КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВАКЦИННОГО ШТАММА TRICHOPHYTON SARKISOVII F- 0080

АННОТАЦИЯ

В статье приведены данные о культурально-морфологических и биологических свойства вакцинного штамма Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ», предназначенного для изготовления биологических препаратов против трихофитии верблюдов.

ABSTRACT

In clause are resulted the characteristic vaccinal stamen Trichophyton sarkisovii F-0080 «KazNIVI» for manufacturing biological preparations against trichophytosis camеlsis.

Благоприятные кормовые и климатические условия пустынных и полупустынных зон определили широкое развитие верблюдоводства в Республике Казахстан. Территория нашей страны богата полупустын­ными и пустынными пастбищами, на которых можно развивать верблюдоводство без ущерба для других отраслей животноводства. Развитие верблюдоводства создает крупные резервы производства мяса, шубата, кумырана и шерсти. Значительный экономический ущерб развитию данной отрасли наносят инфекционные болезни, среди которых наиболее распространены грибковые, в частности трихофития. Распространение трихофитии среди верблюдов является сдерживающим фактором в обеспечении страны продуктами живот­новодства. Данное заболевание усугубляет также эпидемиологическую обстановку среди населения. Одним из действенных методов борьбы с трихофитией является вакцина. В настоящее время для изготовления инактивированной вакцины против указанной инфекции используется штамм гриба Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ».

Указанный штамм выделен из поверхности кожного покрова больного трихофитией верблюда, принадлежавшего верблюдовод­ческому хозяйству «K/X Agro Mercur» Енбекши-Казахского района Алматинской области.

Вакцинный штамм Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ», депонирован в 2009 году в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО «КазНИВИ».

В настоящее время изучены основные биологические свойства выделенных культур возбудителей дерматомикозов сельскохозяйствен­ных животных. Выделенные культуры возбудителей дерматомикозов идентифицированы с помощью определителя патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов по В.П.Кашкину и др. [1, 2]. После очищения полученного из патологического материала культуру гриба засевали в суслоагар и помещали в термостат на 21 день при температуре 28 ^оС. Из отдельной колонии проводили клонирование (пересев) и селекцию культуры гриба до увеличения спорообразующей способности и снижения патогенных и вирулентных свойств. Параллельно методом разведения выделяли клон названного гриба, выросшего на чашки Петри с суслоагаром, который при дальнейшем посеве давал наибольший рост. Накопление в биологической массе количество макро- и микроконидии определяли в камере Горяева по общепринятой методике. Вакцинный штамм Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ» получен путем направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования быстрорастущих колоний с активным накоплением микроконидий. Полученный штамм отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спороген­ностью и иммуногенной активностью при внутримышечном введении.

Культура возбудителя трихофитии верблюдов характеризуется определенными признаками, особенности которых заключаются в том, что первичные генерации культур развиваются медленно, образуя ограни­ченно растущие колонии с однообразной и бедной морфологией. Среди культурально-морфологических признаков культуры можно отметить основные особенности:

• колонии сероватые, бежевые, восковидные, кожистые, рыжеватые, радиальные;
• имеется коричневый пигмент, диффундирующий в питательную среду;
• умеренное образование артроспор и хламидоспор;
• отсутствие конидиального спороношения микроконидий и макроконидий;
• мицелий ровный или с обильным ветвлением конечных гиф в виде «рогов северного оленя».

Культурально-морфологические особенности трихофитона характеризуются большой изменчивостью. Варьируют в зависимости от состава питательной среды, на которой выращивается культура, возраста и длительности культивирования в лабораторных условиях.

На суслоагаре в первичных культурах были отмечены следующие типы колоний:

• плоские ровные колонии с широкой зоной погруженного роста, покрытого паутинистым мицелием, кожистые, кремовые 13-15 мм;
• бугристые колонии, кожисто-восковидные, коричневые диаметром 4-6 мм;
• кожистые, кремовые, плоские колонии, в центре нарастание белого бархатистого мицелия диаметром 5-7 мм.

Колонии всех типов плотно срастаются с питательной средой. На суслоагаре в культурах в основном преобладает ровный мицелий, артроспоры немногочисленны.

