ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СВЁРТЫВАНИЯ КРОВИ ПРИ ДЕЙСТВИИ ЗООТОКСИНОВ В УСЛОВИЯХ ГИПЕРТЕРМИИ И В ПОСТГИПЕРТЕРМИЧЕСКИЙ ПЕРИОД

Лушникова Ольга Викторовна

канд. биол. наук, ассистент, НГМА, г. Н. Новгород

Малиновский Дмитрий Сергеевич

Аспирант, ННГУ, г. Н. Новгород

E-mail: 

CHANGE OF BLOOD COAGULATION INDICES UNDER ZOOTOXINS INFLUENCE IN THE CONDITIONS OF HYPERTHERMIA AND DURING POST HYPERTHERMIC PERIOD

Lushnikova Olga Viktorovna

Candidate of Biological Sciences, assistant of State Medical Academy of Nizhni Novgorod

Malinovski Dmitry Sergeevich

Graduate student of Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod

АННОТАЦИЯ

Цель: изучение влияния зоотоксинов и гипертермии на показатели свёртывающей системы крови крыс. Метод: тромбоэластография. Результат: пчелиный яд в условиях нормотермии влияет на все фазы свёртывания крови, вызывая гипокоагуляцию, яд щитомордника вызывает гиперкоагуляцию, а жабий яд не влияет на свёртывание крови. Тепловая экспозиция сопровождается гиперкоагуляцией, как при введении физиологического раствора контроль), так и при введении пчелиного яда и яда щитомордника. Во всех экспериментальных группах в постгипертермический период наступает нормализация показателей тромбоэластограммы. Выводы: гипертермия вызывает гиперкоагуляцию в контроле и при введении зоотоксинов.

ABSTRACT

Objective: to study influence of zootoxins and hyperthermia on rats’ blood coagulation system indices. Approach: thromboelastography. Result: inducing hypocoagulation, apitoxin under the conditions of normothermia influences all the blood coagulation periods; copperhead snake’s venom causes hypercoagulation; while anuran’s venom does not affect blood coagulation. Thermal exposure is accompanied by hypercoagulation while saline infusion as well as while apitoxin and copperhead snake’s venom’s infusion. During post hyperthermic period there comes normalization of thromboelastogram indices in all experimental groups. Conclusion: hyperthermia causes hypercoagulation under control and while zootoxins infusion.

Ключевые слова: гипертермия; зоотоксины; свёртывание крови.

Key words: hyperthermia; zootoxins; blood coagulation.

Известно, что пчелиный яд обладает хорошо выраженной антикоагулянтной активностью [4]. Исследования автора, проведенные in vitro, позволяют утверждать, что пчелиный яд замедляет свертывание крови, удлиняет протромбиновое время и угнетает тромбопластическую активность крови. Замедление свертывания крови происходит за счет инактивации тканевого тромбопластина и торможения образования плазменного тромбопластина, вследствие угнетения факторов V, VII, VIII, XI, XII. Причем, чем больше концентрация яда, тем сильнее нарушается процесс свертывания крови. Данные тромбоэластографии указывают на изменение функциональной активности тромбоцитов и угнетение образования тромбопластина. На фибриноген пчелиный яд не действует и, следовательно, не влияет на третью фазу свертывания крови. По мнению английских авторов, противосвертывающая активность пчелиного яда обусловлена формированием гидролитического комплекса между антикоагулянтными фосфолипазами и фосфатидилсерином мембраны тромбоцитов.

Ряд исследований, проведённых в разных странах, позволил выяснить механизмы действия ряда гемокоагулирующих змеиных ядов, к которым, в частности, относится и яд щитомордника восточного. Характер гемокоагулирующего действия змеиных ядов в большей степени зависит от способа исследования in vivo или in vitro, возраста отравленного животного и человека. При введении в организм яд большинства гадюковых и гремучих змей оказывает двухфазное действие на свёртываемость крови — вначале вызывает внутрисосудистое свёртывание, а затем кровь теряет на длительной время способность к свёртыванию. Большинство коагулирующих протеаз змеиных ядов отщепляют от фибриногена 2 фибринопептида (вместо 4), что приводит к агрегации фибринмономера с образованием непрочного сгустка. Кроме того, большинство змеиных протеаз не активируют фактор XIII, вследствие чего образующийся сгусток не подвергается ретракции и легко лизируется плазмином [5].

