ИССЛЕДОВАНИЕ  ЭРИТРОЦИТОВ  МЕТОДОМ  РЭМ  У  ДЕТЕЙ  С  МИКРО-  И  МАКРОГЕМАТУРИЧЕСКИМ  СИНДРОМОМ

Мунхалова  Яна  Афанасьевна

канд.  мед.  наук,  доцент,  зав.  кафедрой  педиатрии  и  детской  хирургии,  Медицинский  институт,  Северо-Восточный  федеральный  университет  им.  М.К.  Аммосова

РФ,  г.  Якутск

E-mail:  tokmacheva@mail.ru

Мамаева  Саргылана  Николаевна

канд.  физ.-мат.  наук,  доцент,  кафедра  общей  и  экспериментальной  физики,  Физико-технический  институт,  Северо-Восточный  федеральный  университет  им.  М.К.  Аммосова

РФ,  г.  Якутск

E-mail:  sargylana_mamaeva@mail.ru

Шейкин  Иннокентий  Юрьевич

студент,  Отделение  педиатрии, 
Медицинский  институт,  Северо-Восточный  федеральный  университет  им.  М.К.  Аммосова

РФ,  г.  Якутск

E-mail:  tipakeka@mail.ru

RESEARCH  OF  ERYTHROCYTE  BY  SEM  OF  CHILDREN  WITH  MICRO-  AND  MACROHAEMOTURIA  SYNDROME

Yana  Munhalova

candidate  of  Science,  Head  of  pediatric  and  children  surgery,  Medical  Institute,  associate  professor  of  North-Eastern  Federal  University, 
Russia,  Yakutsk

Sargylana  Mamaeva

candidate  of  Science,  Department  of  General  and  Experimental  Physics,  Institute  of  Physics  and  Technologies,  associate  professor  of  North-Eastern  Federal  University,  Russia,  Yakutsk

Innokentiy  Sheykin

student,  Pediatrics,  Medical  Institute, 
North-Eastern  Federal  University, 
Russia,  Yakutsk

АННОТАЦИЯ

Исследовались  мазки  крови  и  мочи  детей  проживающих  в  Республике  Саха  (Якутия)  с  макрогематурическим  синдромом  методом  растровой  электронной  микроскопии.  Где  на  снимках  были  обнаружены  изменения  их  структур  и  частицы  нанометровых  размеров,  соответствующие  малым  вирусам,  что  подтверждает  вирусную  этиологию  гломерулонефритов.

ABSTRACT

Studied  smears  of  blood  and  urine  of  children,  which  live  in  republic  of  Sakha  (Yakutia)  with  the  macrohematuria  syndrome  by  scanning  electron  microscopy.  Where  were  found  changes  in  their  structures  and  nanometer-sized  particles,  which  correspond  to  small  viruses,  confirming  the  viral  etiology  of  glomerulonephritis.

Ключевые  слова:  Педиатрия;  нефрология;  эритроциты.

Keywords:  Pediatrics;  nephrology;  erythrocytes.

Гематурия  является  основным  симптом  в  ряде  заболеваний  мочевыделительной  системы  таких  как  острый  гломерулонефрит,  капилляротоксический  гломерулонефрит,  гемаррогический  васкулит  и  др.  В  свою  очередь  в  группе  заболеваний  почек  и  мочевыводящих  путей  гломерулонефрит  занимает  3–4  место  [4].  И  данное  заболевание  является  основной  причиной,  приводящая  к  хроническому  диализу. 

Отдельно  следует  выделить  IgA-нефропатию,  т.к.  ее  этиология  и  патогенез  еще  недостаточно  изучены.  Болезнь  Берже  является  широко  распространенной  формой  первичного  гломерулонефрита  и  характеризуется  повторяющимися  эпизодами  макроскопической  гематурии,  которая  обычно  связана  с  инфекцией  слизистых  оболочек  верхних  дыхательных  путей  (или  инфекцией  другой  локализации),  или  бессимптомной  микроскопической  гематурией  с  протеинурией  или  без  нее  [2]. 

