ТЕХНОЛОГИЯ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ «ПРЕМЕЛТОП» И «РЕМЕЛТОП»

Воробьева Валентина Михайловна

канд. фармацевт. наук, доцент АГМУ, г. Барнаул

E-mail: vmv@agmu.ru

Полухин Дмитрий Геннадьевич

канд. мед. наук, ассистент АГМУ, г. Барнаул

E-mail: poluhin_dg@mail.ru

В совместных исследованиях кафедр фармацевтической технологии и детской хирургии АГМУ в соответствии с современными требованиями, на основании дифференцированного подхода в зависимости от фазы ожогового процесса разработаны составы для лечения ожогов пищевода для этапа воспаления (состав № 1) и для этапа развития грануляций (состав № 2) [8]. Предложенные составы обладают необходимой вязкостью, адекватными органолептическими свойствами, оказывают позитивное влияние на процесс заживления модельных ран лабораторных животных [2, с. 31—34]. Применение составов в клинике детской хирургии АГМУ для местной терапии химических ожогов пищевода II—III степеней показало, что стеноз пищевода возник только в одном случае (3,1 %), остальные дети (31 человек — 96,9 %) выздоровели [6, с. 4—7].

Вместе с тем в процессе технологических исследований установлено, что составы, представляющие собой суспензионно-гелевые композиции, имеют небольшой срок годности, который не превышает 14 суток. Известно, что увеличить срок годности суспензии позволяет получение «сухих суспензий» — однородных смесей лекарственных веществ со стабилизаторами, к которым добавляют необходимое количество растворителя непосредственно перед применением. «Сухие суспензии» чаще всего изготавливают в виде гранул или порошков для суспензий [9, с. 29—30].

Цель данной работы — разработка технологии и биофармацевтическая оценка invivo экспериментальных препаратов «Премелтоп» и «Ремелтоп».

Объекты исследования — порошки для приготовления суспензий для приема внутрь: «Премелтоп» (в 100,0 готовой к применению суспензии: метронидазола 0,75; преднизолона 0,05; лидокаина гидрохлорида 0,1; регенкура 4,0, ароматизатора, идентичного натуральному 0,5, натрия сахарината 0,24) для применения в фазу воспаления, «Ремелтоп» (в 100,0 готовой к применению суспензии: метилурацила 2,0; метронидазола 0,75; гиалуронидазы 128 ЕД; регенкура 4,0, ароматизатора, идентичного натуральному 0,5, натрия сахарината 0,24) для приема на этапе регенерации.

Принимая во внимание, что лекарственные формы для лечения ожогов должны производиться в соответствии с правилами GMP и отвечать требованию стерильности, проводили санитарную подготовку помещения, обработку оборудования и подготовку персонала к работе, а также подготовку лекарственных веществ и стерилизацию вспомогательных материалов.

Для получения препаратов в форме порошков для суспензий использовали традиционную технологию, включающую измельчение, просеивание, смешивание лекарственных средств и вспомогательных веществ в смесителе центробежного действия SC-1145 (Великобри­тания) в течение 5 минут.Полученную смесь просеивали через сито № 61 с целью уменьшения расслаивания порошка при хранении.

Препараты «Премелтоп» и «Ремелтоп» расфасовывали в стерильные полипропиленовые флаконы по 5,65 г и 7,50 г соответственно с навинчивающимися пластмассовыми крышками объемом 100 мл. На флаконе предусмотрена риска, до которой перед приемом лекарственной формы согласно инструкции по применению приливается вода или гиалуронидазы раствор, содержащий 128 ЕД.

Препараты анализировали согласно ГФ ХI, вып. 2, статьи «Порошки», «Гранулы» и «Суспензии», а также по таким показателям как сыпучесть и насыпная масса (ГФ XII), необходимым для фасовки препарата в первичную упаковку. При этом использовали общепринятые методики [3, 4, 7]. Статистическую обработку результатов проводили с использованием встроенных функций программы Excel из пакета OfficeXP (Microsoft, США).

На основании проведенных исследований разработана технологическая схема получения экспериментальных препаратов «Премелтоп» и «Ремелтоп» (рис.1), которая будет использована при разработке регламентов.

Рис. 1. Технологическая схема производства экспериментальных препаратов «Премелтоп» и «Ремелтоп» в форме порошков для приготовления суспензии для приема внутрь

Современными критериями оценки эффективности препаратов являются фармацевтическая и биологическая доступность, которые определяются в рамках биофармацевтической оценки лекарственных форм. Для лекарственных средств комплексного состава оценка биодоступности возможна только фармакодинамическим методом, который основан на изменении фармакодинамических или биохимических реакций на лекарственный препарат [1, с. 11]. На следующем этапе исследований проведена биофармацевтическая оценка экспериментальных препаратов фармакодинамическим методом на модели химического ожога у лабораторных животных. В качестве препаратов сравнения использовали жирогормональные смеси «Омпабал» в виде двух составов. Первый состав «Омпабал» включает преднизолона 0,04 г; бензокаина 3,0 г; метилурацила и натрия гидрокарбоната поровну по 6,0 г; тетрациклина 3 млн. ЕД; масла растительного 100,0 г, во втором составе вместо бензокаина используется гиалуронидаза 124 ЕД [5].

