МЕТОДИКА ОЦЕНКИ ВИДОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ МИКРОФЛОРЫ, ВЫДЕЛЕННОЙ С ЭПИТЕЛИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ РТА, ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СЪЁМНЫХ ПРОТЕЗОВ

АННОТАЦИЯ

Изучение микробиоты полости рта у пациентов, использующих ортопедические конструкции, имеет важное клиническое значение [1-4]. Съёмные протезы, как и другие инородные тела в полости рта, способны влиять на состав и баланс микрофлоры, и наличие правильной гигиены может положительно влиять на здоровье зубочелюстной системы и всего организма в целом [5,6]. Цель данного исследования — оценить видовое разнообразие микроорганизмов, колонизирующих слизистую оболочку рта у пациентов со съёмными протезами различной конструкции, а также оценить эффективность современной гигиены с помощью специальных средств для очистки протезов.

ABSTRACT

The study of oral microbiota in patients using orthopedic structures is of important clinical significance [1-4]. Removable dentures, as well as other foreign bodies in the oral cavity, can affect the composition and balance of the microflora, and the presence of proper hygiene can have a positive effect on the health of the dentition and the whole body [5,6]. The purpose of this study is to evaluate the species diversity of microorganisms colonizing the oral mucosa in patients with removable dentures of various designs, as well as to evaluate the effectiveness of modern hygiene using special products for cleaning dentures.

Ключевые слова: микробиота, съёмные протезы, гигиена ортопедических конструкций, протезы на имплантатах.

Keywords: microbiota, removable dentures, hygiene of orthopedic structures, implant-supported dentures.

Материалы и методы

Исследование проведено на кафедре общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии ФГБОУ ВО «СамГМУ» Минздрава России.

Группы исследования:

• основная группа — 22 пациента, которым были установлены съёмные протезы с опорой на дентальные имплантаты;
• контрольная группа — 16 пациентов, использующих традиционные съёмные протезы с опорой на зубы.

Сроки оценки: через 6 месяцев после ортопедического лечения.

Сбор материала: стерильными ватными тампонами со слизистой оболочки рта. Транспортировка в изотермических условиях в течение 2 часов в жидкой транспортной среде Эймса (Cliniswab, Италия).

Культивирование: посев на плотные питательные среды:

• кровяной агар с бараньей кровью (HiMedia, Индия);
• универсальная хромогенная среда (HiMedia, Индия);
• селективная среда для выделения вейлонелл (HiMedia, Индия);
• селективная среда для выделения облигатных анаэробов (HiMedia, Индия);
• селективная среда для выделения клостридий (HiDesktop, Индия);
• селективная среда для выявления бифидо- и лактобактерий (HiMedia, Индия).

Культивирование проводили в течение 5 дней при температуре 37 °C с созданием аэробных и анаэробных условий (с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз», Инко, Россия).

Идентификация микроорганизмов: времяпролётная MALDI-ToF масс-спектрометрия (прибор Microflex LT, Bruker, Германия).

Оценка эффективности очищающих таблеток:

• приготовление инокулюма микроорганизмов до плотности 0,5 по стандарту мутности МакФарланда (≈1−2×10⁸ КОЕ/мл);
• двукратные и четырёхкратные разведения раствора очищающих таблеток для съёмных зубных протезов в бульоне Мюллера—Хинтона (96-луночные микропланшеты);
• инкубирование при 37 °C в течение суток;
• оценка роста микроорганизмов в проходящем свете.

Контрольные штаммы: S. aureus ATCC 25923 и S. pneumoniae ATCC 49619.

Данное исследование проводилось, после основного, где пациентам обеих групп уже предлагалась использовать специальные средства для улучшения гигиены полости рта, людям пользующихся съёмными протезами, с целью увидеть положительные изменения в использовании очищающих таблеток на условно-патогенную микрофлору, которая может повлиять на состояние полости рта, особенно на долговечность установленных имплантатов, на которые фиксируются съёмные протезы.

Классификация пародонтопатогенов по комплексам:

• «красный» комплекс: Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Tannerella forsythia;
• «оранжевый» комплекс: Campylobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Prevotella intermedia/nigrescens, Peptostreptococcus micros, Eubacterium nodatum, S. constellatus;
• «зелёный» комплекс: Aggregatibacter actinomycetemcomitans serotype A, Campylobacter concisus, Eikenella corrodens, Capnocytophaga spp.;
• «жёлтый» комплекс: S. sanguis, S. mitis, S. intermedius, S. gordonii;
• «пурпурный» комплекс: Veillonella parvula, Actinomyces odontolyticus, A. actinomycetemcomitans serotype B, Selenomonus noxia, Actinomyces naeslundii.

Статистический анализ: критерий χ² и точный критерий Фишера (p); статистически значимая связь при p < 0,05.

Результаты

Всего выделено 179 штаммов микроорганизмов:

• в основной группе — 72 штамма (40,2% от общего количества), в среднем 7,2 штамма от одного пациента;
• в контрольной группе — 107 штаммов (59,8%), в среднем 10,7 штамма от одного пациента.

