ЭКСТРАКЦИЯ  ФЛАВОНОИДОВ  ИЗ  ЛЕКАРСТВЕННОГО  РАСТИТЕЛЬНОГО  СЫРЬЯ  ВОДНЫМИ  РАСТВОРАМИ  ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ  ВЕЩЕСТВ

Ломако  Елена  Викторовна

студент  5  курса,  фармацевтический  факультет  ВГМУ,  Республика  Белоруссия,  г.  Витебск

Кузьмичева  Наталья  Алексеевна

научный  руководитель,  канд.  фармацевтических  наук,  доцент  кафедры  фармакогнозии  ВГМУ,  Республика  Белоруссия,  г.  Витебск

Лекарственные  растения  являются  популярным  источником  сырья  для  получения  лекарственных  средств.  Очень  часто  стандартизация  такого  сырья  ведется  по  содержанию  в  нем  флавоноидов.  Государственная  Фармакопея  Республики  Беларусь  чаще  всего  рекомендует  спектрофотометрический  метод  определения  количественного  содержания  с  использованием  водных  растворов  этанола  для  экстракции  флавоноидов  из  сырья  [1].  Этанол  в  концентрации  50-70  %  действительно  является  неплохим  экстрагентом  для  флавоноидов,  но  извлекает  вместе  с  ними  и  большое  количество  сопутствующих  веществ,  мешающих  проведению  анализа.  В  то  же  время,  за  последние  годы  в  литературе  все  чаще  появляются  данные  об  эффективности  применения  для  этих  целей  поверхностно-активных  веществ.  Поверхностно-активные  вещества  применяются  как  в  капиллярном  электрофорезе  [2],  так  и  в  жидкостной  экстракции  под  давлением  (surfactant-assisted  pressurized  liquid  extraction)  [2,  3].  Наиболее  часто  применяются  цетилпиридиния  хлорид  и  натрия  додецилсульфат,  другие  ПАВ  изучены  в  меньшей  степени.

Ионогенные  (катионо-  и  анионогенные)  и  неионогенные  ПАВ  являются  общедоступными,  широко  применяются  как  эмульгаторы,  а  также  в  качестве  дезинфицирующих  и  антисептических  средств.

Цель:  определить  количественное  содержание  флавоноидов  в  экстрактах,  полученных  с  помощью  водных  растворов  различных  ПАВ.

Материалы  и  методы  исследования.  Листья  березы  и  ивы  остролистной  заготавливали  в  июне-июле  2013  г.  в  окрестностях  г.  Витебска.  Сушка  воздушно-теневая.  Образцы  измельчали  до  частиц  размером  1—2  мм.  Соотношение  сырье  —  экстрагент  1:100.  Экстракцию  проводили  при  нагревании  на  водяной  бане  в  течение  30  мин.  В  качестве  экстрагентов  использовали  водные  растворы  Твин-80,  полипропиленгликоля,  додецилсульфата  натрия,  полигексаметиленбигуанида  гидрохлорида,  бензилдиметил-[3-(миристоиламино)-пропил]  аммония  хлорида  (мирамистин),  диметилсульфоксида  различной  концентрации.  Растворы  ПАВ  готовили  растворением  препаратов  в  воде  очищенной,  из  концентрированных  растворов  готовили  серии  разведений.  Раствор  алюминия  хлорида  2  %  готовили  растворением  навески  в  70  %  растворе  этилового  спирта  в  воде.  Ацетатный  буферный  раствор  (рН  3)  готовили,  прибавляя  к  10  мл  1  М  NaOH  57  мл  60  г/л  CH₃COOH  и  доводя  до  100  мл.

Количественное  содержание  флавоноидов  в  полученных  экстрактах  определяли  методом  дифферециальной  спектрофотометрии:  к  0,2  мл  извлечения  прибавляли  0,2  мл  2  %  раствора  алюминия  хлорида  в  этаноле,  0,6  мл  ацетатного  буфера  (рН  3)  и  4  мл  воды  очищенной.  Компенсационный  раствор  состоял  из  0,2  мл  извлечения,  0,6  мл  ацетатного  буфера  (рН  3)  и  4,2  мл  воды  очищенной.  Через  40  мин  измеряли  оптическую  плотность  при  длине  волны  411  нм.  В  качестве  контроля  использовали  экстракты  из  тех  же  образцов  листьев,  приготовленные  аналогично  с  использованием  70  %  этанола,  а  также  растворы  в  этаноле  стандартных  образцов  гиперозида  500  мкг/мл  или  лютеолин-7-О-глюкозида  500  мкг/мл.  Рассчитывали  количественное  содержание  суммы  флавоноидов  в  листьях  березы  в  пересчете  на  гиперозид,  а  в  листьях  ивы  остролистной  в  пересчете  на  лютеолин-7-О-глюкозид.