По  мнению  Дж.  Фиихали  и  Дж.  Камерона  IgA-нефропатия  характеризуется  тремя  важнейшими  ее  проявлениями  –  клиническим  синдромом  повторной  гематурии,  гистологическим  появлением  фокального  или  мезангиального  нефрита  и  иммуногистохимическим  выявлением  депозитов  IgA  [5].  Частота  данного  заболевания  оценивается  как  5  случаев  на  100  000  населения,  которая  впоследствии  может  привести  к  хронической  почечной  недостаточности.  Было  выявлено,  что  в  США  ее  распространенность  варьирует  от  2–10  %,  тогда  как  в  Азии  до  50  %  (в  Японии  18–40  %)  [6].

При  анализе  данных  по  этнической  принадлежности  было  выявлено,  что  все  наблюдаемые  дети  с  гематурическим  синдромом  были  азиатской  расы,  с  преобладанием  коренных  национальностей  –  95  %  (саха,  эвенки,  эвены).  Из  них  57  %  –  мальчики,  43  %  –  девочки.  У  детей  с  гематурическим  синдромом  выявлено  наличие  цитомегаловируса  у  47  %,  вируса  простого  герпеса  у  24  %  и  отсутствие  данных  вирусов  у  29  %  [1,3].  Также  из  анамнеза  было  выяснено,  что  дети  переболели  ОРВИ  100  %  и  ветряной  оспой  80  %.

Впервые  методом  растровой  электронной  микроскопии  изучить  биологические  материалы  детей  с  наиболее  часто  диагностируемыми  вариантами  гематурического  синдрома  у  детей  Республики  Саха  (Якутия),  такими  как  смешанный  нефротический  синдром,  геморрагический  васкулит,  IgA-нефропатия  (болезнь  Берже). 

В  качестве  объекта  для  исследования  использовались  мазки  крови  и  мочи  детей,  поступивших  в  нефрологическое  отделение  Республиканской  больницы  №  1  –  Национального  центра  медицины  города  Якутска  с  симптомами  макрогематурии,  на  электронном  сканирующем  микроскопе.  Исследования  проводили  на  растровом  электронном  микроскопе  (РЭМ)  JSM-7800F  фирмы  JEOL. 

Модель  JSM-7800F  имеет  термополевой  эмиссионный  катод  Шоттки  и  супергибридную  объективную  линзу.  Супергибридная  объективная  линза  позволяет  значительно  уменьшить  хроматические  и  сферические  аберрации,  что  позволяет  существенно  улучшить  разрешение,  особенно  при  малых  ускоряющих  напряжениях.  Микроскоп  оборудован  4-мя  типами  детекторов:  верхний  детектор  электронов,  верхний  детектор  вторичных  электронов,  детектор  обратно  отраженных  электронов  и  нижний  детектор  вторичных  электронов. 

Исследования  проводили  при  напряжении  от  0.1  кВ  до  30  кВ.  Микроскоп  имеет  пространственное  разрешение  1.2  нм  при  1  кВ,  0.08  нм  при  15  кВ  и  диапазон  увеличения  от  25x  до  1,000,000x.  Максимальный  размер  образца  для  измерения  может  иметь  диаметр  до  200  мм.  Исследования  проводились  при  ускоряющем  напряжении  1  кВ  и  2  кВ  с  подачей  напряжения  на  исследуемый  объект  от  8  до  10  В.  Измерения  были  проведены  нижним  детектором  вторичных  электронов.  Выбор  такого  режима  измерения  позволил  проводить  исследования  без  напыления  проводящих  покрытий  и  без  повреждения  исследуемого  объекта.  Исследования  мазков  мочи  и  крови  на  растровом  электронном  микроскопе  проводилось  без  нанесения  проводящего  напыления.

Первичным  исследованием  мазков  было  проведение  исследований  с  помощью  оптической  микроскопии.  Такое  исследование  позволяет  на  предварительном  этапе  сделать  выборку  более  информативных  объектов  и  позволяет  уменьшить  временные  и  ресурсные  затраты.

