ОЦЕНКА ВЫСЕВАЕМОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ ИЗ ОРГАНОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ТРАНСЛОКАЦИИ БАКТЕРИЙ В ДИНАМИКЕ ЭКСПЕРИМЕНТА

EVALUATION OF INOCULATION PROCEDURE OF MICROORGANISMS FROMLABORATORY ANIMAL BY TRANSLOCATION OF BACTERIA DURING DYNAMICS OF EXPERIMENTS

Kayum Suvunov

phD, doctorant of Institute of Sanitary, Higiena and Professional diseases,

Uzbekistan, Tashkent

АННОТАЦИЯ

Нашей целью было изучение всхожести микроорганизмов в мезентериальных лимфатических узлах (МЛУ), печени, селезенке, легких, периферической крови, перитонеальном экссудате для оценки интенсивности бактериальной транслокации (БТ). Установлено, что при экспериментальной острой непроходимости тонкого (ЭОНТонК) и толстого кишечника (ЭОНТолК) интенсивность БТ или процент всхожести микроорганизмов (ПВМ) из экстраинтестинальных органов животных была наиболее ярко выражена в МЛУ и печени, чем в селезенке и в легких. Интенсивность БТ была прямо пропорционально продолжительности эксперимента.

ABSTRACT

Our purpose was to study of the germination of microorganisms in to mesenteric lymph nodes (MLN), liver, spleen, lung, peripheral blood, peritoneal exudate to evaluate intensity of bacterial translocation (BT). It was found that due to the experimental acute obstruction of small entestial and colon, the intensity of BT and percentage of microorganisms’ germination of the animal’extraintestinal organs were the most pronounced in the MLN and in liver cpmpare to the spleen and the lungs. BT intensity was directly proportional to the period of experiments.

Ключевые слова: бактериальная транслокация, острая кишечная непроходимость, экспериментальные животные.

Keywords: bacterial translocation, acute obstruction of colon, experimental mousе

Известно, что бактериальная транслокация (БТ) это прохождение бактерий через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) в экстраинтестинальныечасти организма [5]. На сегодняшный деньместо БТ для организма оценивается двояко: одни исследователи считают, что БТ развивается под влиянием внешних воздействий,снижении деятельности иммунной системы, при этом является патогенетическим звеном заболеваний [1]; другие считают, что БТ является естественным защитным механизмом организма [3].

Известно, что чаще всего из нормальной микрофлоры способны к транслокации Escherichia coli, Proteus spр, некоторые другие представители семейства Enterobacteriaceae, транзиторные штаммы Bacillus subtillus, грамположительные аэробы,низким является способность к транслокации облигатных анаэробов [4].

Цель исследования.Изучение и оценка высеваемости микроорганизмов из мезентериальных лимфатических узлов (МЛУ), печени, селезенки, легких, периферической крови и перитонеальной жидкости в динамике эксперимента для оценки интенсивности БТ при экспериментальной острой непроходимости тонкого и толстого кишечника.

Материалы и методы. В исследовании были использованы 240 белых беспородных мышей с массой тела не менее 25 граммов. При работе строго соблюдали все этические принципы работы с экспериментальными животными и правила биологической безопастности.

Содержание, уход, кормление, взвешивание, термометрию тела животных и распределение в группы проводили по общепринятим методам.

При выполнении исследований использовали модели экспериментальныой острой непроходимости тонкого кишечника (ЭОНТонК) и толстого кишечника (ЭОНТолК), предложенных Круглянским Ю.М. [2] в модификации.

Все экспериментальные животные были разделены на 4 группы: 1 группа, ЭОНТонК (n=72); 2 группа, ЭОНТолК (n=72); 3 группа, животные, у которых вскрывали брюшную полость, но не проводили обтурацию - группа сравнения (n=72); 4 группа, интактные животные – контрольная группа (n=24).

В свою очередь основные группы (1, 2 и 3) были разделены на подгруппы: 1а, 2а и 3а – ЭОНТонК и ЭОНТолК продолжавшиеся 24 часа; 1б, 2б и 3б – ЭОНТонК и ЭОНТолК продолжавшиеся 48 часов; 1в, 2в и 3в – ЭОНТонК и ЭОНТолК продолжавшиеся 72 часа (во всех подгруппах n=8).

Сроки наблюдения выбраны в связи с тем, что в эти сроки наблюдаются основные клинические, патологические, морфологические изменения в кишечнике, связанные с обтурацией [1; 2].