Результаты  собственных  исследований.

Результаты  определения  суммы  флавоноидов  в  полученных  экстрактах  представлены  в  таблице  1. 

Таблица  1. 

Содержание  флавоноидов  в  экстрактах,  полученных  при  помощи  различных  ПАВ,  в  сравнении  с  этанольным  экстрактом

Количественное  содержание  суммы  флавоноидов  в  экстрактах,  полученных  с  помощью  0,5  %  раствора  Твин-80,  0,5  %  раствора  полипропиленгликоля-2000  оказалось  ниже,  а  0,01  %  раствора  додецилсульфата  натрия,  0,1  %  раствора  полигексаметиленбигуанида  гидрохлорида,  1  %  раствора  диметилсульфоксида,  0,01  %  раствора  бензилдиметил-[3-(миристоиламино)-пропил]  аммония  хлорида  выше,  чем  в  этанольных  извлечениях. 

При  изучении  ряда  разведений  бензилдиметил-[3-(миристоиламино)  пропил]  аммония  хлорида  наивысшее  содержание  флавоноидов  обнаружил  экстракт,  полученный  с  помощью  0,0005  %  раствора.  Для  полигексаметиленбигуанида  гидрохлорида  наиболее  эффективной  оказалась  концентрация  0,35  %,  причем  раствор  в  воде  очищенной  показал  более  высокий  результат,  чем  водно-спиртовой  раствор  той  же  концентрации.  Для  диметилсульфоксида  наблюдается  два  максимума  —  0,001  %  и  20  %,  что  может  свидетельствовать  о  смене  механизма  взаимодействия  данного  ПАВ  с  флавоноидами  при  экстракции.  Раствор  додецилсульфата  натрия  в  концентрации  0,01  %  также  показал  более  высокий  результат  по  сравнению  со  спиртовым  извлечением,  однако  меньше,  чем  у  других  ПАВ.  Исходя  из  литературных  данных  и  результатов  собственных  исследований,  можно  сделать  вывод,  что  катионогенные  ПАВ,  такие  как  цетилпиридиния  хлорид  и  бензилдиметил-[3-(миристоиламино)  пропил]  аммония  хлорид  в  целом  более  эффективны  в  экстракции  флавоноидов  из  лекарственного  растительного  сырья  [2],  что  дает  основания  для  изучения  механизма  их  взаимодействия  с  определяемыми  веществами  флавоноидной  природы. 

Следует  принять  во  внимание,  что  в  присутствии  ПАВ  фотометрическая  реакция  с  алюминия  хлоридом  эффективно  протекает  в  водной  среде,  следовательно,  не  требуется  применение  спирта  для  проведения  анализа.  Так  как  спирт  этиловый  в  аптечных  организациях  находится  на  предметно-количественном  учете,  является  фармакологически  неиндифферентным  веществом  и  может  вызывать  привыкание,  возможность  избежать  его  применения  в  анализе  увеличивает  интерес  к  разработке  методик  экстракции  водными  растворами  ПАВ.

Таким  образом,  можно  отметить,  что  наиболее  эффективным  экстрагентом  флавоноидов  из  листьев  березы  и  ивы  остролистной  оказалось  катионогенное  поверхностно-активное  вещество  —  бензилдиметил-[3-(миристоиламино)  пропил]  аммония  хлорид  (отношение  активности  ПАВ  по  сравнению  с  этанольным  извлечением  к  концентрации  ПАВ  8,5х10⁵),  также  заметную  активность  проявил  неионогенный  ПАВ  диметилсульфоксид  (отношение  3,4х10⁵).  Для  додецилсульфата  натрия  этот  индекс  составил  1,2х10⁴,  а  для  полиметиленбигуанида  гидрохлорида  —  всего  1,1х10³.

Список  литературы:

1.Государственная  фармакопея  Республики  Беларусь.  В  3  т.  Т.  2.  Контроль  качества  вспомогательных  веществ  и  лекарственного  растительного  сырья.  /М-во  здравоохранения  Респ.  Беларусь,  УП  «Центр  экспертиз  и  испытаний  в  здравоохранении»;  под  общ.ред.  А.А.  Шерякова.  Молодечно:  Типография  «Победа»,2008.  —  472  с.

2.Flavonoids:  chemistry,  biochemistry,  and  applications  /  edited  by  Qyvind  M.  Andersen  and  Kenneth  R.  Markham.  Р.  2006  CRC  Press  Taylor  &  Francis  Group.  Р.  30,  108—109.

3.Yong  Qin  Chang,  Swee  Ngin  Tan,  Jean  W.H.  Yong,  Liya  Ge.  Surfactant-assisted  pressurized  liquid  extraction  for  determination  of  flavonoids  from  Costusspeciosus  by  micellarelectrokinetic  chromatography.  J.  Sep.  Sci.  2011,  34,  462—468.