  31  мг/кг  и  62  мг/кг  способно  восстанавливать  нарушенные  циклофосфамидом  процессы  пролиферации  клеток  иммунокомпетентных  органов.

ABSTRACT

Shown  immunotropic  activity  of  a  new  pyrimidine  derivative  under  laboratory  code  «ВMA–13–03».The  results  of  the  study  of  the  immunotropic  properties  of  the  new  connection  in  the  aspect  of  “dose-effect”.  It  is  found  that  the  new  compound  "VMA-13-03"  in  doses  of  31  mg/kg  and  62  mg/kg  of  cyclophosphamide  is  able  to  restore  the  disturbed  during  cell  proliferation  of  immunocompetent  organs.

Ключевые  слова:  производные  пиримидина;  иммунотропная  активность,  циклофосфамид;  иммунодепрессия.

Keywords:  pyrimidine  derivatives;  immunotropic  activity;  cyclophosphamide;  immunodepression.

Иммунная  система,  являясь  наиболее  чувствительной  к  действию  как  внешних,  так  и  внутренних  факторов  из  всех  функциональных  систем,  вовлечена  во  все  физиологические  и  патофизиологические  процессы,  происходящие  в  организме  человека  [4,  с.  85].  Воздействие  различных  патологических  факторов  влечет  за  собой  появление  специфических  иммунологических  сдвигов,  роль  которых  может  быть  различной:  этиопатогенетической,  приводящей  к  развитию  иммунодепрессии  или  аутоиммунных  нарушений;  отягощающей,  влекущей  за  собой  усугубление  течения  патологического  процесса;  сопутствующей,  способной  привести  к  ухудшению  результатов  лечения  [1,  с.  75].В  связи  с  чем,отмечается  повышенный  интерес  к  иммунотропным  препаратам  не  только  в  лечении  разнообразных  иммунодефицитных  состояний,  но  и  в  терапии  инфекционных,  аутоиммунных,  онкологических,  соматических  и  других  заболеваний  [2,  с.  57;3,  с.  132;  9,  с.  13].

В  последние  годы  проводится  интенсивное  изучение  природных  нуклеотидов  и  нуклеозидов,  обладающих  широким  диапазоном  биологических  эффектов.  В  настоящее  время  известны  разнообразные  физиологические  и  патофизиологические  функции  нуклеотидов,  проявляющих  как  краткосрочные  (индукция  секреции  нейро-  и  иммуномодуляторов),  так  и  долгосрочные  (индукция  пролиферации  и  дифференцировки  клеток,  а  также  регуляция  апоптоза  и  процессов  регенерации)  [6,  с.  136;  10,  с.  274;  12,  с.  14]

Наибольший  интерес  вызывают  производные  природных  нуклеотидов  пиримидинового  ряда,  обладающие  широким  спектром  фармакологического  действия:  противомикробным,  противовирусным,  противовоспалительным,  противоопухолевым,  регенераторным  и  др.  [5].  К  числу  пиримидинов,  обладающих  иммунотропными  свойствами,  относится  общеизвестный  препарат  —  метилурацил,  оказывающий  стимулирующее  влияние  на  процессы  регенерации  тканей,  лейкопоэз  и  антителообразование  [5,  с.  117].  В  настоящее  время  совместная  работа  ученых  Волгоградского  государственного  медицинского  университета  и  Астраханского  государственного  медицинского  университета  направлена  на  исследование  иммунотропных  свойств  новых  производных  пиримидина  [11,  с.  71].

Целью  настоящего  исследования  явилось  изучение  дозозависимости  иммунотропных  свойств  соединения  под  лабораторным  шифром  «ВMA–13–03»  в  норме  и  в  условиях  «циклофосфамидной»  иммунодепрессии.

