ТЕРПЕНОИДЫ ЭФИРНОГО МАСЛА CRUCIATA LAEVIPES OPIZ

Юрченко Наталия Сергеевна

асп. каф. фармакогнозии Национального фармацевтического университета, г. Харьков

E-mail: n-yurchenko88@ukr.net

Горячая Ольга Владимировна

асп. каф. фармакогнозии Национального фармацевтического университета, г. Харьков

E-mai: Gorya4aya Olga@rambler.ru

Ильина Татьяна Васильевна

к.ф.н., доц. каф. фармакогнозии Национального фармацевтического университета, г. Харьков

E-mail: ilyinatany@rambler.ru

Ковалева Алла Михайловна

д.ф.н., профессор каф. фармакогнозии Национального фармацевтического университета, г. Харьков

E-mail: allapharm@yahoo.com

Род круциата (Cruciata Mill.) относится к семейству мареновых (Rubiaceae Juss.), насчитывает около 20 видов, распространенных на территории Евразии. В Украине встречается около 10 видов этого рода, среди них половина — эндемики Крыма [3, с.115]. Одним из представителей рода Cruciata является круциата гладенькая (Cruciata laevipes Opiz), или подмаренник крестообразный (Galium cruciata (L.) Scop.) – многолетнее травянистое растение, распространенное в Украине (Карпаты, Приднепровье); в Беларуси; в европейской части России (Ладожско-Ильменский, Волжско-Донской районы); в Западной Сибири (Алтайский район, редко); в Восточной Сибири (Ангаро-Саянский район, редко); на Кавказе. Cruciata laevipes часто гибридизуется с близким к нему видом круциатой голой (Cruciata glabra (L.) Ehrend.), он же подмаренник весенний (Galium vernumScop.) [3, с.116].

Круциата гладенькая широко используется в народной медицине: сок травы применяют при гепатите, циррозе печени, асците, зобе, цинге, как мочегонное; местно — при гнойных ранах, язвах, кожных заболеваниях, злокачественных опухолях. В эксперименте отвар дал положительный результат как гемостатическое средство при кровотечениях различной этиологии и при хронической тромбоцитопении у детей. Отвар травы в Украине (Ровенская обл.) внутрь применяют как гемостатическое, при метроррагиях и кровотечениях, геморрое, в Сибири — при диспепсии и как противорвотное у детей [2, с.42‑43].

Ранее проводились исследования химического состава корневищ с корнями и травы подмаренника крестообразного, которые показали наличие антрахинонов группы ализарина, флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот и их производных, дубильных веществ, иридоидов, стероидных сапонинов [1, с.254, 2, с.42‑43]. Качественный и количественный состав эфирного масла не исследовался.

Целью нашей работы стало определение терпеноидов эфирного масла травы подмаренника крестообразного хромато-масс-спектрометрическим методом. Объектом исследования служила трава подмаренника крестообразного Galium cruciata L., заготовленная в фазу цветения в Карпатах в июне 2010г.

Материалы и методы. Для исследования эфирного масла был применен метод, позволяющий выделить эфирное масло из растительного сырья при незначительном его содержании в сырье [4, с.61‑68]. Навеску материала (0,5‑5 г) помещали в виалу «Agilent» на 20 мл (part number 5183‑4536) с открытыми крышками и силиконовыми уплотнителями и добавляли внутренний стандарт. В качестве внутреннего стандарта использовали тридекан, из расчета 50 мкг на навеску, с последующим расчетом получившейся концентрации внутреннего стандарта, которая затем использовалась для расчетов. В уплотнении просверливали отверстие, куда вставляли воздушный холодильник (стеклянная трубка 50 см длиной и диаметром 5‑7 мм). В пробу добавляли 10 мл воды и отгоняли летучие соединения пробы с водяным паром в течение 2-х часов с использованием обратного холодильника с воздушным охлаждением.

В процессе отгонки, вещества адсорбировались на внутренней поверхности обратного холодильника, после охлаждения системы их смывали медленным добавлением 3 мл особо чистого пентана в сухую виалу на 10 мл. Смыв концентрировали продувкой (100 мл/мин) особо чистого азота до остаточного объема экстракта 10 мкл, который полностью отбирали хроматографическим шприцом. Дальнейшее концентрирование пробы проводили в самом шприце до объема 2 мкл.

Ввод пробы в хроматографическую колонку проводили в режиме splitless, то есть без деления потока, что позволяет ввести пробу без потери на деление и существенно (в 10‑20 раз) увеличить чувствительность метода хроматографирования.

