ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ Α-КЛЕТОК ОСТРОВКОВ ЛАНГЕГАНСА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ  МОРФОЛОГИЯ  Α-КЛЕТОК  ОСТРОВКОВ  ЛАНГЕГАНСА  ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ  ЖЕЛЕЗЫ  В  ВОЗРАСТНОМ  АСПЕКТЕ

Волков  Владимир  Петрович

канд.  мед.  наук,  РФ,  г.  Тверь

E-mail: 

FUNCTIONAL  MORPHOLOGY  Α-CELLS  OF  LANGEGANS'S  ISLANDS  OF  A  PANCREAS  IN  AGE  ASPECT

Volkov  Vladimir

candidate  of  medical  sciences,  Russia,  Tver

АННОТАЦИЯ

С  помощью  комплекса  морфометрических  исследований  выявлены  ассоциированные  с  возрастом  гиперплазия  и  гипертрофия  α-клеток  островков  Лангерганса  поджелудочной  железы,  что  отражает  повышение  их  функциональной  активности  и  является  материальной  основой  развития  старческого  сахарного  диабета.  Полученные  данные  могут  служить  параметрами  условной  нормы  при  изучении  различной  патологии  как  самой  поджелудочной  железы,  так  и  заболеваний,  связанных  с  её  эндокринной  дисфункцией.

ABSTRACT

By  means  of  a  complex  of  morphometric  researches  a  hyperplasia  and  a  hypertrophy  associated  with  age  α-cells  of  Langergans's  islands  of  a  pancreas  that  reflects  the  increase  of  their  functional  activity  are  revealed  and  is  a  material  basis  of  a  development  of  senile  diabetes.  The  obtained  data  can  serve  as  parameters  of  conditional  norm  when  studying  various  pathology  both  the  pancreas  and  the  diseases  connected  with  its  endocrine  dysfunction.

Ключевые  слова :  поджелудочная  железа;  α-клетки;  возрастные  изменения;  морфометрическое  исследование.

Keywords :  pancreas;  α-cells;  age-related  changes;  morphometric  research.

Значение  поджелудочной  железы  (ПЖ)  для  жизнедеятельности  организма  трудно  переоценить  [10].  Главная  составляющая  её  эндокринной  функции  —  синтез  в  островках  Лангерганса  (ОЛ)  глюкагона  и  инсулина,  которые  служат  ключевыми  гормональными  факторами,  регулирующими  энергетический  метаболизм  [10;  34]. 

В  частности,  глюкагон  —  катаболитический  гормон,  обладающий  многочисленными  биологическими  эффектами  на  широкий  диапазон  органов  [14;  32;  43].  Он  стимулирует  гликогенолиз  и  тормозит  синтез  гликогена  в  печени,  а  также  ингибирует  утилизацию  глюкозы  тканями,  тем  самым  повышая  её  концентрацию  в  крови  [3;  14;  28;  31;  43;  44].  Глюкагон  действует  на  белковый  и  жировой  обмен,  стимулируя  распад  белков,  липолиз  и  кетогенез,  а  также  угнетая  липогенез,  особенно  при  недостатке  инсулина  [3;  13;  14;  31;  34;  42].  Вместе  взятые,  эти  эффекты  указывают  на  важную  роль  глюкагона  в  поддержании  гомеостаза  глюкозы  [14;  31;  43].  Важно  отметить,  что  гиперглюкагонемия  способствует  развитию  инсулинорезистентности,  тем  самым  участвуя  в  патогенезе  сахарного  диабета  (СД)  2-го  типа  [23;  27;  31;  33;  42].

Известно,  что  оба  гормона  с  антагонистическим  действием  (глюкагон  и  инсулин)  вырабатываются  двумя  основными  типами  особых  специализированных  клеточных  элементов  ОЛ:  α-клетки  продуцируют  глюкагон,  β-клетки  —  инсулин  [3;  4;  11;  13;  14;  16;  18;  31;  34].  Обычно  у  здорового  взрослого  человека  соотношение  α-  и  β-клеток  несколько  варьирует,  но  в  среднем  держится  около  1:  3,5—1:  4  [18].