Иденцификацию и дифференциацию микроорганизмов проводили традиционными бактериологическими методами. Для этого использованы питательные среды фирмы “HiMedia” (Индия).

Полученные результаты обработаны традиционными методами вариационной статистики. Организация и проведение исследований выполнены на основании принципов доказательной медицины.

Полученные результаты и их обсуждение. Формирование ЭОНТонК и ЭОНТолК проводили следующим образом: соблюдая правила асептики вскрыли брюшную полость. Для формирования ЭОНТонК согнули и связали подвздошную кишку шовным материалом, при этом не вовлекали брыжейку в патологический процесс, затем брюшную полость зашили. Для формирования ЭОНТолК проводили такие же мероприятия, только в отличие от ЭОНТонК обтурацию проводили на дистальной части толстого кишечника. Животным 3 группы вскрыли брюшную полость и зашили не вызывая обтурацию. В контрольной группе (4 группа) оперативные вмешательства не проводились.

Взятие и посев биологического материала для микробиологических исследований с органов грудной клетки (легкие) и брюшной полости (МЛУ, печень, селезенка), крови и перитониальной жидкости проводили согласно традиционной методике исследований.

Учитывая то, что в норме все экстраинтестинальные органы лабораторных животных являются стерильными рост любого микроорганизма на поверхности питательных сред оценивали как БТ.

Установлено, что при ЭОНТонК и ЭОНТолК интенсивность БТ была различной в зависимости от срока эксперимента и его вида. Были иденцифицированы следующие представители микрофлоры кишечника – Escherichia spp, Enterobacter spp, Citrobacter spp, Proteus spp, Staphylococcus spp, Enterococcus spp, Bacteroides spp. Высеваемость этих микроорганизмов описана предложенным нами микробиологическим критерием, определяющим интенсивность БТ-процентом всхожести микроорганизмов (ПВМ).

Исследованиями установлено, что при ЭОНТонК через 24 часа ПВМ из МЛУ составил 45,8±5,9 %, этот показатель через 48 часов увеличился до 91,7±3,3 % (Р<0,05), а через 72 часа этот параметр составил 100 % (Р<0,05).

Показатель ПВМ печени отличался от этих параметров МЛУ, так если через 24 часа микроорганизмы из печени высевались в 29,2±5,4 % случаях, то через 48 и 72 часа эти показатели были повышенными до 56,9±5,8 % и 81,9±4,5 % (Р<0,02 и Р<0,001).

ПВМ из селезенки животных резко отличался от показателей МЛУ и печени. Если через 24 часа после начала эксперимента микроорганизмы не были идентифицированы, то через 48 и 72 часа эти показатели составили – соответственно 29,2±5,4 % и 31,9±5,5 %.

Отличительной особенностью высеваемости микроорганизмов из легких было то, что ПВМ был достоверно низким по сравнению с другими органами. После формирования ЭОНТонК через 24 часа рост микроорганизмов из ткани легкого не наблюдали, при этом ПВМ через 48 и 72 часов составил 9,7±3,5 % и 15,3±4,2 %.

При изучении показателей групп сравнения и контроля положительные бактериологические показатели не получены.

На следующем этапе исследований изучена интенсивность БТ на экстраинтестинальные органы животных в различные сроки при ЭОНТолК.

Установлено, что в подгруппе 2а (ЭОНТолК после 24 часов) ПВМ в МЛУ был на уровне показателя ЭОНТонК – 41,7±5,8 % против 45,8±5,9 % (Р>0,05). Но, через 48 часов обнаружены достоверные различия между этими параметрами – 59,7±5,8 % против 91,7±3,3 % (Р<0,001). Результаты через 72 часа были идентичными у ЭОНТонК и ЭОНТолК.

Результаты исследований по печени показали следующие результаты: ПВМ через 24 часа 18,1±4,5 %, через 48 часов 51,3±5,9 % и через 72 часа 80,6±4,7 %. Через 24 часа из печени при ЭОНТолК ПВМ в 1,6 раза достоверно был низким по сравнению с ЭОНТонК, но через 48 часов достоверных различий между показателями не выявлены (Р<0,05).

Полученные результаты по ПВМ из селезенки отличались от результатов по МЛУ и печени. Так, через 24 часа посевы из селезенки дали отрицательный бактериологический результат, через 48 часов отмечали рост микроорганизмов, где ПВМ был равен 19,4±4,7 %, через 72 часа ПВМ был повышен на 1,9 раза по сравнению с предыдущим результатом 37,5±5,7 % (Р<0,001).