МЕТОДИКА  ИССЛЕДОВАНИЯ.  Исследования  проведены  на  мышах  обоего  пола  3—4  мес.  возраста  линии  СВА.  Содержание  животных  соответствовало  правилам  лабораторной  практики  при  проведении  доклинических  исследований  в  РФ  (ГОСТ  З  51000.3-96  и  51000.4-96)  и  Приказу  Министерства  здравоохранения  и  социального  развития  Российской  Федерации  от  23  августа  2010  г.  №  708-н  «Об  утверждении  правил  лабораторной  практики»  (GLP)  с  соблюдением  Международных  рекомендаций  Европейской  конвенции  по  защите  позвоночных  животных,  используемых  при  экспериментальных  исследованиях  (1997  г.)  [7].

Животные  были  разделены  на  группы  (n=9-10):  контроль  Iпредставленживотными,  получавшимиэквиобъем  дистиллированной  воды;  контролемII  служили  мыши,  получавшие  циклофосфамид  (в  дозе  100  мг/кг,  внутрибрюшинно,  однократно);  опытные  животные,  которые  в  течение  3-х  дней  получали  внутрибрюшинно  производное  пиримидина  «ВMA–13–03»  в  дозах  15,5  мг/кг  (опыт  №  1),  31  мг/кг  (опыт  №  2),  62  мг/кг  (опыт  №  3)  и  124  мг/кг  (опыт  №  4);  опытные  группы  животных  №  5—8  получали  на  фоне  введения  циклофосфамида  изучаемое  производное  пиримидина  в  дозах  15,5  мг/кг,  31  мг/кг,  62  мг/кг  и  124  мг/кг  соответственно.

О  наличии  иммунотропной  активности  нового  производного  пиримидина  «ВMA–13–03»  судили  по  изменениям  массы  и  клеточности  иммунокомпетентных  органов  (тимуса  и  селезенки)  [8,  с.  624]. 

Готовили  клеточные  суспензии  в  среде  199  из  расчета  для  селезенки  50  мг/мл,  для  тимуса  —  10  мг/мл,  фильтровали,  отмывали  двукратно  средой  199  от  частиц  жировой  ткани  (по  10  мин  при  1500  об/мин),  после  чего  ресуспендировали  в  среде  199  до  исходной  концентрации.  Суспензии  лимфоидных  органов  для  подсчета  предварительно  1:1  смешивали  с  3  %  уксусной  кислотой,  подкрашенной  метиленовой  синью,  и  подсчитывали  количество  ядросодержащих  клеток  (спленоцитов  и  тимоцитов)  в  камере  Горяева. 

Статистическая  обработка  данных  проводилась  с  использованием  программ  STATISTICA  6.0  и  электронных  таблиц  MS  Excel.  Результаты  были  обработаны  статистически  с  применением  t-критерия  Стьюдента  с  поправкой  Бонферрони.  Различия  между  сравниваемыми  параметрами  считали  статистически  значимыми  при  р<0,05.

Результаты  исследования.  Введение  исследуемого  вещества  под  лабораторным  шифром  «ВMA–13–03»  привело  к  дозозависимым  изменениям  пролиферативных  процессов  в  селезенке  и  тимусе.  Полученные  в  ходе  исследования  результаты  представлены  в  таблице.

Таблица  1.

Влияние  разных  доз  производного  пиримидина  «ВMA–13–03»  на  массу  и  клеточность  тимуса  и  селезенки

Примечание:*  —  p₁  ˂  0,05  —  уровень  значимости  различий  относительно  контроляI;  **  —  p₂  ˂  0,05  —  уровень  значимости  различий  относительно  контроля  II

Применение  экспериментальным  животным  «ВMA–13–03»  в  дозе  15,5  мг/кг  сопровождалось  увеличением  массы  селезенки  по  сравнению  с  контролем  более  чем  на  15  %  (p₁˃0,05),  а  массы  тимуса  —  всего  на  3  %  (p₁˃0,05).  Количество  тимоцитов  после  введения  изучаемого  вещества  в  указанной  дозе  увеличилось  по  сравнению  с  контролем  не  более  чем  на  10  %  (p₁˃0,05),  количество  спленоцитов  практически  не  изменилось. 