Однако  опубликованные  данные  о  качественных  и  количественных  возрастных  изменениях  инсулярного  аппарата  ПЖ  получены  преимущественно  в  экспериментальных  исследованиях,  носят  в  основном  описательный  характер  и  достаточно  противоречивы  [15]. 

Следует  подчеркнуть,  что,  с  учётом  принципов  современной  доказательной  медицины  [7;  12],  использование  морфометрических  методов,  в  частности  при  изучении  ОЛ,  в  значительной  мере  объективизирует  полученные  результаты  и  сделанные  выводы,  так  как  итоговые  данные  имеют  количественное  выражение  и  легко  поддаются  статистическому  анализу  [1;  2;  9].

Вместе  с  тем,  количественная  характеристика  изменений  микроструктуры  каждого  органа,  в  том  числе  и  ПЖ,  при  любой  его  патологии  должна  начинаться  от  какой-то  определённой  «точки  отсчёта».  Таким  отправным  пунктом  служит  понятие  «нормы»  [17].  Однако  в  доступной  литературе  не  обнаружено  сведений,  освещающих  возрастные  морфофункциональные  сдвиги  в  островковом  аппарате  нормальной  ПЖ  человека,  в  частности  динамику  изменений  популяции  α-клеток  ОЛ,  с  помощью  морфометрического  метода  исследования.

Поэтому  цель  данной  работы  —  восполнить,  по  мере  возможности,  указанный  пробел  и  определить  границы  условной  нормы  (УН)  относительно  популяции  α-клеток  ОЛ.

  Материал  и  методы

Изучены  ПЖ  76  лиц  (мужчин  —  35,  женщин  —  41)  в  возрасте  от  18  до  78  лет,  умерших  в  общесоматическом  стационаре  от  различных  остро  развившихся  заболеваний  и  при  жизни  не  страдавших  нарушениями  обмена,  эндокринной  патологией,  в  том  числе  СД,  а  также  панкреатитом  и  желчнокаменной  болезнью,  что  верифицировано  на  аутопсии. 

Материал  разделён  на  следующие  возрастные  группы:  I  —  до  30  лет  (8  человек),  II  —  31—40  лет  (15),  III  —  41—50  лет  (17),  IV  —  51—60  лет  (20),  V  —  61  год  и  старше  (16).

Парафиновые  срезы  из  различных  отделов  ПЖ  (головка,  тело,  хвост)  окрашивались  гематоксилином  и  эозином  и  по  методу  Маллори,  при  котором  α-клетки  окрашивались  в  оранжевый  цвет,  β-клетки  —  в  темно-синий.

Количество  (плотность)  α-клеток  (V)  подсчитывалось  в  10  полях  зрения  светового  микроскопа  при  увеличении  х400  с  дальнейшим  определением  средних  величин.

В  соответствии  с  представлениями,  что  уровень  секреторной  активности  гормонпродуцирующих  клеток  прямо  ассоциируется  с  размером  их  ядер  [22],  определялся  средний  диаметр  кариона  (СДК)  α-клеток  путём  измерения  наибольшего  (а)  и  наименьшего  (b)  размера  ядра  и  последующего  расчёта  по  формуле  [45]: 

  .

В  качестве  интегрального  показателя  уровня  функционирования  α-клеток  проведён  расчёт  индекса  функциональной  активности  (ИФА),  вычисляемого  по  формуле,  хорошо  зарекомендовавшей  себя  при  подобных  исследованиях  [6]: 

  .

Вычислялся  также  предложенный  нами  эндокриноцитарный  индекс  (ЭЦИ)  [5],  представляющий  собой  отношение  плотности  α-клеток  к  плотности  β-клеток.  Этот  показатель,  на  наш  взгляд,  более  демонстративен,  чем  упоминающееся  в  литературе  соотношение  указанных  клеток  в  виде  дроби  типа  «1:4»,  где  за  единицу  принято  количество  α-клеток.  Кроме  того,  что  немаловажно,  ЭЦИ  более  удобен  для  статистического  анализа.

Статистическая  обработка  полученных  данных  проведена  методами  непараметрической  статистики,  отличающихся  достаточной  мощностью,  простотой,  надёжностью  и  высокой  информативностью  [8;  19;  21]. 

