КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В СЫРЬЕ БОРЩЕВИКА СОСНОВСКОГО ХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ И МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Наибольший интерес при создании новых лекарственных препаратов и биологически активных добавок представляют соединения вторичного метаболизма растений, обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности [1].

Борщевик Сосновского (Heracleum Sosnowskyi), в этом смысле, может выступать перспективным растением для использования его в терапевтических целях. Растения рода Heracleum обладают противосудорожными, спазмолитическими, антисептическими, противовоспалительными, антибактериальными и вяжущими свойствами, оказывают болеутоляющее и успокаивающее действие, положительно влияют на аппетит и пищеварение, снимают зуд и выступают в качестве желчегонного средства. Эфирное масло, полученное из плодов борщевика, показывает фунгицидную активность [5, 8].

Токсические свойства Борщевика Сосновского могут быть связаны с содержанием в нем алкалоидов, тритерпеновых сапонинов, флавоноидов, фуранокумаринов (бергаптен, изобергаптен, изопимпинелин, ксантотоксин, псорален и др.) [2,7].

Большое значение в медицине имеет использование флавоноидов, которое обусловлено широким диапазоном их биологического действия.

Цель настоящего исследования - установить в сырье борщевика Сосновского наличие флавоноидов химическими методами и методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Приготовление извлечения из растительного сырья.

1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 50 мл и заливают 20 мл этилового спирта. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения полученное извлечение фильтровали через бумажный фильтр и подвергали соответствующими химическими реакциями.

Проведение качественных реакций. [3, 6, 9]

1. Цианидиновая проба.

К 2 мл извлечения добавляли 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты и 10-15 мг цинковой пыли, появление через 3-5 мин оранжевого окрашивания свидетельствует о наличии флавоноидов в растительном сырье (Рисунок 1).

2. Реакция с раствором основного ацетат свинца.

К 1 мл извлечения добавляли 3-5 капель 2 % основного ацетата свинца. Появление желто-оранжевого окрашивания подтверждает присутствие в листьях Борщевика Сосновского флавоноидов (Рисунок 2).

С целью обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется хроматография на бумаге и/или в тонком слое сорбента. Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществляется просматриванием их в УФ-свете [4].

Для идентификации рутина получали спиртовое извлечение, как описано выше. Для проведения тонкослойной хроматографии использовали в качестве «свидетелей» стандартные образцы рутина и кверцетина. Разделение осуществляли в системах растворителей этилацетат-уксусная кислота - вода в соотношении 10:20:60 на пластинке Sorbfil марки ПТСХ-П-А-УФ (ТУ 4215-002-43636866-2007).

На расстоянии 1 см от края пластинки отмечали линию старта, на которую наносили исследуемое извлечение в количестве 10 мкл и спиртовые растворы «свидетелей». При этом, диаметр наносимого пятна не превышал 5 мм. После высыхания наносимых образцов, пластинку помещали в хроматографическую камеру до достижения линии финиша, которую отмечали одновременно с линией старта. Экспозиция 30-40 мин. Затем хроматограмму высушивали и просматривали в УФ-свете. После этого детектировали с помощью 10% спиртового раствора хлорида алюминия.

Идентификацию анализируемых веществ проводили по окраске зон адсорбции (пятнам) на хроматограмме испытуемого раствора в сравнении с таковой растворов «свидетелей».

Результаты хроматографического определения позволили установить в листьях борщевика Сосновского рутин, который идентифицировали по совпадению положения пятен испытуемого раствора и его стандартного образца. Хроматограмма, полученная в ходе анализа изображена на Рисунке 3.

Рисунок 3. Хроматографические пластинки с нанесенными извлечением растительного сырья борщевика Сосновского и стандартными образцами – рутина, кверцетина.

Список литературы:

1. Быков В.А. Эффективность разработки лекарственных средств из растительного сырья / В.А. Быков, В.К. Колхир, С.А. Вичканова // Химия, технология, медицина: Труды ВИЛАР. - М., 2000. - С.177-185.
2. Зориков П. С., Черняк Д. М. Токсичность водного извлечения из H. sosnowskyi и H. Moellendorffii // Естественные и технические науки. -  2012. - № 6 (62). С. 163-166.
3. Копытова Н.А., Прохоров В.Н., Ламан Н.А., Росоленко С.И., Тимофеева И.В. Количественно определение суммы фенольных соединение в тканях борщевика Сосновского (Heracleum sosnowskyi Manden.) // Регуляция роста, развития и продуктивности растений: Тез. докл. VIII Международной научной конф., г. Минск, 28-31 октября 2015 / Национальная академия наук Беларуси, Институт экспериментальной ботаники им. В.Ф. Купревича, Белорусское общественное объединение физиологов растений; науч. ред. Н.А. Ламан.- Минск: Колоград, 2015. - с.61.
4. Мальцева А.А.  Тонкослойная хроматография в анализе флавоноидов растительных объектов / А. А. Мальцева, О.В. Тринеева и др. // Фармация. – 2013. - № 1  - С. 13-16.
5. Мусихин П.В., Сигаев А.И. Исследование физических свойств и химического состава борщевика Сосновского и получение из него волокнистого полуфабриката // Фундаментальные исследования. – 2006. - №3. – С. 65–67.
6. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: учеб. пособие/ Э.Н.Аксенова, О П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др./ Под ред. А.П. Арзамасцева. 3-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 2001. – 384 с.
7. Смирнов А.А., Корнева И.Г. Последствия интродукции Heracleum sosnowskyi (Apiaceae) на Сахалине // Растительные ресурсы. -2010.- Вып. 2. - С. 18-23.
8. Ткаченко К.Г. Эфирные масла корней некоторых видов рода Heracleum L. // Химия природных соединений. - 2009. - № 4. - С. 487-489.
9. Тюкавкина Н.А. Органическая химия: учебник для вузов: В 2 кн. Кн. 2: Специальный курс / Н.А. Тюкавкина, С.Э. Зурабян, В.Л. Белобородов.- М.: Дрофа, 2008. - 592 с.