ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЯДЕРНЫХ КЛЕТОК КРОВИ У ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ХОЛОДНОКРОВНЫХ В УСЛОВИЯХ УМЕРЕННОЙ ГИПОТОНИИ

Чернявских Светлана Дмитриевна

канд. биол. наук, доцент кафедры анатомии и физиологии живых организмов Белгородского государственного национального исследовательского университета «БелГУ»,г. Белгород

Адамова Валерия Владиславовна

магистрант Белгородского государственного национального исследовательского университета «БелГУ»,г. Белгород

Буковцова Ирина Сергеевна

магистрант Белгородского государственного национального исследовательского университета «БелГУ»,г. Белгород

Е-mail: vla3140@yandex.ru

Общеизвестно, что у высших позвоночных в процессе фагоци­тоза принимают непосредственное участие два типа лейкоцитов: полиморфноядерные гранулоциты и макрофаги [13, с. 14]. У низших позвоночных защитную функцию наряду с лейкоцитами выполняют ядерные эритроциты [16, с. 143—144]. Известно, что клетки различного происхождения по-разному реагируют на понижение осмолярности среды [12, с. 14]. При этом способность клеток крови регулировать свой объем и форму влияет на их функционирование, в частности, на фагоцитарную активность [3, с. 695]. Данный параметр у ядерных гемоцитов низших позвоночных, в том числе и у холодно­кровных, изучен недостаточно. Необходимость такого рода исследований обусловлена как теоретическим (анализ и сравнительная оценка эволюционных механизмов приспособительных реакций организма к экстремальным факторам среды), так и практическим (выявление информативных критериев поэтапных нарушений на клеточном уровне, разработка эффективных мер повышения адаптационных возможностей организма) интересом [12, с. 40].

Целью работы было изучение фагоцитарной активности (ФА) ядерных эритроцитов и лейкоцитов у представителей холоднокровных в условиях умеренной гипотонии.

Материал и методы исследования

В работе использовали периферическую кровь лягушки озёрной (Rana ridibunda Pall.) (30 особей) и сазана (Cyprinus carpio) (30 особей). Животных предварительно наркотизировали эфиром. Забор крови проводили у лягушки из сердца, у сазана — из хвостовой вены. В качестве антикоагулянта использовали гепарин в количестве 10 ед./мл. Полученную кровь центрифугировали 4 мин. при 400 g. Собирали обогащенную лейкоцитами часть плазмы и лейкоцитарное кольцо. Отдельно смесь лейкоцитов и эритроцитов разбавляли умеренно гипотоническим раствором NaCl в соотношении 1:10 (0,3 % для лягушки и 0,4 % для сазана). Смесь гемоцитов с объектами фагоцитарной реакции (1:50) помещали в пробирки и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин., встряхивая пробирку с гемоконцентратом через каждые 5 мин. В качестве объектов фагоцитоза использовали дрожжи (Saccaromyces cerevisiae), сенную палочку (Bacillus subtilis) и агломерированные частицы латекса диаметром 0,8 мкм [2, с. 122; 4, с. 27; 9, с. 58—59; 10, с. 20;11, с. 52; 15, с. 25]. По окончании инкубации делали мазки, фиксировали клетки спиртом, окрашивали азур-эозином и подсчи­тывали фагоцитарную активность гемоцитов [1, с. 30—32].

Полученный цифровой материал обрабатывали статистически с использованием персонального компьютера. При определении достоверности разницы между группами использовали аргумент Стъюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

В результате проведенных исследований установлено, что в условиях умеренной гипотонии фагоцитарная активность лейкоцитов Cyprinus carpio к Saccaromyces cerevisiae на 40 % выше по сравнению с эритроцитами (табл. 1).

Таблица 1.

Показатели фагоцитарной активности гемоцитовCyprinuscarpio, %

Примечание: здесь и в табл. 2: * — по сравнению с дрожжами,
" — по сравнению с сенной палочкой, ’ — ФА эритроцитов по сравнению с лейкоцитами по t-критерию Стьюдента (p≤0,05).

