ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ЧУМЕ СОБАК

HISTOLOGICAL AND IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF LYMPH NODES IN CANINE DISTEMPER

Nurbek Aldaiarov

candidate of Vet. Sciences, Assistant Professor, Kyrgyz-Turkish Manas University, Kyrgyzstan, Bishkek

Lyudmila Lykhina

candidate of Vet. Sciences, Acting Assistant Professor, of Kyrgyz National Agrarian University named after K.I. Scriabin,

Kyrgyzstan, Bishkek

Abdirashit Marasulov

candidate of Biol. Sciences, Acting Associate Professor, Kyrgyz National University named after J. Balasagin,

Kyrgyzstan, Bishkek

АННОТАЦИЯ

С помощью гистологии и отдельных маркеров иммуногистохимии (CD3, CD79acy, MAC387, PCNA, AK10H3) изучено морфофункциональное состояние лимфатических узлов при чуме собак. Отмечены глубокие деструктивные изменения как в корковом, так и в мозговом веществах органа. Пролиферативная активность иммунных клеток фолликулярной и паракортикальной зон низкая, обнаруживались множественные клетки в состоянии апоптоза и мелкие апоптосомы. Вирусосодержащие клетки наблюдались в массовом виде В-зоне, в виде диффузной инфильтрации в Т-зоне коркового вещества и мозговом веществе.

ABSTRACT

The study was carried out by using histological method and immunohistochemical markers (CD3, CD79acy, MAC387, PCNA and AK10H3) studied morphofunctional state of lymph nodes in canine distemper. There were determined deep destructive alterations in cortex and medulla of organs. Proliferative activities of immune cells in follicular and paracortical zones were low and observed significant number of apoptotic cells and small apoptosomes. Massive virus inclusion cells were revealed in B-zone, and diffuse infiltration in T-zone of cortex and medulla of lymph node.

Ключевые слова: лимфатические узлы; морфофункциональное состояние; маркеры иммуногистохимии; чума собак.

Keywords: lymph nodes; morphofunctional state; immunohistochemistry markers; canine distemper.

Введение. Чума плотоядных является одной из коварных вирусных болезней собак, которая способна заражать большое количество диких и домашних животных [2, с. 277].

Вирус чумы плотоядных (ВЧП) – пантропный, не чувствительный к различным раздражителям вирус c одиночно-скрученной РНКой, относящиеся к роду морбилливирусов и семейству парамиксовирусов [6, с. 421; 9, с. 83]. Морбилливирусы, включая вирусов кори человека, чумы плотоядных, крупного рогатого скота и несколько других вирусов этого семейства, являются причиной многих опасных болезней человека и животных.

Одним из характерных свойств вируса чумы собак является эпителиотропизм, лимфотропизм и иммуносупрессорная природа [8, с. 5842], и благодаря такой способности вирус заражает практически все органы систем, тем самым вызывая мультисистемное поражение организма собаки.

K. Hirama и другие (2003) изучали цитотоксические Т-лимфоциты, специфические для протеина гемагглютинина ВЧП у собак. По мнению отдельных авторов [3, с. 450; 5, с. 10; 7, с. 11390; 8, с. 5848], специфический вход вируса вовнутрь лимфоцитов через универсальный рецептор морбилливирусов SLAM (signaling lymphocytic activation molecule, CD150) является определяющим фактором иммуносупрессии.

Лимфатические узлы расположены в разных участках организма на границе внутренней и внешней среды на путях возможного внедрения в организм антигенов [1, с. 5].

Суть данной научной работы – анализ морфофункционального состояния лимфатических узлов при заражении вирусом чумы собак с применением гистологических и иммуногистохимических методов микроскопирования.

Объекты и методы исследования. Данная работа выполнялась в Кыргызском национальном аграрном университете им. К.И. Скрябина (Кыргызская Республика), Институте ветеринарной патологии высшей ветеринарной школы города Ганновера (ФРГ, 2004) и в Институте ветеринарной патологии Цюрихского университета (Швейцария, 2007–2008).

Тканевые пробы от лимфатических узлов были получены от 58 собак, больных чумой, в течение 2004–2007 года в г. Бишкеке и зафиксированы в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина. Обезвоживание кусочков производилось в специальной машине в вакууме.

Серийные срезы готовились на полуавтоматическом микротоме новой модификаций толщиной 2–4 мкм.

Для общего обзора гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Для иммуногистохимии восстановление антигена производили с помощью автоклава Паскаль (20 минут, +98⁰С и 2 минуты при +125⁰С под давлением) при использовании антиген восстанавливающих буферных растворов PH 9.0 (EDTA или основной буферный раствор PH 9.0) и цитратный буфер (PH 6.0) в соответствии с инструкцией производителя. Был использован SABC (Streptavidin and Biotinylated horseradish peroxidase macro-molecular Complex) метод иммуногистохимии.