При  этом  определены  не  только  морфометрические  параметры  α-клеток  по  возрастным  группам,  но  и  вычислены  обобщённые  средние  показатели,  стандартизованные  по  возрасту  (Σ),  которые  можно  принять  за  УН.

Результаты  и  обсуждение

Анализ  полученных  количественных  данных  относительно  возрастной  морфологии  популяции  α-клеток  ОЛ  выявляет  определённую  направленность  её  изменений  в  процессе  позднего  онтогенеза  (табл.). 

Таблица  1. 

Возрастная  характеристика  α-клеток  инсулярного  аппарата  поджелудочной  железы

Примечание:  1  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  I ;

2  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  II; 

3  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  III ;

4  —  статистически  значимые  различия  с  гр.  IV .

Так,  V  этих  клеточных  элементов  почти  на  всём  протяжении  жизни  остаётся  практически  постоянной,  однако  демонстрируя  некоторое  нарастание,  но  выраженное  на  уровне  тенденции.  Только  после  60  лет  (группа  V)  этот  показатель  статистически  значимо  превышает  таковой  у  молодых  лиц  (группа  I).  Таким  образом,  лишь  в  пожилом  возрасте  наблюдается  заметная  гиперплазия  популяции  α-клеток,  которая,  несомненно,  способствует  повышению  выработки  глюкагона.

Здесь  уместно  заметить,  что  литературные  сведения  относительно  колебаний  числа  α-клеток  в  ходе  старения  организма  крайне  малочисленны.  В  единственном  найденном  источнике  [36]  указано,  что  процент  глюкагонсекретирующих  α-клеток  заметно  не  различается  у  мышей  разного  возраста.  Этот  факт  в  целом  согласуется  с  полученными  данными.

  Напротив,  результаты  кариометрии  α-клеток  показывают  неуклонное  и  достаточно  существенное  увеличение  СДК,  приобретающее  статистическую  значимость  уже  с  40-летнего  возраста  (группа  III),  но  особенно  выраженное  после  60  лет  (группа  V).  Эта  находка,  отражающая  процесс  гипертрофии  индивидуально  взятых  α-клеток,  может  ассоциироваться  с  усилением  их  секреторной  функциональной  активности  [22].

Аналогичную  информацию  несёт  и  изучение  возрастной  динамики  ИФА  —  показателя,  интегрально  характеризующего  морфофункциональное  состояние  α-клеток,  обусловленное  как  процессом  клеточной  гиперплазии  их  популяции  в  целом,  так  и  степенью  гипертрофии  каждой  отдельной  клетки.

Так,  величины  ИФА  статистически  значимо  увеличиваются  в  период  от  40  до  60  лет  (группы  III  и  IV),  оставаясь  в  относительно  стабильными  в  указанном  возрастном  интервале.  Однако  в  последующем  (группа  V)  вновь  наблюдается  подъём  данного  индекса,  значения  которого  превышают  таковые  во  всех  предыдущих  группах  наблюдений.  Описанные  изменения  ИФА  убедительно  свидетельствует  о  прогрессирующем  с  возрастом  нарастании  функциональной  напряжённости  α-клеток  ОЛ,  что  может  ассоциироваться  с  повышенным  риском  развития  СД  в  пожилом  и  старческом  возрасте,  так  как  избыток  глюкагона,  по  современным  концепциям,  играет  значительную  роль  в  патогенезе  указанного  заболевания  [20;  24;  26;  30;  34;  35;  37—39;  41].

Как  показали  другие  наши  исследования,  с  возрастом  значительно  сокращается  популяция  эндокриноцитов  островкового  аппарата  ПЖ  за  счёт  β-клеточного  компонента  [5].  Этот  факт  находит  своё  подтверждение  при  анализе  возрастной  динамика  значений  ЭЦИ,  который  после  60  лет  (группа  V)  статистически  значимо  превышает  аналогичные  показатели  у  более  молодых  пациентов.  Полученная  величина  соотношения  α-  и  β-клеток  у  пожилых  лиц  очень  близка  к  значениям,  которые  наблюдаются  при  СД  [10;  18;  20;  25;  29;  34;  40].  Это  подтверждает  известный  факт,  что  с  возрастом  наблюдается  изменение  соотношения  α-  и  β-клеток  в  ОЛ  с  преобладанием  α-популяции,  приводящее  к  уменьшению  толерантности  к  глюкозе  и  зачастую  к  развитию  СД  [10;  24;  26;  30].

