ИЗУЧЕНИЕ КУМАРИНОВ ТРЁХРЁБЕРНИКА НЕПАХУЧЕГО И НИВЯНИКА ОБЫКНОВЕННОГО

Горячкина Елена Геннадьевна

канд. фармацевт.наук, доцент ИГМУ,

 г. Иркутск

Е-mail: rosforest@mail.ru

Мазунова Ольга Игоревна

аспирант, ИГМУ,

 г. Иркутск

Федосеева Галина Михайловна

д-р фармацевт.наук, профессор ИГМУ,

 г. Иркутск

Основными действующими веществами надземной части трёхрёберника непахучего (ТН) и нивяника обыкновенного (НО) являются полифенольные соединения — флавоноиды, фенолкарбо­новые кислоты, дубильные вещества и кумарины [2, c. 23].

Для установление содержания кумаринов в траве изучаемых растений разработан метод дифференциальной фотоэлектроколо­риметрии, основанный на реакции кумаринов с диазотированной сульфаниловой кислотой в щелочной среде [1, с. 8].

Расчёт содержания суммы кумаринов проводили в пересчёте на эскулетин.

Методика: 0,50 г (точная навеска) измельчённого сырья помещали в колбу на 100 мл, добавляли 50 мл спирта этилового 70 % и нагревали на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут, затем извлечение фильтровали в колбу на 200 мл, фильтр промывали 2 раза горячим спиртом этиловым 70 % по 10 мл. В колбу с объединёнными фильтратами добавляли 2 мл свинца ацетата основного 10 % и кипятили 3 минуты для полного осаждения сопутствующих фенольных соединений. Горячее извлечение фильтровали через бумажный фильтр диаметром 7 см, вложенный в воронку. Колбу и фильтр промывали 3 раза горячим спиртом этиловым 70 % по 20 мл.

К фильтрату добавляли 1 г натрия фосфата однозамещённого и кипятили 3 минуты. Горячий раствор фильтровали через бумажный фильтр в колбу со шлифом на 300 мл, фильтр промывали спиртом этиловым 70 % 3 раза по 20 мл, спирт отгоняли на водяной бане, водный остаток переносили в делительную воронку и четырёхкратно обрабатывали 25 мл хлороформа. Хлороформный слой каждый раз отделяли и фильтровали через 5 г натрия сульфата безводного, помещенного на фильтр, в сухую колбу. К сухому остатку после отгонки хлороформа прибавляли 7 мл спирта этилового 96 %, полученный раствор переносили в мерную колбу на 50 мл, колбу ополаскивали 5 мл спирта этилового 96 % и переносили в ту же мерную колбу. Затем добавляли 10 мл натрия гидроксида 0,1 М, нагревали на водяной бане 5 минут и доводили до метки натрия гидроксидом 0,1 М (раствор А).

Готовили разведения: в две пробирки помещали по 0,5 мл раствора А, затем в первую добавляли 6,5 мл натрия гидроксида 0,1 М (раствор сравнения), во вторую 1 мл свежеприготовленного диазореактива и 5,5 мл натрия гидроксида 0,1 М.

Измерение оптической плотности проводили через 20 минут на КФК — 2 МП при длине волны 490 нм.

Расчётная формула:

Х ( %) =  = ,

где: V_{1 —} объём общий, равный 50 мл;

V_{2 —} объём разбавления, равный 7 мл;

V_{3 —} объём, взятый для разбавления, равный 1 мл;

с — содержание эскулетина в 1 мл колориметрируемого раствора, найденное по калибровочному графику, г;

W — потеря в массе при высушивании сырья, %;

M — масса сырья, в граммах.

Для построения калибровочного графика использовали РСО эскулетина (производство «Chemapol» PragueCzechoslovakia), предварительно очищенный методом двойной перекристаллизации.

0,5000 г (точную навеску) эскулетина растворяли в 50 мл спирта этилового 96 % и готовили разведения (табл. 1):

Таблица 1.

Данные для построения калибровочного графика по эскулетину

В полученных растворах через 20 минут определяли оптическую плотность на приборе КФК — 2МП при длине волны 490 нм и строили калибровочный график, представленный на рисунке.

Коэффициент корреляции для калибровочного графика r = 0,985.

Рисунок 1. Калибровочный график для количественного определения кумаринов в пересчёте на эскулетин

В таблице 2 представлены результаты исследования 6 испытуемых образцов травы ТН и НО, собранные в период цветения (июнь—июль 2011 и 2012 года) в Иркутской области: районы Большого и Малого Голоустного, Оёка, Пивоварихи, Горячих ключей.

Статистическая обработка результатов анализа представлена в таблице 3.

Отсутствие систематической ошибки метода доказано в опытах с добавками (табл. 4).

Таблица 2.

Количественное содержание кумаринов в траве трёхрёберника непахучего и нивяника обыкновенного, %

Таблица 3.

Метрологическая характеристика фотоколориметрического определения суммы кумаринов в траве ТН и НО

Таблица 4.

Результаты количественного определения суммы кумаринов в траве трёхрёберника непахучего с использованием метода добавок эскулетина

Таким образом, обнаружено, что наиболее богата кумаринами трава нивяника обыкновенного.

Список литературы:

1.Прокопенко О.П. Колориметричный метод кiлькiсного визначения кумаринев / О.П. Прокопенко // Фармацевтичний журнал, 1992. — Т. 17, № 6. — с. 18—22.

2.Федосеева Г.М. Фармакогностическое изучение представителей семейства астровых, произрастающих в Восточной Сибири// Федосеева Г.М., Горячкина Е.Г., Бочарова Г.И. и др. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сборник научных трудов. Пятигорск, 2008 — вып. 63. — с. 23—24.