Тенденция изменений результатов исследований по легочной ткани были схожи с данными ПВМ селезенки. Если через 24 часа индентифицировать микроорганизмы не удалось, то через 48 часов этот показатель равнялся 16,7±4,4 %, а через 72 часа ПВМ достоверно повышался в 2,2 раза (Р<0,001) по сравнению с предыдущим показателем – 36,1±5,7 %.

Из посевов селезенки в динамике эксперимента между ЭОНТонК и ЭОНТолК не выявлены статистически значимых отличий, но показатели ПВМ из легких через 72 часа достоверно отличались между этими моделями в 2,4 раза. Как и в исследованиях с ЭОНТонК при ЭОНТолК в группах сравнения и контроля получен отрицательный бактериологический результат.

Следующим этапом исследований было изучение ПВМ периферической крови и перитонеальной жидкости у данных животных.

При посеве крови животных установлено, в обеих моделях через 24 часа иденфицировать микроорганизмы не удалось, но с увеличением срока эксперимента (48 часов) отмечали рост микроорганизмов – показатели ПВМ в обеих моделях составили соответственно 19,4±4,7 % и 25,0±5,1 %. Полученные результаты через 72-часа отличались. При ЭОНТонК получен результат статистически не отличающийся от предыдущего срока (23,6±5,0 %), но при ЭОНТолК процент положительных бактериологических проб был в 1,9 раза достоверно больше (Р<0,001), чем при 48-часовом эксперименте – 47,2±5,9 %.

Показатели ПВМ перитонеальной жидкости отличались от параметров крови. Результаты, в зависимости от срока эксперимента (24, 48,72 часа), были следующими: при ЭОНТонК соответственно – 48,6±5,9 %, 65,2±5,6 % и 94,4±2,7 %; при ЭОНТолК соответственно – 34,7±5,6 %, 58,3±5,8 % и 97,2±1,9 %.

В обеих моделях только при 24-часовом сроке были достоверные различия (Р<0,05), при других сроках показатели достоверно не различались между собой.

В группах сравнения и контроля по периферической крови получены отрицательные бактериологические результаты, но в группе сравнения из перитонеальной жидкости через 48 и 72 часа высеяны микроорганизмы, ПВМ был равен 2,8±1,9 % и 4,2±2,4 %. Данные контрольной группы были идентичны с другими биологическими образцами.

Выводы.

1. При ЭОНТонК и ЭОНТолК интенсивность БТ или ПВМ из экстраинтестинальных органов лабораторных животных в разных сроках эксперимента различаются. Интенсивность БТ была более ярко выраженной в МЛУ и печени, чем в селезенке и легких. Интенсивность БТ была прямо пропорционально срокам эксперимента.
2. Высеваемость микроорганизмов из перитонеальной жидкости экспериментальных животных был на порядок выше, чем из периферической крови этих животных. Всхожесть микроорганизмов из перитонеальной жидкости отмечали даже в группе сравнения.
3. Показатель всхожести микроорганизмов из МЛУ и печени нами рекомендуются как экспериментальный микробиологический критерий для оценки интенсивности бактериальной транслокации в эксперименте.

Список оитературы:

1. Гостищев А.Н., Афанасьев Ю.М. Круглянский Д.Н., Сотников В.К. Бактериальнаятранслокация в условиях острой непроходимости кишечника. Вестник РАМН. Москва, 2006; 9-10: 34-38.
2. Круглянский Ю.М. Бактериальнаятранслокация при обтурационной непроходимости кишечника (экспериментальное исследование): Автореф. дис. канд. мед.наук. Москва, 2007: 24 р.
3. Никитенко В.И., Ткаченко Е.И., Стадников А.А. Транслокация бактерий из желудочно-кишечного тракта-естественный защитный механизм. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. Москва, 2004; 1: 48-52.
4. Нуралиев Н.А., Эргашев В.А., Бектимиров А.М.-Т. Бактериальная транслокация: этиология, выявляемость и механизмы возникновения: обзор. Журнал клинической и теоретической медицины. Ташкент, 2012; 7: 45-49.
5. Berg R.D. Bacterialtranslocationfromtheintestines. JikkenDobutsu. 1985; 34 (1): 1-16.