Заключение

Динамика  количественных  показателей,  объективно  характеризующих  функциональную  морфологию  α-клеток  ОЛ  в  процессе  позднего  онтогенеза,  указывает  на  существенное  возрастное  повышение  уровня  секреторной  активности  этих  клеточных  элементов,  особенно  в  пожилом  возрасте,  что  может  ассоциироваться  с  увеличением  риска  развития  старческого  СД. 

Полученные  в  результате  проведённого  исследования  обобщённые  средние  морфометрические  показатели,  стандартизованные  по  возрасту,  могут  служить  параметрами  УН  в  группе  сравнения  при  изучении  различной  патологии  как  самой  ПЖ,  так  и  заболеваний,  связанных  с  её  эндокринной  дисфункцией.

Список  литературы:

1.Автандилов  Г.Г.  Медицинская  морфометрия.  М.:  Медицина,  1990.  —  384  с. 

2.Автандилов  Г.Г.  Основы  количественной  патологической  анатомии.  М.:  Медицина.  2002.  —  240  с. 

3.Верин  В.К.,  Иванов  В.В.  Гормоны  и  их  эффекты:  справочник.  СПб.:  Фолиант,  2011.  —  136  с.

4.Возрастные  особенности  эндокринных  желез.  —  23.05.2012.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://otherreferats.allbest.ru/medicine/00192290_0.html  (дата  обращения:  05.02.2014).

5.Волков  В.П.  Некоторые  особенности  функциональной  морфологии  эндокринной  части  поджелудочной  железы  в  возрастном  аспекте  //  Инновации  в  науке  /  Сб.  ст.  по  материалам  XХX  междунар.  науч.-практ.  конф.  №  2  (27).  Часть  II.  Новосибирск:  СибАК,  2014.  —  С.  74—84.

6.Волков  В.П.  Новый  подход  к  оценке  морфофункционального  состояния  эндокринных  желёз  //  Universum:  Медицина  и  фармакология:  электрон.  научн.  журн.  —  2014  —  №  9  (10).  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://7universum.com/en/med/archive/item/1589  (дата  обращения:  11.09.2014).

7.Гринхальт  Т.  Основы  доказательной  медицины  /  пер.  с  англ.  М.:  ГЭОТАР-МЕД,  2004.  —  240  с.

8.Гублер  Е.В.,  Генкин  А.А.  Применение  непараметрических  критериев  статистики  в  медико-биологических  исследованиях.  изд.  2-е.  Л.:  Медицина,  1973.  —  141  с. 

9.Гуцол  А.А.,  Кондратьев  Б.Ю.  Практическая  морфометрия  органов  и  тканей.  Томск:  Изд-во  Томского  ун-та,  1988.  —  136  с.

10.Дедов  И.И.,  Петеркова  В.А.  Детская  эндокринология.  М.:  Универсум  Паблишинг,  2006.  —  600  с.

11.Инсулин  и  его  роль  в  организме.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://patofiziologiya-chel.ru  (дата  обращения:  11.02.2014).

12.Клюшин  Д.А.,  Петунин  Ю.И.  Доказательная  медицина.  Применение  статистических  методов.  М.:  Диалектика,  2008.  —  315  с. 

13.Лычкова  А.  Серотонинергическая  регуляция  эндокринной  и  мочеполовой  систем.  М.:  Изд-во  РАМН,  2014.  —  467  с.

14.Машарани  У.,  Джерман  М.С.  Гормоны  поджелудочной  железы  и  сахарный  диабет  //  Гарднер  Д.,  Шобек  Д.  Базисная  и  клиническая  эндокринология  /  пер.  с  англ.  изд.  8.  /  под  ред.  Г.А.  Мельниченко.  М.:  БИНОМ,  —  2013.  —  Кн.  1.  —  Гл.  8.  —  С.  255—355.

15.Морфофункциональные  изменения  поджелудочной  железы  при  старении.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://medkarta.com/?cat=article&id=26538  (дата  обращения:  05.02.2014).