По  результатам  проведенных  исследований,  нами  было  выявлено,  что  самые  IgA-нефропатия  (болезнь  Берже),  высокие  показатели  частоты  стойкого  гематурического  синдрома  отмечались  в  возрастные  периоды,  от  6  до  8  лет  и  от  14  до  15  лет.  И  самая  низкая  частота  встречаемости  стойкого  гематурического  синдрома  отмечалась  у  детей  в  возрасте  от  10  месяцев  до  3  лет.  Гематурия  встречалась  с  одинаковой  частотой  у  мальчиков  и  девочек.  Нами  были  проведены  исследования  мазков  крови  и  мочи  детей  с  симптомами  макрогематурии,  на  растровом  электронном  микроскопе  (РЭМ)  JSM-7800F  фирмы  JEOL. 

При  IgA-нефропатии  наблюдаются  нарушения  поверхности  эритроцита,  где  присутствуют  множество  ямок  с  плоским  дном  и  наряду  с  ними  наблюдаются  светящиеся  объекты  нанометровых  размеров.  На  фоновой  поверхности  также  наблюдается  много  светящихся  объектов  с  нанометровыми  размерами.  Размеры  этих  объектов  сравнимы  с  размерами  вирусов  малых  размеров.  Типичными  объектами  в  рассмотренных  мазках  мочи  при  нефротическом  синдроме  являлись  эритроциты  и  «кристаллиты».  Было  видно,  что  эритроцит  находится  на  фоне  множества  мелких  вытянутых  зернообразных  образований  длинной  примерно  1.5  мкм  и  шириной  примерно  0.3  мкм,  между  которыми  видны  ниткообразные  объекты.  Предположительно  эти  объекты  представляют  собой  бактериальные  биопленки.

Проведенные  на  РЭМ  исследования  мазков  мочи  и  крови  детей  с  синдромом  гематурии,  показали,  что  кроме  дисморфных  эритроцитов  наблюдается  наличие  сопутствующих  объектов  нанометровых  размеров,  сопоставимые  с  размерами  малых  вирусов,  что  может  подтвердить  предположения  о  вирусном  этиологическом  факторе  в  возникновении  гематурии  у  детей.  Для  подтверждения  этого  предположения  необходимо  проведение  дополнительных  исследований.

Список  литературы:

1. Горохова  А.В.,  Мунхалова  Я.А.  Результаты  морфологического  исследования  биоптатов  почек  у  детей  с  хроническими  нефропатиями  в  РС  (Я)  //  Сборник  научных  трудов  III  съезда  педиатров  Дальневосточного  федерального  округа,  II  съезда  детских  врачей  РС  (Я)  «Современные  проблемы  педиатрии»  (Якутск,  3–4  апреля,  2014  г.)  /  Под  ред.  проф.  Н.В.  Савиной.  Киров:  МЦНИП.  2014.  –  С.  116–122.
2. Папаян  А.В.,  Соловьев  А.А.,  Стяжкина  И.С.  IgA  нефропатия  (болезнь  Берже  у  детей).  Лекция.  СПб.:  издание  ГПМА,  2001.  –  34  с.
3. Мунхалова  Я.А.,  Захарова  Н.М.,  Горохова  А.В.  Особенности  гломерулонефрита  ассоциированного  с  герпес-вирусной  инфекцией  //  Сборник  трудов  IV  Конгресса  с  межд.  участием  «Экология  и  здоровье  человека  на  Севере»  (Якутск,  2013  г.)  /  Под  ред.  проф.  Н.В.  Савиной.  Киров:  МЦНИП.  2013.  –  С.  405–409.
4. Рябова  С.И.,  Ракитянский  И.  А.  Нефрология:  руководство  для  врачей:  в  2  т.  /–  Т.  1.  Заболевание  почек.  –  СПб.  :  СпецЛит,  2013.  –  767  с.
5. Feehally  J.,  Cameron  J.  S.  IgA  Nephropathy:  Progress  Before  and  Since  Berger  //  American  Journal  of  Kidney  Diseases.  2011.  Vol.  58(2).  P.  310–319.
6. Hall  YN,  Fuentes  EF,  Chertow  GM,  Olson  JL  (2004)  Race/ethnicity  and  disease  severity  in  IgA  nephropathy.  BMC  Nephrol  5:10.