Исследование гемостатических свойств яда жабы in vitro показало, что добавление жабьего яда в разведении 1:10³ не вызывает изменений показателей тромбоэластограммы по сравнению с контролем [3].

Выбор зоотоксинов для проведения исследований по изучению тромбоэластографических показателей в условиях гипертермии и в постгипертермический период был обусловлен тем, что пчелиный яд, является антикоагулянтом, яд щитомордника — коагулянтом, а жабий яд — не влияет на процесс свёртывания крови.

Исследование влияния зоотоксинов и высокой внешней температуры на систему свертывания крови проводилось на анализаторе гемокоагуляции механическом АГКМ 1-01, тромбоэластографическим способом. Процесс свертывания крови регистрируется в аналоговой форме на ленте самописца в виде тромбоэластограммы (ТЭГ), в цифровой форме измеряются время реакции и площадь ТЭГ в течение 15 мин после окончания времени реакции. Исследование проводилось на цитратной крови в микрообъеме (0,10±0,0025 мл). Кровь, взятая из хвостовой вены животных, исследовалась в динамике: до гипертермии, во время гипертермии и через 1, 6 и 24 часа после тепловой экспозиции [2].

Статистическая обработка экспериментальных данных была выполнена с помощью программы «Биостат». Для сравнения нескольких групп использовали однофакторный дисперсионный анализ и критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнений [1].

В контрольных экспериментах при внутрибрюшинном введении физиологического раствора в условиях гипертермии общее время свёртывания крови снижается с 14,6±0,7 мин до 12,2±1,0 мин, однако эти различия недостоверны. В постгипертермический период наблюдается тенденция восстановления параметров общего времени свёртывания крови (рис. 1).

Введение пчелиного яда в дозе 2 мг/кг в условиях нормотермии (20°С) увеличивает время свёртывания крови с 14,6±0,7 мин в контроле до 37,2±2,9 мин. В условиях высокой внешней температуры (50°С) показатель общего времени свёртывания крови снижается относительно нормотермии до 18,7±2,1 мин, но остаётся повышенным относительно контрольных величин. В постгипертермический период наблюдается тенденция к нормализации гемостаза, а через 24 часа после тепловой экспозиции в течение 25 мин время свёртывания крови не отличается от контрольных величин (рис. 1).

Иная картина наблюдается при введении яда щитомордника в дозе 4 мг/кг. В условиях нормотермии инъекция яда сопровождается снижением общего времени свёртывания крови с 14,6±0,7 мин в контроле до 10,5±0,9 мин. При тепловой экспозиции происходит дальнейшее снижение показателя общего времени свёртывания крови до 8,5±1,0 мин. В течение последующих суток время свёртывания крови возвращается к норме (рис. 1).

Введение жабьего яда в дозе 2 мг/кг сопровождается изменениями, характерными для контрольной серии экспериментов (рис. 1).

Рисунок 1. Изменение показателей общего времени свертывания крови Т (мин) в условиях гипертермии и в постгипертермический период

1 — контроль (физиологический раствор)

2 — пчелиный яд (2 мг/кг)

3 — яд щитомордника (4 мг/кг)

4 — жабий яд (2 мг/кг)

* — Различия между контрольными и экспериментальными

группами статистически значимы (р≤ 0,05)

Пусковым механизмом свёртывания крови является образование тромбопластина, которое оценивается временем реакции и характеризует первую невидимую фазу свёртывания крови.

Введение пчелиного яда в дозе 2 мг/кг в условиях нормотермии сопровождается увеличением времени реакции с 2,3±0,1 мин в контроле до 18,2±3,5 мин. При температурной экспозиции в течение 25 мин показатель времени реакции снижается до 5,0±0,6 мин, оставаясь, тем не менее, выше контрольных величин. Через 6 часов после тепловой экспозиции показатель времени реакции вновь увеличивается до 11,8±2,7 мин, а через 24 часа он возвращается к исходным величинам (рис. 2).