16.Островки  Лангерганса  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  mmorpgbb.ru›foegwoeg/  (дата  обращения:  12.07.2013).

17.Петленко  В.П.,  Царегородцев  Г.И.  Философия  медицины.  Киев:  Здоров’я,  1979.  —  232  с.

18.Поджелудочная  железа:  гистология.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://revolution.allbest.ru/medicine/00172149_0.html  (дата  обращения:  05.02.2014).

19.Сепетлиев  Д.  Статистические  методы  в  научных  медицинских  исследованиях.  М.:  Медицина,  1968.  —  420  с.

20.Сорокина  И.В.,  Шерстюк  С.А.  Морфологические  особенности  поджелудочной  железы  детей,  умерших  в  возрасте  до  6  месяцев,  от  ВИЧ-инфицированных  матерей  //  Морфологія.  —  2011.  —  Т.  V,  —  №  2.  —  С.  75—79.

21.Фадеев  В.В  Представление  данных  в  оригинальных  работах  и  их  статистическая  обработка  //  Пробл.  эндокринол.  —  2002  —  Т.  48,  —  №  3.  —  С.  47—48.

22.Хесин  Я.Е.  Размеры  ядер  и  функциональное  состояние  клеток.  М.:  Медицина,  1967.  —  424  с. 

23.Ahrén  B.,  Larsson  H.  Impaired  glucose  tolerance  (IGT)  is  associated  with  reduced  insulin-induced  suppression  of  glucagon  concentrations  //  Diabetol.  —  2001.  —  V.  44.  —  P.  1998—2003.

24.Decrease  in  β-cell  mass  leads  to  impaired  pulsatile  insulin  secretion,  reduced  postprandial  hepatic  insulin  clearance,  and  relative  hyperglucagonemia  in  the  minipig  /  L.L.  Kjems,  B.M.  Kirby,  E.M.  Welsh  [et  al.]  //  Diabetes.  —  2001.  —  V.  50  —  P.  2001—2012.

25.Diminished  glucagon  suppression  after  β-cell  reduction  is  due  to  impaired  β-cell  function  rather  than  an  expansion  of  the  alpha-cell  mass  /  J.J.  Meier,  S.  Ueberberg,  S.  Korbas  [et  al.]  //  Am.  J.  Physiol.  Endocrinol.  Metab.  —  2011.  —  V.  300.  —  P.  E717—E723.

26.Elayat  A.A.,  El-Naggar  M.M.,  Tahir  M.  An  immunocytochemical  and  morphometric  study  of  the  rat  pancreatic  islets  //  J.  Anat.  —  1995.  —  V.  186,  —  Pt.  3.  —  P.  629—637. 

27.Failure  of  glucagon  suppression  contributes  to  postprandial  hyperglycaemia  in  IDDM  /  S.  Dinneen,  A.  Alzaid,  D.  Turk  [et  al.]  //  Diabetol.  —  1995.  —  V.  38.  —  P.  337—343.

28.Gluconeogenesis  in  the  perfused  liver.  The  effects  of  fasting,  alloxan  diabetes,  glucagon,  epinephrine,  adenosine  3',5'-monophosphate  and  insulin  /  J.H.  Exton,  L.S.Jr.  Jefferson,  R.W.  Butcher  [et  al.]  //  Am.J.  Med.  —  1966.  —  V.  40.  —  P.  709—715.

29.Henquin  J.C.,  Rahier  J.  Pancreatic  alpha  cell  mass  in  European  subjects  with  type  2  diabetes  //  Diabetologia.  —  2011.  —  V.  54.  —  P.  1720—1725.

30.Kalache  A.,  Gatti  A.  Active  ageing:  a  policy  framework  //  Adv.  Gerontol.  —  2003.  —  V.  11.  —  P.  7—18.

31.Kawamori  D.,  Kulkarni  R.N.  Molecular  mechanism  underlying  the  intra-islet  regulation  of  glucagon  secretion  //  Diabetes  —  damages  and  treatments  /  prof.  E.  Rigobelo  (ed.).  —  2011.  [Электронный  ресурс]  —  Режим  доступа.  —  URL:  http://www.intechopen.com/books/  (дата  обращения:  12.09.2014).