Для возбудителя трихофитии верблюдов при культивировании характерны ветвление конечных гиф в виде «рогов северного оленя».

При многократных пересевах культур на питательных средах у штамма Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ» изменяются культу­ральные признаки, но сохраняется стабильность первоначальных свойств, и остаются медленнорастущие кожистые колонии.

При пассировании культуры трихофитона воздушная часть колоний становится бархатистой, ровной, мицелий белый, микроконидии округлые, овальные и грушевидной формы с обрубленным базальным кончиком, образуются латерально на конечных частях гиф. Макро­конидии появляются крайне редко, имеют удлиненно-овальную форму, состоят из 2-6 клеток, размером 5-10х 16-50 мкм. Количество артроспор и хламидоспор уменьшается, мицелий становится ровнее и тоньше.

Изменчивость культурально-морфологических признаков отмеча­ется при культивировании штамма F-0080 при разных температурах. Культура хорошо развивается при температуре 28 ^оС. Влияние витаминов на рост культуры показало, что витамины не стимулируют рост культур.

Получены клоны культур с определенными свойствами селекционным методом ступенчатого отбора, которые сохраняют стабильность необходимых признаков во многих генерациях.

При культивировании на питательных средах была отмечена вариабельность культурально-морфологических свойств культур Tr. sarkisovii F-0080. Встречаются в составе гриба несколько морфо­логических вариантов с различными культурально-морфологическими признаками и уровнем спорообразования. В связи с этим трудно получить штаммы со стабильными признаками.

Селекционный метод ступенчатого отбора культур дал нам возможность выявить наиболее активные варианты стабилизации состава популяции и повышения уровня спорообразования. Выделенный штамм был типичным по культурально - морфологическим признакам. Колонии на суслоагаре – серовато-бежевые, кожисто-бархатистые, неправильно – складчатые, растущий край дольчатый. Микроконидии единичные, овальной и округлой формы, образуются на конечных частях гиф, размеры 3-6 х 4-10 мкм, гифы прямые ровные с редкими перегородками, шириной 2,5-10 мкм, отмечается ветвление конечных гиф в виде «рогов северного оленя», артроспоры в ветвящихся цепочках, в диаметре 6-10 мкм, хламидоспоры одиночные в диаметре 7- 16 мкм.

Штамм гриба Trichophyton sarkisovii F-0080 «КазНИВИ» безвреден для верблюдов, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 10⁶ микро­конидий при внутримышечном введении.

При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 10⁶ микроконидий создается напряженный иммунитет у привитых верблюдов, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией продолжительностью не менее 12 месяцев.

У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-1,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение 14 суток.

Основные биологические свойства штамма гриба Trichophyton F‑0080 «КазНИВИ» стабильно сохраняются на протяжении 1 года при условии редких пересевов, при этом иммуногенные свойства не ослабевают (срок наблюдения).

Штамм сохраняется в лиофилизированном состоянии в присутствии 10 % сахарозы и 1,5 % желатина или жидкого обезжиренного молока и не снижает активности при температуре +2+10 ^оС в течение 12 месяцев.

Для приготовления биологических препаратов против трихофитии верблюдов используют 18-21 дневные культуры штаммов, выращенные в матрасных колбах на суслоагаре (рН 7,2-7,4) при температуре 28 ^оС в течение 18 сут.

Для профилактической иммунизации лиофилизированная вакцина применяется двукратно с интервалом 14 дней, растворяется в физио­логическом растворе хлористого натрия (рН 7,2-7,4). Больным животным вводится двукратно с интервалом 14 дней в удвоенной или утроенной профилактической дозе в зависимости от степени заражения.

Приготовленный таким образом гомогенат из вакцинного штамма F-0080 «КазНИВИ» позволяет надежно профилактировать заболеваемость верблюдов от дерматомикозной инфекции.

Список литературы:

1. Кашкин П.Н. и др. Определитель патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов. Ленинград «Медицина», 1979. - С. 13-75.
2. Кашкин П.Н., Лисин В.В. Практическое руководство по медицинской микологии. Ленинград «Медицина», 1983. - С. 166-168.