Телефон: +7 (383)-312-14-32

Статья опубликована в рамках: XIV Международной научно-практической конференции «Современная медицина: актуальные вопросы» (Россия, г. Новосибирск, 14 января 2013 г.)

Наука: Медицина

Секция: Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Скачать книгу(-и): Сборник статей конференции

Библиографическое описание:
Бондарчук Р.А., Коломиец Н.Э., Смолякова И.М. [и др.] ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНОЛОКИСЛОТ В ТРАВЕ ХВОЩА ЛЕСНОГО // Современная медицина: актуальные вопросы: сб. ст. по матер. XIV междунар. науч.-практ. конф. – Новосибирск: СибАК, 2013.
Проголосовать за статью
Дипломы участников
У данной статьи нет
дипломов
Статья опубликована в рамках:
 
 
Выходные данные сборника:

 

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНОЛОКИСЛОТ В ТРАВЕ ХВОЩА ЛЕСНОГО

Бондарчук Руслан Анатольевич

соискатель кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии Сибирского государственного медицинского университета,

г. Томск

E-mail: bondarchuk686@mail.ru

Коломиец Наталья Эдуардовна

д-р фармацевт. наук,

 профессор кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии

 Сибирского государственного медицинского университета,

 г. Томск

E-mail: borkol47@mail.ru

Смолякова Ирина Михайловна

канд. фармацевт. наук,

 доцент кафедры фармацевтической технологии

 Сибирского государственного медицинского университета,

 г. Томск

E-mail: iren-sm@mail.ru

Марьин Андрей Александрович

канд. фармацевт. наук, доцент кафедры фармацевтической технологии Кемеровской государственной медицинской академии, г. Кемерово

E-mail: mfandr@mail.ru

 

Одной из групп биологически активных веществ по которым можно проводить стандартизацию травы хвоща лесного являются фенолокислоты [2]. При этом содержание фенолокислот нами предложено определять методом прямой спектрофотометрии в пересчете на кофейную кислоту. Однако для того, чтобы предлагаемая методика заняла заслуженное место в системе обеспечения качества лекарственных средств, гарантируя достоверные и точные результаты анализа, дополнительно необходимо провести процедуру ее валидации.Валидация дает понимание сути методики, осознание необходимости строгого соблюдения ее параметров, позволяет выявить недостатки и внести соответствующие коррективы на ранних стадиях разработки, что позволяет значительно снизить вероятность ошибок [1; 5].

В связи с этим, целью данной работы явилось изучение степени пригодности предлагаемой методики прямого спектрофотомет­рического определения суммы фенолокислот в траве хвоща лесного.

Материалы и методы

Объектами исследования являлись образцы надземной травы хвоща лесного. Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества осуществляли, руководствуясь общими статьями Государственной Фармакопеи XI издания [4].

Количественное определение фенолокислот проводили методом прямого спектрофотометрического определения. При этом принятое опорное значение содержания фенолокислот в пересчете на кофейную кислоту в траве хвоща лесного составило 0,252 ± 0,002 %.

Валидация методики проведена по прецизионности (повторя­емость), воспроизводимости (лабораторная и межлабораторная), правильности и линейности [3; 5]. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью пакета прикладных программ «StatisticaforWindows 8.0».

Результаты исследования

Повторяемость методики определяли в условиях, при которых шесть независимых результатов измерений получали одним методом, в одной лаборатории, одним лаборантом-исследователем, с использованием одного спектрофотометра, в пределах короткого промежутка времени. Статистическая обработка полученных результатов, показала, что они достоверны при доверительной вероятности 95 %, вычисленные значения величины относительного стандартного отклонения (RSD) — 2,37 % и относительного доверительного интервала среднего значения — 2,10 % не превышают критериев приемлемости — 5 %, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл.1).

Таблица 1.

Результаты оценки повторяемости методики

Образцы

1

2

3

4

5

6

Оптическая плотность

0,617

0,596

0,600

0,622

0,627

0,625

Содержание фенолокислот, %

0,250

0,245

0,248

0,254

0,260

0,257

f

Хср

S

Sх

SR, %

P (%)

t

6

0,252

0,000032

0,00569

0,002324

0,56

95

2,57

Примечание: f число степеней свободы, Хср — среднее выборки,
S² — дисперсия, S — стандартное отклонение,
Sх— стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SRотносительное стандартное отклонение расчетной величины, Р доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента

 

Воспроизводимость методики определяли на идентичных образцах сырья совместным оценочным экспериментом в трех различных лабораториях СибГМУ на различных приборах, разными лаборантами-исследователями по 3 испытания образца на 3-х разных уровнях концентраций в интервале 80—120 % от принятого опорного значения (табл. 2). Статистическое тестирование выбросов проводили с использованием критерия Кохрена, дисперсии и стандартного отклонения для каждого уровня и рассчитывали по ГОСТ Р ИСО [3]. При рассмотрении данных, не обнаружив, какой либо зависимости, в качестве показателей прецизионности, нами были выбраны средние значения стандартных отклонений. Данные значения стандартных отклонений могут быть применены в диапазоне содержания фенолокислот 0,020 до 0,040 по массе. Меры прецизионности для данного метода измерений не превышают критериев приемлемости как для внутрилабораторной прецизионности 1,86 % < 5 %, так и для межлабораторной прецизионности 4,05 % < 10 %, что указывает на удовлетворительную воспроизводимость методики.