Введение  изучаемой  субстанции  в  дозе  31  мг/кг  способствовало  увеличению  массы  селезенки  на  16  %  (p₁˃0,05),  тимуса  —  на  22  %  (p₁˂0,05).  Увеличение  числа  тимоцитов  произошло  на  38  %  (p₁˃0,05)  по  сравнению  с  контролем,  тогда  как  количество  спленоцитов  снизилось  на  17  %  (p₁˃0,05).

При  введении  «ВMA–13–03»  в  дозе  62  мг/кг  наблюдалось  незначительное  увеличение  массы  селезенки  —  на  6  %  (p₁˃0,05),  масса  тимуса  практически  не  изменилась.  Количество  тимоцитов  увеличилось  на  27  %  (p₁˃0,05),  в  то  же  время  количество  клеток  селезенки  уменьшилось  на  7  %  (p₁˃0,05).

Следует  отметить,  что  под  влиянием  нового  производного  пиримидина  «ВMA–13–03»  при  введении  в  дозе  124  мг/кг  масса  тимуса  снизилась  более  чем  на  10  %  (p₁˃0,05),  тогда  как  масса  селезенки  практически  не  изменилась.  При  этом,  количество  спленоцитов  уменьшилось  на  40  %  (p₁˂0,05),  а  количество  клеток  тимуса  увеличилось  при  введении  изучаемого  вещества  практически  на  8  %.

Применение  циклофосфамида  привело  к  снижению  массы  селезенки  на  30  %  (p₁˃0,05)  и  количества  клеток  в  ней  практически  на  60  %  (p₁˂0,05).Кроме  того,отмечалось  уменьшение  массы  тимуса  на  15  %  (p₁˃0,05)  и  количества  клеток  органа  на  30  %  (p₁˂0,05). 

Применение  исследуемого  вещества  под  шифром  «ВMA–13–03»  на  фоне  «циклофосфамидной»  иммунодепрессии  сопровождалось  выраженными  изменениями  и  массы  и  клеточности  иммунокомпетентных  органов.

Введение  вещества  «ВMA–13–03»  в  дозе  15,5  мг/кг  приводило  к  увеличению  массы  селезенки  по  сравнению  с  контролем  II  более  чем  на  40  %  (p₂˃0,05),  а  массы  тимуса  —  на  8  %  (p₂˃0,05).  При  этом  количество  клеток  селезенки  и  тимуса  увеличиласьне  более  чем  на  10  %  (p₂˃0,05)  и  8  %  (p₂˃0,05).

Новое  производное  пиримидина  в  дозе  31  мг/кг  на  фоне  иммунодепрессии  привело  к  увеличению  массы  селезенки  на  42  %  (p₂˂0,05),  а  тимуса  —  на  32  %  (p₂˂0,05).  Увеличение  числа  спленоцитов,  по  отношению  к  контролю  II,  отмечалось  на  уровне  48  %  (p₂˂0,05),  количество  тимоцитов  изменилось  в  сторону  увеличения  более  чем  на  36  %  (p₂˃0,05).

Введение  «ВMA–13–03»  в  дозе  62  мг/кг  животным  с  экспериментальной  иммунодепрессией  также  привелок  увеличению  массы  иммунокомпетентных  органов:  селезенки  —  на  44  %  (p₂˂0,05),  а  тимуса  —  на  28  %  (p₂˂0,05).  Количество  спленоцитов  увеличилось  на  47  %  (p₂˂0,05).  Увеличение  клеток  тимуса  было  отмечено  более  чем  на  30  %  (p₂˃0,05).

На  фоне  введения  иммунодепрессированным  животным  «ВMA–13–03»  в  дозе  124  мг/кг  статистически  значимыми  были  лишь  изменения  массы  селезенки  (на  36,5  %  при  p₂˂0,05),  тогда  как  остальные  из  изучаемых  параметров  оставались  неизменными  (p₂˃0,05).