Для выявления Т-лимфоцитов использовали антитело Polyclonal Rabbit Anti-Human T cell, CD 3; для выявления В-лимфоцитов – антитело Monoclonal Mouse Anti-Human B cell, CD 79ά cy; для выявления макрофагов – антитело Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloid/Histocyte Antigen, Clon MAC 387; для выявления пролиферацию клеток – антитело Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA); для выявления ВЧП использовали антитело – mono AK 10H3.

Окрашивание производили вручную в специальной влажной камере. Срезы дополнительно окрашены гематоксилином Майера. При положительной реакции клетки были окрашены в красный или коричневый цвета.

Результаты исследования. Микроскопический, основные патологические альтерации отмечаются в Т- и В-зонах коркового вещества органа. Оно сильно атрофировано, картина между фолликулярной и паракортикальной зонами стерты. Обе зоны истощены и заселены диффузной лимфоидной тканью, где встречаются большое количество клеток в состоянии апоптоза и мелкие апоптосомы, которые в основном хорошо просматриваются в фолликулярной зоне (рис. 1А). Пролиферативная активность клеток лимфоидной ткани по всей паренхиме лимфатического узла низкая (рис. 1Б). В обеих зонах диффузно и компактно отмечаются активизированные макрофаги (рис. 1В). В отдельных участках коркового вещества лимфатического узла наблюдаются некротизированные массы в местах расположений лимфоидных фолликул. На иммуногистохимический маркер ВЧП дают позитивную реакцию в массовом порядке клетки фолликулярной зоны коркового вещества (рис. 1Г), а в паракортикальной зоне и в мозговом веществе ВЧП позитивные клетки расположены диффузно. Т- и В-лимфоциты по всей паренхиме располагаются диффузно или малыми группами (рис. 1Д, Е). Из-за истощений лимфоидной ткани в паренхиме органа хорошо просматривается эндоэпителиальный остов органа.

Рисунок 1. Парафиновые срезы лимфатического узла собаки зараженной ВЧП

Микроструктурные изменения паренхимы лимфатического узла:. А – фолликулярная зона коркового вещества с рыхлой лимфоидной тканью. Гем. и эозин. x250; Б – низкая пролиферативная активность лимфоидной ткани органа. PCNA. х125; В – диффузная инфильтрация макрофагами коркового вещества органа. MAC387. х62,5; Г – ВЧП позитивные клетки коркового вещества органа. AK 10H3. х62,5; Д – истощение CD3 позитивных клеток в паракортикальной зона коркового вещества органа. CD3. х125; Е – В-клетки в фолликулярной зоне коркового вещества органа. CD79αсу. Х125.

В заключение анализируя данные собственных исследований и сравнивая их с данными литературных источников, можно сказать, что чума плотоядных, являясь мультисистемной болезнью, имеет очень сложный патогенез. Система местного иммунитета и основные периферические лимфоидные органы не справляются с этой болезнью за счет уникальной способности данного вируса. Лимфоидные клетки при встрече с вирусом заражаются ими и они, генетически изменяясь, не выполняют свои непосредственные функции, циркулируя по кровеносным и лимфатическим сосудам, поражают остальные периферические органы иммуногенеза. Развивается прогрессирующий иммунодефицит организма. Тому свидетельствуют морфологически количественные и качественные изменения лимфоидной ткани в лимфатических узлах.

Список литературы:

1. Сапин М.Р. Лимфатический узел как орган иммунной системы / В кн.: Современный проблемы регенерации. – Йошкар-Ола. 1982. – С. 5–13.
2. Appel M.J.G. et al. Canine distemper epizootic in lions, tigers and leopards in North America // J. Vet. Diag. Inves., 1994. 6. – P. 277–288.
3. Erlenhoefer C. et al. CD150 (SLAM) is a receptor for measles virus but is not involved in viral contact-mediated proliferation inhibition // J. Virology, 2001. 75. – P. 4499–4505.
4. Hirama K. et al. Cytotoxic T-lymphocyte activity specific for hemagglutinin (H) protein of canine distemper virus in dogs //J. Vet. Med. Sci., 2003. 65(1). – P. 109–111.
5. Hsu E.C. et al. CDw150 (SLAM) is a receptor for a lymphotropic strain of measles virus and may account for the immunosuppressive properties of this virus // J. Virology, 2001. – P. 279. 9–12.
6. Pringle C.R. Virus taxonomy // J. Arch. Virol., 1999. 142 (2). – P. 421–429.
7. Takimoto T. et al. Role of matrix and fusion proteins in budding of Sendai virus // J. Virology, 2001. 75. – P. 11384–11391.
8. Tatsuo H., Ono N., Yanagi Y. Morbiliviruses use signaling lymphocyte activation molecules (CD150) as cellular receptors // J. Virology, 2001. 75 (13). – P. 5842–5850.
9. Wünschmann A., Kremmer E., Baumgärtner W. Phonotypical characterization of T and B cell areas in lymphoid tissue of dogs with spontaneous distemper // J. Vet. Immunology and Immunopathology, 2000. 73. – P. 83–98.