Состав эфирного масла определяли хромато-масс-спектрометрическим методом [5, с.195‑207] на хроматографе Agilent Technology 6890N с масс-спектрометрическим детектором 5973N. Условия анализа: хроматографическая колонка кварцевая, капиллярная HP-5MS. Длина колонки 30 метров. Внутренний диаметр 0,25 мм. Газ-носитель — гелий. Скорость газа-носителя 1 мл/мин. Объем пробы — 0,1‑0,5 мкл. Скорость ввода пробы 1,2 мл/мин. в течение 0,2 мин. Температура термостата 50⁰ с программированием 4^о/мин. до 220^о. Температура детектора и испарителя 250^о.

Полученные спектры рассматривали как на основе общих закономерностей фрагментации молекул органических соединений под действием электронного удара, так и в сравнении результатов с данными масс-спектральной библиотеки «Flavor2.L» и «NIST98L»: для каждого хроматографического пика рассчитывали усредненный масс-спектр, от которого отнимали спектр фона. Идентификацию соединений проводили путем сравнения полученных масс-спектров хроматографического пика с масс-спектрами эталонных соединений с наибольшей вероятностью идентифицированных программой распознавания на массиве спектров базы данных.

Результаты исследования и их обсуждение

Качественный состав и количественное содержание терпеноидов и ароматических соединений эфирного масла травы подмаренника крестообразного приведено в таблице 1.

Таблица 1

Терпеноиды и ароматические соединения эфирного масла травы Сruciata laevipes Opiz.

В результате исследования выявлено 61 соединение, из которых идентифицированы и установлено количественное содержание 25 веществ терпеноидной природы: нор-монотерпеноид α-изофорон, монотерпеноиды — ациклические: линалоол, и его производные транс-линалоолоксид и цис-линалоолоксид, гераниол и его производное геранилацетон и цис-изомер — нерол; моноциклические — терпинен-4-ол, α-терпинеол; бициклические — борнеол, изоборнеол, вербенон, транс-вербенол, транс-пинокарвеол; моноциклические ароматичес­кие — p‑цимен-8-ол, тимол, эвгенол; сесквитерпеноиды: ациклические — α‑фарнезен и его производное гексагидроксифарнезилацетон; моноцик­лические — β-ионон (изомер), гермакрен D; бициклический — кариофиллен; трициклический — лонгиборнеол; ациклический дитер­пеноидный спирт фитол; моноциклический тритерпеноид — сквален. Суммарное содержание составляет (мг/кг сырья): монотер­пеноидов — 2144,1, сесквитерпеноидов — 385,6. В эфирном масле также обнаружены ароматические соединения, такие как бензальдегид, фенилацетальдегид, 2-метокси-4-винилфенол.

Этим же методом были исследованы компоненты эфирного масла травы Cruciata glabra, которая имеет общий ареал с Cruciata laevipes (Карпаты). Сравнительный анализ терпеноидов и ароматических сое­динений эфирного масла травы Cruciata glabra и Cruciata laevipes показал их идентичность на 80%, что свидетельствует о близости этих таксонов.

Выводы

1.    В эфирном масле травы Cruciata laevipes хромато-масс-спектрометрическим методом идентифицировано 61 соединение, 25 из которых относятся к терпеноидам.

2.    Установлено, что доминирующими веществами являются: борнеол, вербенон, гермакрен D, кариофиллен, транс-вербенол, линалоол, фитол.

3.    Наличие значимых биологически активных терпеноидов создает предпосылки для рассмотрения круциаты гладенькой как перспективного сырьевого источника.

Список литературы:

1.        Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Caprifoliaceae-Plantaginaceae. — Л.:Наука, 1990. — 326c.

2.        Фитохимическое изучение травы подмаренника крестообразного / Брихунченко О. А., Горячая О. В., Ильина Т. В., Ковалева А. М. // Актуальні питання створення нових лікарських засобів: матер. всеукр. наук.-практ. конф. студ. та мол. вчених, присвяч. 140-річчю з дня народження д-ра фармац. та хім. наук, проф. М.О. Валяшка (21 квітня 2011р.) — Х.: НФаУ, 2011. — 560 с. — серія «Наука». — С.42‑43.

3.        Флора Европейской части СССР. Т.3. — М.: Наука, 1978, 259с.

4.        Черногород Л. Б., Виноградов Б. А. Эфирные масла некоторых видов рода Achillea L., содержащие фрагранол // Растительные ресурсы. — Санкт-Петербург. — 2006. — Т.42. — Вып. 2. — С. 61‑ 68.

5.        Bicchi C., Brunelli C., Cordero C. et all. Direct resistively heated column gas chromatography (Ultrafast module-GC) for high-speed analysis of essential oils of differing complexities // J. Chromatogr. A. — 2004. — V. 1024, № 1-2. — С.195-207.