Рисунок 2. Изменение показателей времени реакции (r) в условиях гипертермии и в постгипертермический период (мин)

1 — контроль (физиологический раствор)

2 — пчелиный яд (2 мг/кг)

3 — яд щитомордника (4 мг/кг)

4 — жабий яд (2 мг/кг)

* - Различия между контрольными и экспериментальными

группами статистически значимы (р≤ 0,05)

В условиях нормотермии яд щитомордника в дозе 4 мг/кг достоверно снижает показатель времени реакции, что показывает увеличение скорости образования тромбопластина. В условиях гипертермии контрольный показатель и показатель времени реакции практически соответствуют друг другу. Через 6 часов после тепловой экспозиции показатель времени реакции достоверно увеличивается, достигая 4,3±0,9 мин. Через 24 часа этот показатель не отличается от контрольных величин (рис. 2).

Кривая изменений показателя времени реакции при введении жабьего яда как в условиях гипертермии, так и в постгипертермический период практически совпадает с изменениями, происходящими в контрольной серии экспериментов (рис. 2).

О начале формирования сгустка можно судить по величине «К». Изменение этого параметра зависит от концентрации тромбина и фибриногена. В отрезок времени «К», образовавшийся тромбин переводит фибриноген в фибрин, поэтому параметр «К» ещё называют тромбоэластографической константой тромбина. Таким образом, увеличение времени формирования сгустка говорит о гипокоагуляции рис. 3).

Рисунок 3. Изменение времени начала формирования сгустка (К) в условиях гипертермии и в постгипертермический период (мин)

1 — контроль (физиологический раствор)

2 — пчелиный яд (2 мг/кг)

3 — яд щитомордника (4 мг/кг)

4 — жабий яд (2 мг/кг)

* — р<0.05 по сравнению с контролем.

При введении пчелиного яда в дозе 2 мг/кг в условиях нормотермии величина «К» увеличивается с 1,3±0,4 мин в контроле до 2,4±0,1 мин. В условиях высокой внешней температуры происходит снижение времени формирования сгустка, как в контрольной серии, так и в условиях эксперимента. В течение 24 ч. параметры «К» возвращаются к исходным величинам (рис. 3).

Введение яда щитомордника при нормотермии более чем в два раза снижает показатели времени формирования сгустка, а инъекция жабьего яда сопровождается при всех условиях эксперимента стабильными показателями «К», достоверно не отличающимися от контрольных величин (рис. 3).

Таким образом, исходя из полученных экспериментальных данных, можно сказать, что пчелиный яд в условиях нормотермии влияет на все фазы свёртывания крови, вызывая гипокоагуляцию, яд щитомордника вызывает гиперкоагуляцию, а жабий яд не влияет на свёртывание крови. Тепловая экспозиция сопровождается гиперкоагуляцией, как при введении физиологического раствора, так и при введении пчелиного яда и яда щитомордника. Во всех экспериментальных группах в постгипертермический период наступает нормализация показателей тромбоэластограммы.

Список литературы:

1.Гланц Стентон. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М.: Практика, 1999. — 459 с.

2.Звонкова М.Б., Хомутов А.Е., Бутылин А.Г., Пурсанов К.А., Слободянюк В.С., Перепелюк З.В. Влияние высоких доз гепарина на процессы гемостаза // Вестник Нижегородского госуниверситета. — 2010. — № 2(2). — С. 636—641.

3.Омаров Ш.М. Патофизиологические аспекты антикоагулирующего действия зоотоксинов и их инградиентов: автореф. дисс. . . докт. мед. наук: 14.00.16 / Омаров Шамиль Магомедович. — М., 1980. — 32 с.

4.Омаров Ш.М. Патофизиологические аспекты антикоагуляционного действия пчелиного яда и его ингридиентов // Механизмы действия зоотоксинов. — Горький: ГГУ, 1986. С. 54—61.

5.Орлов Б.Н., Гелашвили Д.Б. Зоотоксинология. М.: Высшая школа, 1985. — 280 с.