В таблице 1 продемонстрированы значения КОЕ для основной и контрольной групп исследования и разница в КОЕ между контрольной группой и основной.

• Основная группа:
  
  • условно‑патогенные микроорганизмы: Staphylococcus aureus (4 штамма), Candida albicans (5 штаммов), Candida glabrata (2 штамма), Streptococcus anginosus (1 штамм);
  • представители «жёлтого» комплекса: Streptococcus gordonii (2 штамма), S. mitis (4 штамма), S. sanguinis (4 штамма), S. intermedius (1 штамм);
  • остальные 49 штаммов — представители нормальной микрофлоры (Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Rothia, Neisseria, Actinomyces, Gemella);
  • у 1 пациента не выявлено патогенных микроорганизмов.
• Контрольная группа:
  
  • преобладание стрептококков: S. anginosus (8 штаммов),

S. pneumoniae (1 штамм);

• другие условно‑патогенные микроорганизмы: S. aureus (1 штамм), C. albicans (4 штамма), C. tropicalis (1 штамм);
• представители пародонтопатогенных комплексов:
  • «жёлтый» комплекс: S. mitis (7 штаммов), S. sanguinis (2 штамма);
  • «пурпурный» комплекс: Veilonella parvula (2 штамма);
  • «оранжевый» комплекс: S. constellatus (6 штаммов).

В контрольной группе отмечены дисбиотические изменения микрофлоры по сравнению с основной группой (большее количество условно‑патогенных бактерий и пародонтопатогенов). Статистически достоверные различия выявлены для S. constellatus и S. anginosus (преобладание в контрольной группе).

Таблица 1.

Суммарная обсеменённость по микробиологическим комплексам

Оценка эффективности очищающих таблеток

Раствор таблеток для очищения съёмных протезов показал:

• полную эффективность в рекомендованной концентрации против всех исследуемых штаммов;
• снижение эффективности при двукратном разведении (рост 2 штаммов Candida, 1 штамма S. anginosus, 1 штамма S. intermedius);
• наименьшую эффективность при четырёхкратном разведении:
  
  • против Candida (4 штамма);
  • против условно‑патогенных стрептококков (3 штамма);
  • против стафилококков (6 штаммов).

В таблице 2 продемонстрирована эффективность очищающих таблеток.

Таблица 2.

 Эффективность очищающих таблеток для съёмных протезов по уровню КОЕ/мл.

Результаты исследования демонстрируют:

1. Меньшее видовое разнообразие и количество патогенных микроорганизмов у пациентов основной группы (съёмные протезы с опорой на имплантаты) по сравнению с контрольной группой.
2. Дисбиотические изменения в контрольной группе, указывающие на потенциальный риск развития воспалительных осложнений: периимплантитов, мукозитов.
3. Важность соблюдения рекомендаций по приготовлению и использованию растворов для очистки съёмных протезов, что снижает риск сохранения патогенных микроорганизмов на поверхности конструкций.

Выводы

1. Съёмные протезы с опорой на дентальные имплантаты ассоциированы с более благоприятным микробиологическим профилем слизистой оболочки рта по сравнению с традиционными съёмными протезами.
2. Раствор очищающих таблеток для съёмных протезов эффективен против широкого спектра микроорганизмов при строгом соблюдении инструкции по применению.
3. Дисбиотические изменения микрофлоры у пациентов с традиционными съёмными протезами требуют повышенного внимания к гигиеническим мероприятиям и мониторингу состояния полости рта.

Список литературы:

1. Тлустенко В. П., Байриков И. М., Трунин Д. А., Комлев С. С., Жестков А. В., Лямин А. В. Влияние различных видов съемных конструкций и дентальных имплантатов на микробиоценоз полости рта при ортопедическом лечении // Вестник РГМУ. 2019. №2.
2. Чесноков В. А., Chesnokova M.G. Микобиота слизистой оболочки полости рта и поверхности съемных акриловых пластиночных протезов при ортопедической реабилитации // Клиническая лабораторная диагностика. 2016. №2.
3. Кипарисова Диана Габбасовна, Нуриева Наталья Сергеевна, Кипарисов Юрий Сергеевич Оптимизация индивидуальной гигиены полости рта у пациентов со съемными ортопедическими конструкциями на дентальных мини-имплантатах // Вестник Смоленской государственной медицинской академии. 2018. №3.
4. Садыкова Ольга Масловиевна, Жолудев Сергей Егорович, Никольский Вячеслав Юрьевич, Андреева Светлана Дмитриевна, Дьяконов Дмитрий Андреевич, Падерина Наталья Олеговна Морфологические особенности слизистой оболочки протезного ложа при воздействии бальнеологических факторов // Проблемы стоматологии. 2019. №1.
5. Кипарисова Д. Г. Способы оптимизации гигиенического ухода за съемными и несъемными ортопедическими конструкциями на мини-имплантатах. Обзор литературы // Пермский медицинский журнал. 2015. №5.
6. Луцкая Ирина Константиновна, Зиновенко Ольга Геннадьевна Особенности индивидуальной гигиены полости рта у пациентов с имплантатами // Современная стоматология. 2016. №2 (63).