Приведенные  данные  позволяют  считать,  что  изучаемое  в  работе  новое  производное  пиримидина  под  лабораторным  шифром  «ВMA–13–03»  обладает  иммуномодулирующими  свойствами  и  наиболее  выраженную  активность  соединение  проявляет  в  дозах  31  мг/кг  и  62  мг/кг.  Следует  отметить,  что  по  мере  увеличения  применяемой  дозы  «ВMA–13–03»  наблюдается  либо  угнетение  пролиферативных  процессов,  либо  отсутствие  иммунокорригирующего  влияния.  На  основании  вышесказанного  установленная  в  ходе  данного  исследования  дозозависимость  иммунотропного  эффекта  «ВMA–13–03»  указывает  на  необходимость  дальнейшего  углубленного  изучения  данного  химического  соединения.

Список  литературы:

1. Афиногенова  В.П.,  Лукачев  И.В.,  Костинов  М.П.  Иммунотерапия:  механизм  действия  и  клиническое  применение  иммунокорригирующих  препаратов  //  Лечащий  врач.  —  2010.  —  №  4.  —  С.  75—78.
2. Долгушина  И.И.,  Селянина  Г.А.,  Шалашова  М.А.,  Колесникова  А.А.,  Додонов  Н.П.,  Колесников  О.Л.  Оценка  воздействия  иммунной  недостаточности  на  психологический  статус  пациентов  //Иммунология  Урала.  —  2006.  —  №  1(5).  —  С.  57—58. 
3. Золотарёва  Т.А.,  Змиевский  А.В.,  Насибуллин  Б.А.,  Ярошенко  Н.А.  Современные  представления  о  механизме  стресс-обусловленной  дисфункции  клеток  иммунного  ответа  //  Мир  медицины  и  биологии.  —  2011.  —  №  4.  —  С.  132—133.
4. Инжутова  А.И.,  Ларионов  А.А.,  Салмина  А.Б.  и  др.  Молекулярно-клеточные  механизмы  эндотелиальной  дисфункции  различного  генеза  //  Сибирский  медицинский  журнал.  —  2010.  —  №  5.  —  С.  85—88.
5. Макляков  Ю.С.,  Иванова  Е.В.,  Овчар  С.А.,  Батурин  А.Л.  Новые  пиримидины  —  стимуляторы  регенерации  //  Биомедицина.  —  2006.  —  №  2.  —  С.  117—121.
6. Мышкин  В.А.,  Бакиров  А.Б.  Оксиметилурацил  (очерки  экспериментальной  фармакологии).  —  Уфа:  ДАР,  2001.  —  218  с.
7. Приказ  Министерства  здравоохранения  и  социального  развития  Российской  Федерации  от  23  августа  2010  г.  №  708-н  «Об  утверждении  Правил  лабораторной  практики».
8. Руководство  по  проведению  доклинических  исследований  лекарственных  средств.  Часть  первая  /  Под  ред.  А.Н.  Миронова.  —  М.:  Гриф  и  К,  2012.  —  944  с.
9. Самотруева  М.А.,  Цибизова  А.А.,  Ясенявская  А.Л.,  Озеров  А.А.,  Тюренков  И.Н.  Фармакологическая  активность  производных  пиримидинов  //  Астраханский  медицинский  журнал.  —  2015.  —  №  1.  —  С.  12—29.
10. Серебряная  Н.Б.  Нуклеотиды  как  регуляторы  иммунного  ответа  //  Иммунология.  —  2010.  —  Т.  31,  —  №  5.  —  С.  273—281.
11. Цибизова  А.А.,  Тюренков  И.Н.,  Самотруева  М.А.,  Озеров  А.А.,  Глухова  Е.Г.  Оценка  иммунотропных  свойств  нового  производного  пиримидина  //  Международный  журнал  прикладных  и  фундаментальных  исследований.  —  2013.  —  №  11.  —  С.  71—72.
12. Чернышенко  Ю.Н.,  Мустафин  А.Г.,  Гимадиева  А.Р.,  Абдрахманов  И.Б.,  Герчиков  А.Я.,  Сафарова  И.В.  Синтез  и  антиокислительная  активность  аминометилированных  производных  6-метилурацила  //  Химико-фармацевтический  журнал.  —  2010.  —  №  3.  —  С.  14—16.