32.Kawamori  D.,  Welters  H.J.,  Kulkarni  R.N.  Molecular  pathways  underlying  the  pathogenesis  of  pancreatic  alpha-cell  dysfunction  //  Adv.  Exp.  Med.  Biol.  —  2010.  —  V.  654.  —  P.  421—445.

33.Larsson  H.,  Ahren  B.  Islet  dysfunction  in  insulin  resistance  involves  impaired  insulin  secretion  and  increased  glucagon  secretion  in  postmenopausal  women  with  impaired  glucose  tolerance  //  Diabetes  Care.  —  2000.  —  V.  23.  —  P.  650—657.

34.Lefèbvre  Р.  Diabetes  as  a  рaracrinopathy  of  the  islets  of  Langerhans  //  Eur.  Endocrinol.  —  2011.  —  V.  7,  —  №  2.  —  P.  79—83. 

35.Lefèbvre  P.J.,  Paolisso  G.,  Scheen  A.  The  role  of  glucagon  in  non-insulin-dependent  (type  2)  diabetes  mellitus  //  New  directions  in  research  and  clinical  works  for  obesity  and  diabetes  mellitus  /  N.  Sakamoto,  A.  Angel,  H.  Hotta  (eds).  Amsterdam:  Elsevier  Science,  1991.  —  P.  25—29.

36.Loss  of  inverse  relationship  between  pulsatile  insulin  and  glucagon  secretion  in  patients  with  type  2  diabetes  /  B.A.  Menge,  L.  Grüber,  S.M.  Jorgensen  [et  al.]  //  Diabetes  —  2011.  —  V.  60.  —  P.  2160—2168.

37.Pancreatic  Peptides  in  Young  and  Elderly  Zucker  Type  2  Diabetic  Fatty  Rats  /  F.C.  Howarth,  M.K.A.A.  Al  Kitbi,  R.S.  Hameed  [et  al.]  //  JOP:  J.  Pancreas.  —  2011.  —  V.  12,  —  №  6.  —  P.  567—573.

38.Pathophysiology  of  insulin  secretion  in  diabetes  mellitus  /  W.K.  Ward,  J.C.  Beard,  J.B.  Halter  [et  al.]  //  Adv.  Exp.  Med.  Biol.  —  1985.  —  №  189.  —  P.  137—158.

39.Postprandial  suppression  of  glucagon  secretion  depends  upon  intact  insulin  pulsatile  secretion:  Further  evidence  for  the  intraislet  insulin  hypothesis  /  J.J.  Meier,  L.L.  Kjems,  J.D.  Veldhuis  [et  al.]  //  Diabetes.  —  2006.  —  V.  55.  —  P.  1051—6105.

40.Quantitation  of  endocrine  cell  content  in  the  pancreas  of  nondiabetic  and  diabetic  humans  /  Y.  Stefan,  L.  Orci,  F.  Malaisse-Lagae  [et  al.]  //  Diabetes.  —  1982.  —  V.  31,  —  №  8,  —  Pt.  1.  —  P.  694—700. 

41.Schwenkreis  P.,  Assion  H.-J.  Atypical  antipsychotics  and  diabetes  mellitus  //  World  J.  Biol.  Psychiatr.  —  2004.  —  V.  5,  —  №  2.  —  P.  73—82.

42.Unger  R.H.  Role  of  glucagon  in  the  pathogenesis  of  diabetes:  the  status  of  the  controversy  //  Metab.  —  1978.  –—  V.  27.  —  P.  1691—1709.

43.Unger  R.H.,  Orci  L.  Glucagon  and  the  A  cell:  physiology  and  pathophysiology  (2  parts)  //  N.  Engl.  J.  Med.  —  1981.  —  V.  304,  —  №  25.  —  P.  1518—1524,  1575—1580. 

44.Unger  R.H.,  Orci  L.  The  role  of  glucagon  in  the  endogenous  hyperglycemia  of  diabetes  mellitus  //  Ann.  Rev.  Med.  —  1977.  —  V.  28.  —  P.  119—130.

45.Williams  M.A.  Quantitative  metods  in  biology  //  Practical  metods  in  electron  microscopy  /  A.M.  Glauert  (ed.).  Amsterdam:  North-Holland,  —  1977.  —  V.  6.  —  P.  48—62.