Модель химического ожога создавали на кроликах породы «Шиншилла» по следующей методике: после подготовки операционного поля у животных под глубоким эфирным наркозом проводили экскориацию эпидермального слоя кожи на идентичных участках площадью 1,5 см² (3 участка у каждого кролика), которые обрабатывали 70 % раствором уксусной кислоты. Экспериментальный препарат «Премелтоп» наносили на ожоговую поверхность в течение 7 суток с последующей обработкой раневой поверхности в течение 14 суток препаратом «Ремелтоп». В группе сравнения ожоговую поверхность первые 7 суток обрабатывали составом № 1 жирогормональной смеси «Омпабал», последующие 14 суток — составом 2 «Омпабал». Проводили забор ткани из ран в пределах здоровых тканей с последующим гемостазом и послойным зашиванием раны, готовили гистологические препараты, которые окрашивали гематоксилином и эозином, а также пикрофуксином по Ван-Гизон. В качестве фармакодинамического показателя для биофармацевтической оценки рассматривали увеличение толщины эпителиального пласта в процессе регенерации тканей.

Морфометрию толщины эпителиального пласта проводили с использованием графического пакета AxioVision 4.7LE (CarlZeiss, Germany). Межгрупповые различия оценивали по критерию Дана или по критерию Даннетта. За уровень статистической значимости принимали р<0,05. При статистической обработке результатов использовали компьютерную программу SigmaStat 3.5 для Windows, Systat Software, Inc., США, 2006.

На 10 сутки развития ожогового процесса у животных, леченных экспериментальными препаратами, преобладала зрелая соединительная ткань с умеренной коллагенизацией, при этом толщина эпителиального пласта составляла в среднем 26,1±1,33 мкм. В группе сравнения процессы регенерации были менее выражены, толщина эпителиального пласта 21,5±0,89 мкм, но данные различия между группами статистически не достоверны.

Рис. 2. Динамика регенерации эпителиального пласта

В экспериментальной группе на 14 сутки толщина эпидермиса составляла 46,4±1,04 мкм, в группе сравнения 31,6±1,96 мкм. Полученные различия статистически достоверны как между группами, так и с данными исследований толщины эпителиального пласта на 10 сутки внутри группы.

На 21 сутки у животных экспериментальной группы наблюдалась полная эпидермизация ожоговых поверхностей с толщиной эпидермиса 38,6±1,38 мкм. В группе сравнения у животных сохранялась слабая лейкоцитарная инфильтрация, завершающаяся эпидермизация зоны повреждения ожогом, а также происходили процессы формирования зрелой рубцовой ткани. Толщина эпидермиса в этой зоне составляла в среднем 29,7±1,82 мкм. Анализируемые показатели при кажущейся разнице как между группами, так и внутри группы на 14 и 21 сутки, статистически не достоверны, но статистически значимо отличались внутри группы от аналогичных показателей, полученных на 10 сутки эксперимента.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработана технология экспериментальных препаратов «Премелтоп» и «Ремелтоп» и проведена их биофармацевтическая оценка invivo фармакодинамическим методом на модели химического ожога на основе морфометрических показателей. Данные морфометрических исследований могут служить показателями фармакодинамической доступности комбинированных препаратов и препаратов местного действия.

Список литературы:

1. Воробьева В.М., Турецкова В.Ф. Биофармацевтическая оценка лекарственных препаратов: уч-мет. пособие. Барнаул: АГМУ, 2009. — 188 с.
2. Воробьева В.М., Полухин Д.Г., Лепилов А.В. и др. Ранозаживляющее действие новых лекарственных составов, предназначенных для лечения ожогов пищевода, в эксперименте // Экспериментальная и клиническая фармакология.— 2010. — № 2. — С. 31—34.
3. Государственная фармакопея Российской Федерации XII, ч.2 / Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2010. — 408 с: ил.
4. Государственная фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. — М.: Медицина,1989. — 400 с.
5. Жуков М.Д. Рационализаторское предложение на способ лечения химических ожогов пищевода смесью «Омпабал» в острый период //М.Д. Жуков, В.И. Оскретков / Удостоверение АГМУ № 860 от 28.11.1978 г.
6. Кожевников В.А., Полухин Д.Г., Лепилов А.В. и др. Сравнительная оценка лечения химических ожогов пищевода у детей жирогормональной смесью и лекарственной смесью на основе полимера регенкура // Детская хирургия. - 2008. - № 1. - С. 4—7.
7. Макхамов С.М. Основы таблеточного производства. Второе издание. — Ташкент: Фан, 2004.- 148 с.
8. Патент № 2286781 RU С 2 Способ лечения химических ожогов пищевода у детей/ Кожевников В.А., Воробьева В.М., Смирнов А.К., Турецкова В.Ф., Полухин Д.Г. (RU). Заявка № 2003121575/14, заявлено 11.07.2003., опубл. 10.11.2006.- Бюл. Изобретения. Полезные модели. — № 31 — 3 с.
9. Талыкова Н.М., Воробьева В.М., Турецкова В.Ф. Суспензии, эмульсии и линименты: уч.-мет. пособие. — Барнаул: Изд-во ГОУ ВПО АГМУ, 2010. — 124 с.