Таблица 2.

Результаты оценки воспроизводимости методики

 

Лаборатория

№ 1

№ 2

№ 3

Образцы

1

2

3

1

2

3

1

2

3

Оптическая

плотность D1

0,600

0,570

0,419

0,532

0,508

0,334

0,496

0,406

0,447

Оптическая

плотность D2

0,617

0,569

0,484

0,543

0,527

0,349

0,504

0,420

0,460

Оптическая

плотность D3

0,622

0,552

0,409

0,530

0,498

0,326

0,484

0,398

0,432

Содержание ФК, Х1

0,247

0,225

0,197

0,238

0,211

0,191

0,250

0,206

0,190

Содержание ФК, Х2

0,250

0,223

0,204

0,236

0,213

0,194

0,252

0,210

0,195

Содержание ФК, Х3

0,252

0,219

0,198

0,230

0,209

0,190

0,245

0,203

0,187

Лабор-я

уровни

Хср

S²

S

Sх

SR, %

Р, %

t

RSD, %

1

1

0,250

0,0000065

0,00255

0,00147

0,25

95

2,57

1,51

1

2

0,222

0,0000095

0,00308

0,00178

0,31

95

2,57

2,06

1

3

0,200

0,0000145

0,00381

0,00219

0,38

95

2,57

2,82

2

1

0,235

0,0000175

0,00418

0,00241

0,42

95

2,57

2,64

2

2

0,211

0,000004

0,002

0,00115

0,20

95

2,57

1,41

2

3

0,192

0,0000046

0,00212

0,00122

0,21

95

2,57

1,64

Примечание: ФК — фенолокислоты, Хср среднее выборки,
дисперсия, S стандартное отклонение, Sх стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SR— относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента.

 

Правильность методики устанавливали на идентичных образцах травы хвоща лесного с добавлением известного количества рабочего стандартного образца кофейной кислоты по 3 испытания образца на 3-х уровнях концентраций (табл. 3). Критерий приемлемости — средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, средняя величина которого должна находиться в пределах 100 ± 5 %. В разработанной методике процент восстановления находился в пределах от 96,72 % до 103,09 %, его средняя величина составила 99,41 %.

Таблица 3.

Результаты определения правильности методики

Уровни

1

2

3

1

2

3

1

2

3

Оптическая плотность

0,490

0,502

0,486

0,610

0,618

0,614

0,736

0,730

0,740

Содержание ФК, мг

0,13

0,14

0,13

0,19

0,19

0,19

0,25

0,24

0,25

Добавлено кофейной кислоты, мг

0,005

0,005

0,005

0,010

0,010

0,010

0,015

0,015

0,015

Содержание ФК ожидаемое, мг

0,18

0,19

0,18

0,29

0,29

0,29

0,40

0,39

0,40

Оптическая плотность

0,610

0,627

0,583

0,846

0,823

0,800

1,020

1,028

1,030

Содержание ФК полученное, мг

0,19

0,20

0,17

0,30

0,29

0,28

0,38

0,38

0,38

Ошибка, %

102,3

103,1

98,5

102,9

99,1

96,8

96,7

98,0

97,3

 

Линейность аналитической методики определяли на 5-ти уровнях концентраций от принятого опорного значения расчетной величины (0,25 %). В ходе определения линейности установлено, что график зависимости имеет линейный характер в области концентрации суммы фенолокислот, значение остаточного стандартного отклонения равно 0,311, коэффициент корреляции близок к единице (0,999), это свидетельствует о сильной линейной зависимости значения оптической плотности от содержания действующих веществ.

Заключение

Проведена валидация методики прямого спектрофотометрического определения фенолокислот в траве хвоща лесного по прецизионности и воспроизводимости, правильности и линейности. Полученные резуль-таты позволяют сделать заключение о том, что предлагаемая методика является высокочувствительной, правильной и воспроизводимой.

 

Список литературы:

  1. Аладышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик // Фармация. — 2008. — № 7. — С. 9—14.
  2. Бондарчук Р.А., Н.Э. Коломиец Исследование фенольных соединений хвоща лесного Equisetum sylvaticum L. // Бюллетень сибирской медицины. — 2011. — № 5. — С. 25—29.
  3. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений. М.: ИПК Издательство стандартов. — 2002. — 42 с.
  4. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа. / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. — М: Медицина, 1987. — 335 с.
  5. Руководство ICH Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1); Официальные документы // Фармация. — 2008. — № 4. — С. 7—10.
Проголосовать за статью
Дипломы участников
У данной статьи нет
дипломов

Оставить комментарий

Форма обратной связи о взаимодействии с сайтом