ФА красных клеток крови сазана к клеткам дрожжей и сенной палочке на 50 и 54 % выше, чем к частицам латекса. У лейкоцитов Cyprinus carpio фагоцитарная активность в отношении Saccaromyces cerevisiae и Bacillussubtilis на 58 и 30 % выше по сравнению с латексом. В свою очередь, поглотительная способность белых клеток крови сазана к дрожжам на 41 % выше по сравнению с сенной палочкой.

Показатели фагоцитарной активности лейкоцитовRanaridibundaPall. в отношении Saccaromyces cerevisiae, Bacillussubtilis и латекса на 51, 55 и 74 % выше, чем у эритроцитов (табл. 2).

Таблица 2.

Показатели фагоцитарной активности гемоцитовRanaridibunda, %

Красными клетками крови лягушки дрожжи и сенная палочка поглощаются на 62 и 52 % активнее, чем частицы латекса, белыми — на 28 и 17 % соответственно.

Более высокие показатели фагоцитарной активности лейкоцитов по сравнению с эритроцитами у подопытных животных, возможно, обусловлены функциональной ролью белых клеток крови. Известно, что лейкоциты в организме обеспечивают иммунный ответ [7, с. 102]. Кроме того, клетки данного пула обладают большим мембранным резервом, чем эритроциты [5, с. 25], что позволяет им быстрее реагировать на изменения осмолярности среды.

Более высокая ФА гемоцитов подопытных животных к Saccaromyces cerevisiae и Bacillussubtilis по сравнению с латексом может быть обусловлена присутствием на поверхности клеточной стенки дрожжей галактоманнана, зимозана и других белков, которые могут связываться с рецепторами мембран лейкоцитов [14, с. 47], а также наличием у Cyprinus carpio и Rana ridibunda Pall. видового иммунитета к сенной палочке, которая широко распространена в их естественной среде обитания [2, с. 125].

Список литературы:

1. Александров М.Т., Кудрявицкий А.И., Румянцева Е.Г., Климова Л.А., Ларская М.В. Метод вычисления абсолютных показателей фагоцитоза // Лабораторное дело. — 1988. — № 9. — С. 30—32.
2. Воробьев А.А., Кривошеник Ю.С., Быков А.С. и др. Основы микробио­логии, вирусологии и иммунологии. — М.: Мастерство, 2001. — 221 с.
3. Галкин А.А. Локомоторные свойства нейтрофилов и механизмы регуляции их движения // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117. — Вып. 6. — С. 690—703.
4. Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология. — М.: Мир, 2002. — 589 с.
5. Головко С.И., Фёдорова М.З., Чернявских С.Д. Мембранный резерв клеток крови позвоночных животных // Тез.докл. VI Сибирского Физиол. съезда. — Барнаул, 2008. — 25 с.
6. Дроздов А.А., Дроздова М. В. Заболевания крови. Полный справочник. — М.: 2008. — 327 с.
7. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология. — М.: Медицина, 1990. — 264 с.
8. Маянский А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы // Вестник РАМН. — 1993. — № 4. — С. 52—55.
9. Потапова С.Г., Хрустиков В.С., Демидова Н.В., Козинец Г.И. Изучение поглотительной способности нейтрофилов крови с использованием инертных частиц латекса // Проблемы гематологии и переливания крови. Т. XXII. — 1977. — № 9. — С. 58—59.
10. Сиротин А.А. Практикум по микробиологии. Учеб.пособие. Белгород: Издательство БелГУ, 2004. — 78 с.
11. Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. — М.: Медицина, 1978. — 200 с.
12. Федорова М.З. Реактивность лейкоцитов крови при различных функциональных нарушениях. — Москва-Ярославль, 2001. — 68 с.
13. Фримель Х., Брок Й. Основы иммунологии. Пер. с нем. — М.: Мир, 1986. — 254 с.
14. Черношей Д.А., Кирильчик Е.Ю., Канашкова Т.А. Распознавание в системе врожденного иммунитета: учеб.-метод. пособие. — Минск.: БГМУ, 2009. — 66 с.
15. Eeden S.F., Klut M.E., Walker B.A.M., Hogg J.C. The use of flow cytometry to measure neutrophil function // J. of Immun. Meth., 1999. — Vol. 232. — P. 23—43.
16.  Prunesco P. Natural and Experimental Phagocitosis by Erythrocytes in Amfibians // Naturte New Biology, 1971. — P. 143—44.